發(fā)布時(shí)間：2018-03-03 19:12

  本文選題：食管鱗狀上皮細(xì)胞癌　切入點(diǎn)：hsa-miR-328　出處：《鄭州大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景食管癌是中國(guó)常見的惡性腫瘤之一,發(fā)病率在中國(guó)排在惡性腫瘤的第五位。其特點(diǎn)是預(yù)后差,死亡率高,死亡率居中國(guó)惡性腫瘤的第四位。食管癌的病理類型主要為腺癌和鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)。在我國(guó),ESCC占食管癌的90%。盡管多項(xiàng)研究對(duì)于ESCC的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了廣泛的探討,但是其發(fā)生發(fā)展機(jī)制目前仍不清楚。食管癌患者就診時(shí)多處于中晚期,相當(dāng)部分的病人已不能手術(shù)治療,總的五年生存率非常低。因此,深入研究ESCC的發(fā)生發(fā)展機(jī)制,對(duì)于提高ESCC的診斷和預(yù)后具有重要的意義。微小RNA(miRNA)含有21~25個(gè)核苷酸,是一類高度保守的內(nèi)源性非編碼小分子RNA,與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。miRNA的作用機(jī)制主要是與靶m RNA的3’非編碼區(qū)(3'-untranslated region,3'-UTR)或5’非編碼區(qū)(5'-untranslated region,5'-UTR)結(jié)合,最終負(fù)性調(diào)控靶基因的表達(dá)。Hsa-miR-328來源于人染色體16q22.1,可調(diào)節(jié)多種腫瘤細(xì)胞的增殖與侵襲轉(zhuǎn)移,與多種腫瘤如非小細(xì)胞肺癌、胃癌、前列腺癌、惡性黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系。但是,hsa-miR-328在ESCC中的表達(dá)及其對(duì)ESCC發(fā)生發(fā)展的影響未見報(bào)道。研究目的探討hsa-miR-328及其靶基因磷脂酶Cε1(Phospholipase C epsilon 1,PLCE1)在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其相關(guān)機(jī)制。研究方法:1、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative real-time PCR,QRT-PCR)技術(shù)檢測(cè)并比較了hsa-miR-328在82例ESCC患者癌組織與配對(duì)的癌旁組織中的表達(dá),分析了hsa-miR-328的表達(dá)與ESCC患者預(yù)后的關(guān)系,統(tǒng)計(jì)了hsa-miR-328與ESCC患者的性別、年齡、腫瘤位置、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和TNM分期之間的關(guān)系。2、QRT-PCR技術(shù)檢測(cè)了hsa-miR-328在不同食管上皮細(xì)胞系中的表達(dá),增殖實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)和transwell分別檢測(cè)了hsa-miR-328對(duì)人食管鱗癌細(xì)胞EC109和EC9706增殖、凋亡、遷移和侵襲功能的影響。QRT-PCR技術(shù)檢測(cè)了hsa-miR-328對(duì)EC109和EC9706細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記物表達(dá)的影響。小管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了hsa-miR-328在EC109和EC9706細(xì)胞的表達(dá)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC小管形成的影響,增殖實(shí)驗(yàn)和transwell分別檢測(cè)了hsa-miR-328在EC109和EC9706細(xì)胞的表達(dá)對(duì)HUVEC細(xì)胞增殖和遷移功能的影響。3、采用生物信息學(xué)方法、免疫印跡和QRT-PCR預(yù)測(cè)并鑒定了hsa-miR-328的靶點(diǎn)。采用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)和transwell觀察了PLCE1對(duì)EC109和EC9706細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲功能的影響。4、采用QRT-PCR和免疫組織化學(xué)檢測(cè)并比較了PLCE1在82例ESCC患者癌組織與配對(duì)的癌旁組織中的表達(dá),分析了PLCE1的表達(dá)與ESCC患者預(yù)后的關(guān)系,統(tǒng)計(jì)了PLCE1與ESCC患者的性別、年齡、腫瘤位置、腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和TNM分期之間的相關(guān)性,分析了癌組織與癌旁組織中hsa-miR-328與PLCE1表達(dá)的相關(guān)性。研究結(jié)果:1、與配對(duì)的癌旁組織比較,hsa-miR-328在食管癌組織中的表達(dá)顯著降低(P0.05);64.6%的患者中,hsa-miR-328在癌組織中的表達(dá)低于配對(duì)的癌旁組織,35.4%的患者中,hsa-miR-328在癌組織中的表達(dá)高于配對(duì)的癌旁組織;Hsa-miR-328表達(dá)上調(diào)患者(hsa-miR-328在癌組織中的表達(dá)高于配對(duì)的癌旁組織)的生存期顯著高于hsa-miR-328表達(dá)下調(diào)患者(hsa-miR-328在癌組織中的表達(dá)低于配對(duì)的癌旁組織)(P0.05);Hsa-miR-328的表達(dá)與性別、年齡和腫瘤位置無相關(guān)性,與腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度和TNM分期呈負(fù)相關(guān)(P0.05)。2、同人正常食管上皮細(xì)胞HEEC比較,EC109和EC9706中hsa-miR-328的表達(dá)顯著降低(P0.05);慢病毒轉(zhuǎn)染LV-miR-328顯著增加ESCC細(xì)胞內(nèi)hsa-miR-328的表達(dá)(P0.05),慢病毒轉(zhuǎn)染LV-anti-miR-328顯著降低ESCC細(xì)胞內(nèi)hsa-miR-328的表達(dá)(P0.05);同LV-NC組比較,LV-miR-328組細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲功能顯著降低(P0.05),LV-anti-miR-328組細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲功能顯著增加(P0.05);凋亡檢測(cè)表明,同LV-NC組比較,LV-miR-328組的細(xì)胞凋亡比例顯著增加(P0.05),LV-anti-miR-328組的細(xì)胞凋亡比例顯著降低(P0.05);同LV-NC組比較,LV-miR-328組和LV-anti-miR-328組細(xì)胞的E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白和波形蛋白的表達(dá)均無顯著改變(P0.05);同LV-NC組比較,LV-miR-328組和LV-anti-miR-328組的HUVEC細(xì)胞的小管形成能力、增殖能力和遷移能力無顯著改變(P0.05)。3、生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)PLCE1是hsa-miR-328的潛在靶點(diǎn);雙熒光素酶檢測(cè)、免疫印跡和QRT-PCR結(jié)果表明,PLCE1是hsa-miR-328的靶點(diǎn);成功構(gòu)建了p CDNA3/PLCE1高表達(dá)載體;同對(duì)照組比較,p CDNA3/PLCE1組細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲功能顯著增加(P0.05),細(xì)胞凋亡比例顯著降低(P0.05);同LV-miR-328組比較,LV-miR-328+p CDNA3/PLCE1組細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲功能顯著增加(P0.05),細(xì)胞凋亡比例顯著降低(P0.05)。4、與配對(duì)的癌旁組織比較,PLCE1在食管癌組織中的表達(dá)顯著增加(P0.05);62.2%的患者中,PLCE1在癌組織中的表達(dá)高于配對(duì)的癌旁組織,37.8%的患者中,PLCE1在癌組織中的表達(dá)低于配對(duì)的癌旁組織;PLCE1表達(dá)上調(diào)患者(PLCE1在癌組織中的表達(dá)高于配對(duì)的癌旁組織)的生存期顯著低于PLCE1表達(dá)下調(diào)患者(PLCE1在癌組織中的表達(dá)低于配對(duì)的癌旁組織)(P0.05);PLCE1的表達(dá)與同性別、年齡、腫瘤位置和分化程度無相關(guān)性,與腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期呈正相關(guān)(P0.05);在ESCC患者的癌組織與癌旁組織中,hsa-miR-328與PLCE1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P0.01)。結(jié)論:ESCC癌組織中hsa-miR-328的表達(dá)降低,可增加PLCE1的表達(dá),繼而促進(jìn)ESCC細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,抑制ESCC細(xì)胞的凋亡,這可能是ESCC發(fā)生發(fā)展的機(jī)制之一。
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【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.1

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1 韓娜;Hsa-miR-328及其靶基因PLCE1在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制探討[D];鄭州大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：1562322