發(fā)布時間：2016-12-05 10:23

  本文關(guān)鍵詞：納米金與藥物分子的相互作用研究及應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《西南大學(xué)》 2013年

DNA甲基化檢測與銀離子識別的新方法研究

王剛林  

【摘要】：DNA甲基化是一種重要的表觀遺傳學(xué)性質(zhì),在細胞分化,調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄和修復(fù)等生物過程起著重要作用,由于其與很多疾病例如癌癥有直接關(guān)系,因此成為當(dāng)前研究的熱點課題。金納米棒(GNRs)因其各向異性結(jié)構(gòu)和獨特的光譜特征而倍受化學(xué)研究者青睞,得到飛速的發(fā)展,廣泛應(yīng)用于金屬離子和氨基酸檢測、免疫分析、DNA序列分析、癌細胞成像和光熱治療以及納米材料組裝等領(lǐng)域。水體重金屬污染具有持久性、高度危害性和難治理性,如何快速、準確監(jiān)測并對其進行科學(xué)評價,成為當(dāng)今環(huán)境科學(xué)關(guān)心的熱點問題。銀離子是一種高毒性且在環(huán)境中污染相當(dāng)普遍的金屬離子,開發(fā)靈敏檢測Ag+的方法十分重要�；�于以上所述,本文開展了以下研究工作： 1.電化學(xué)策略檢測DNA甲基化和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性 發(fā)展了一種免標記的電化學(xué)檢測DNA甲基化的技術(shù),該方法首先在金電極上構(gòu)構(gòu)筑一個電化學(xué)DNA傳感器,以六氨合釕(RuHex)為電化學(xué)信號指示劑,當(dāng)電極表面的DNA在特定位點被甲基化后,能夠被特異性的酶切割,從而脫離電極表面,導(dǎo)致電化學(xué)傳感器的電化學(xué)信號降低。甲基轉(zhuǎn)移酶的活性與電化學(xué)信號成一定線性關(guān)系,從而實現(xiàn)了對DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性的測定。該方法對Dam甲基轉(zhuǎn)移酶的活性檢測區(qū)間為0.25-10U/mL,檢測限為0.18U/mL(S/N=3),在此基礎(chǔ)上,我們將此方法進一步用于篩選DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的抑制劑,為新的抗癌藥物的篩選提供了一種新的思路。 2.熒光共振能量轉(zhuǎn)移法檢測DNA甲基化和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性 基于金納米棒與不同長度的DNA鏈相互作用熒光共振能量轉(zhuǎn)移效率的差別,發(fā)展了一種熒光檢測DNA甲基化的新方法。當(dāng)形成DNA雙鏈時,金納米棒與DNA雙鏈之間的靜電作用很強,從而導(dǎo)致熒光標記的DNA熒光猝滅,當(dāng)雙鏈被甲基轉(zhuǎn)移酶甲基化后,能夠被核酸內(nèi)切酶切割成小的片段DNA,片段DNA與金納米棒之間的靜電作用很弱,從而導(dǎo)致熒光恢復(fù),通過熒光的恢復(fù)程度,來實現(xiàn)對DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性和甲基轉(zhuǎn)移酶抑制物的分析,該方法對DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性的檢測限可以達到0.5U/mL,具有簡單、快速、選擇性良好等特點。 3.以金納米棒為信號探針構(gòu)建DNA生物傳感器檢測Ag+ 利用金納米棒與DNA單鏈和DNA雙鏈的靜電作用力不同,構(gòu)建了一個新的Ag+生物傳感器。隨著Ag+的加入,C-C錯配的堿基對形成C-Ag+-C結(jié)構(gòu),導(dǎo)致DNA電荷密度增大,從而使得與金納米棒之間靜電作用增強,引起金納米棒的團聚,并導(dǎo)致金納米棒的橫向紫外吸收峰降低。通過金納米棒紫外吸收的信號的變化實現(xiàn)對銀離子檢測,該傳感器用于檢測銀離子的檢測限可以達到15nM(S/N=3)獲得了比較滿意的結(jié)果。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：O657;Q503
【目錄】：

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本文編號：205049