發(fā)布時間：2020-10-16 18:05

　　 一氧化氮 (NO)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新型植物信號分子。以硝普鈉 (Sodiumnitroprusside ,SNP)為一氧化氮 (NO)的供體 ,研究外源NO對金絲桃懸浮細胞生長及金絲桃素生物合成的影響。試驗結果表明 ,金絲桃懸浮細胞在含 0 5和 15 0mmol LSNP的培養(yǎng)基中培養(yǎng) 2 0d后 ,細胞的干重分別為對照組的 14 0 %和 5 0 % ;細胞中金絲桃素的含量分別為對照組的 98%和2 10 %。試驗結果表明 ,低濃度SNP處理有利于金絲桃懸浮細胞生長 ,而高濃度SNP可以促進金絲桃素的合成。在細胞培養(yǎng)初期 (0d)加入 0 5mmol LSNP并在指數(shù)生長后期 (1
【部分圖文】：

在細胞接種前分別向培養(yǎng)基中添加0·5、15·0mmol/L的SNP和20mmol/L的NO淬滅劑CPI-TO,考察不同濃度的NO對金絲桃懸浮細胞生長的影響,結果見圖1。試驗結果表明,低濃度的SNP(0·5mmol/L)對金絲桃懸浮細胞的生長具有明顯的促進作用,表現(xiàn)為細胞生長的延滯期縮短;細胞生長速率和細胞干重大于對照(圖1)。高濃度SNP(15·0mmol/L)對金絲桃懸浮細胞的生長則具有明顯的抑制作用。CPITO(2-4-carboxyphenyl-4,4,5,5-tetra-methylimidazoline-1-oxyl-3-oxide)能夠快速并且專一地與NO反應,是一種常用的NO淬滅劑[15,16]。為了進一步驗證添加SNP對金絲桃懸浮細胞生長的影響是否確實由其分解產(chǎn)物NO引起,在添加不同濃度SNP的同時加入了20mmol/L的CPITO。試驗結果表明,在CPITO存在的情況下,添加15·0mmol/L SNP不影響金絲桃懸浮細胞的生長(圖1),說明SNP是通過其分解產(chǎn)物NO影響金絲桃懸浮細胞的生長。

在添加不同濃度SNP培養(yǎng)基中生長的金絲桃細胞中金絲桃素含量的變化情況如圖2所示。培養(yǎng)基中添加15·0mmol/L的SNP可以顯著提高單位重量金絲桃細胞中的金絲桃素含量,而添加0·5mmol/L的SNP對金絲桃細胞中金絲桃素的含量無影響。試驗結果同時表明,在CPITO存在的情況下,添加15·0mmol/L的SNP不影響金絲桃懸浮細胞中金絲桃素的含量(圖2),表明SNP是通過其分解產(chǎn)物NO促進金絲桃懸浮細胞中金絲桃素的合成。

金絲桃素是金絲桃植物中的黃酮甙類化合物[17]。苯丙烷代謝途徑是金絲桃素等黃酮類次生代謝物質生物合成的共同途徑,苯丙氨酸解氨酶(PAL)是苯丙烷代謝途徑的主要關鍵酶之一[21]。本文考查了不同濃度SNP對金絲桃懸浮細胞中PAL活性的影響,實驗結果見圖3。與對照相比,添加高濃度SNP(15·0mmol/L)可以顯著提高金絲桃懸浮細胞中PAL活性(圖3)。在15·0mmol/L的SNP處理30min后,金絲桃細胞中PAL活性開始出現(xiàn)增加,并且在第8~9天時達到最高,比相同培養(yǎng)時期的對照細胞中的PAL活性高出4倍多(圖3)。SNP對金絲桃懸浮細胞中PAL活性的促進作用亦可被CPITO所抑制(圖3),說明SNP也是通過其分解產(chǎn)物NO影響細胞中PAL活性的。
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