【摘要】：【目的】克隆耐冷菌假交替單胞菌(Pseudoalteromonas sp.DL-6)的幾丁質(zhì)酶基因并進行原核表達,純化重組蛋白并研究其酶解產(chǎn)物�！痉椒ā坎捎肞CR擴增法從Pseudoalteromonas sp.DL-6中克隆幾丁質(zhì)酶基因(chi A),連接到表達載體p ET28a,導入Escherichia coli BL21(DE3)進行誘導表達。SDS-PAGE檢測幾丁質(zhì)酶Chi A的分子量與純度,4-甲基傘形酮熒光底物4MU-(Glc NAc)2測定酶活,電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)檢測酶解產(chǎn)物�！窘Y(jié)果】chi A基因(Gen Bank登錄號KF234015)在大腸桿菌中高效表達,Ni-NTA親和層析柱純化幾丁質(zhì)酶Chi A的總活力可達168.68 U。ESI-MS檢測結(jié)果表明重組蛋白酶解1%膠體幾丁質(zhì)的產(chǎn)物為幾丁寡糖�！窘Y(jié)論】利用內(nèi)切幾丁質(zhì)酶Chi A水解幾丁質(zhì)生產(chǎn)幾丁寡糖,為其在食品、醫(yī)藥和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域的潛在應(yīng)用提供有利參考。
[Abstract]:[objective] to clone the chitinase gene of Pseudomonas alternata (Pseudoalteromonas sp.DL-6) and express it in prokaryotic cells. The recombinant protein was purified and its hydrolyzed product was studied. [methods] chitinase gene (chi A), was cloned from Pseudoalteromonas sp.DL-6 by PCR amplification and ligated to the expression vector p ET28a,. The molecular weight and purity of chitinase Chi A were detected by SDS-PAGE, and the activity of 4MU- (Glc NAc) 2 was determined by 4MU- (Glc NAc) 2. Electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) was used to detect the enzymolysis products. [results] chi A gene (Gen Bank accession number KF234015) was highly expressed in Escherichia coli. The total activity of purification of chitinase Chi A by Ni-NTA affinity chromatography can reach 168.68 U.ESI-MS. The result shows that the product of recombinant proteolysis of 1% colloidal chitin is chitin oligosaccharide. [conclusion] using endo-chitinase. Chi A hydrolyzes chitin to produce chitin oligosaccharide, It provides a useful reference for its potential application in food, medicine and agriculture.
【作者單位】： 大連大學生命科學與技術(shù)學院;
【基金】：國家自然科學基金項目(No.31500039) 遼寧省大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目(No.201511258003)~~
【分類號】：Q78;Q55

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