目的:通過膀胱灌注觀察慢病毒轉(zhuǎn)染膀胱的效果并確定能取得較好轉(zhuǎn)染效果的病毒量;制備豚鼠糖尿病膀胱病變（Diabetic cystopathy,DCP）模型,經(jīng)尿道膀胱灌注干細(xì)胞白血病基因（SCL基因）慢病毒,觀察其轉(zhuǎn)染效果并檢測SCL的表達(dá)。為進(jìn)一步探究DCP的臨床治療奠定基礎(chǔ)。方法:1.豚鼠經(jīng)尿道灌注及靜脈注射不同量的攜帶綠色熒光的慢病毒,飼養(yǎng)7d后取膀胱、肝、肺、腎等組織冰凍切片,激光共聚焦顯微鏡下觀察各組織綠色熒光的分布;確定能取得較好膀胱轉(zhuǎn)染效果且膀胱外組織無明顯綠色熒光分布的病毒量。2.通過單次腹腔注射鏈脲佐菌素構(gòu)建豚鼠DCP膀胱模型,篩選15只分為兩組（12/3只）用于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn);實(shí)驗(yàn)組豚鼠經(jīng)尿道灌注SCL慢病毒,分別于灌注結(jié)束后第2d、7d、14d、28d取膀胱組織,設(shè)空白對照組不予處理直接取膀胱組織;組織冰凍切片后在激光共聚焦顯微鏡下觀察綠色熒光的分布,q RT-PCR法檢測SCL基因的表達(dá),并比較各組間是否存在差異。結(jié)果:1.滴度為4×108TU/ml的慢病毒,經(jīng)尿道膀胱灌注30μl量時可見膀胱組織黏膜下有綠色熒光、40μl量時組織肌層有廣泛綠色熒光分布、50μl量時組... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語表
前言
材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 攜帶綠色熒光慢病毒轉(zhuǎn)染豚鼠膀胱
        2.2.2 構(gòu)建DCP豚鼠模型
        2.2.3 SCL慢病毒轉(zhuǎn)染DCP膀胱
    2.3 統(tǒng)計學(xué)方法
結(jié)果
    3.1 攜帶綠色熒光慢病毒轉(zhuǎn)染豚鼠膀胱
        3.1.1 膀胱組織綠色熒光分布
        3.1.2 膀胱外組織綠色熒光分布
    3.2 豚鼠DCP模型構(gòu)建
    3.3 SCL慢病毒轉(zhuǎn)染DCP膀胱
        3.3.1 激光共聚焦顯微鏡下觀察慢病毒轉(zhuǎn)染效果
        3.3.2 灌注后不同時間點(diǎn)膀胱組織中SCL基因的表達(dá)
討論
    4.1 SCL基因的功能
    4.2 DCP的臨床治療手段及基因治療研究前景
    4.3 慢病毒載體介導(dǎo)GFP轉(zhuǎn)染豚鼠膀胱
    4.4 SCL慢病毒轉(zhuǎn)染DCP膀胱
        4.4.1 豚鼠DCP膀胱模型制備
        4.4.2 SCL慢病毒轉(zhuǎn)染DCP膀胱的效果
    4.5 局限性與展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡介
石河子大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評閱表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]慢病毒介導(dǎo)RNA干擾沉默F(xiàn)as基因在臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)[J]. 王露,翟瑋瑋,楊向榮,王芳,李見,張強(qiáng),李玉云.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2014(10)
[2]高糖環(huán)境對豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)向電流的影響[J]. 徐禮臻,王勤章,韓濤,丁國富,馬克濤,王江平.  山東醫(yī)藥. 2011(34)
[3]應(yīng)用AdMax載體系統(tǒng)構(gòu)建SCL基因重組腺病毒表達(dá)載體[J]. 周建民,丁國富,王勤章,劉新軍,劉永國.  中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志. 2011(17)
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[5]高糖環(huán)境對豚鼠膀胱ICCs細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響[J]. 范勇洪,丁國富,王勤章,李云飛,蔡志強(qiáng).  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2009(23)
[6]豚鼠膀胱Cajal樣細(xì)胞在高糖環(huán)境中的形態(tài)學(xué)變化[J]. 蔡志強(qiáng),王勤章,丁國富,李云飛,范勇洪.  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2009(22)
[7]早期糖尿病膀胱尿動力學(xué)及cajal樣細(xì)胞的變化和意義[J]. 李云飛,王勤章,丁國富.  臨床泌尿外科雜志. 2009(09)
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[9]用慢病毒載體制備轉(zhuǎn)基因動物的研究進(jìn)展[J]. 鄧?yán)^先,沈偉.  中國生物工程雜志. 2004(09)
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碩士論文
[1]豚鼠糖尿病膀胱ICC樣細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化的研究[D]. 李維仁.石河子大學(xué) 2008



本文編號：2899367