梅花鹿黏膜病同源滅活疫苗的制備與免疫效果檢測
發(fā)布時間:2018-05-03 01:19
本文選題:梅花鹿黏膜病 + 滅活疫苗 ; 參考:《吉林大學(xué)》2014年碩士論文
【摘要】:牛病毒性腹瀉/黏膜病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)是單鏈正股RNA病毒,是黃病毒科瘟病毒屬的代表病毒,與同屬內(nèi)的豬瘟病毒和羊邊界病毒,在血清學(xué)上有交叉反應(yīng)。 梅花鹿黏膜病由牛病毒性腹瀉/黏膜病病毒引起的一種以發(fā)熱、黏膜糜爛潰瘍、免疫耐受與持續(xù)感染、免疫抑制、懷孕母鹿流產(chǎn)、產(chǎn)死胎或畸形胎為主要特征的一種接觸性傳染病,該病廣泛流行于世界各國,嚴(yán)重影響?zhàn)B鹿業(yè)健康發(fā)展。在。黏膜病在梅花鹿群中呈蔓延擴散的趨勢,但針對梅花鹿黏膜病專用疫苗在我國仍尚屬空白,很多情況下使用牛源的疫苗進行替代,使用牛源的疫苗進行梅花鹿黏膜病的免疫效果也不盡如人意。同時,已經(jīng)有報道證明,懷孕期的母畜進行BVDV弱毒疫苗的免疫可能會導(dǎo)致流產(chǎn)或者死胎。綜上所述,應(yīng)該創(chuàng)制一種具有自主知識產(chǎn)權(quán)的梅花鹿專用滅活疫苗,使梅花鹿黏膜病免疫預(yù)防工作更加科學(xué)化。 為此,本試驗在成功分離到梅花鹿源牛病毒性腹瀉病毒的基礎(chǔ)之上,使用MDBK細(xì)胞對BVDV病毒進行培養(yǎng)并回收。多次回收后,使用超速離心進行濃縮,留存為下一步毒種制備使用。為了確定所收獲的病毒,使用了倒置顯微鏡觀察和RT-PCR兩種檢測方法來進行鑒定,結(jié)果顯示無誤,其中RT-PCR條帶大小為326bp,上述病毒液的制備符合獸醫(yī)生物制品相關(guān)規(guī)程的要求。應(yīng)用蝕斑技術(shù)對病毒進行了純化篩選,得到了相對單一、穩(wěn)定的克隆株,作為毒種進行下一步的制備。為了確保疫苗的安全性,進行了外源病毒的檢驗。通過實驗確定了滅活滅活劑甲醛的總濃度為1.5‰,滅活時間為36h。滅活后與40%氫氧化鋁膠混合制備了疫苗,進行了無菌檢驗。按照我國相關(guān)規(guī)定,對制備的梅花鹿黏膜病滅活疫苗進行了無菌檢驗、安全檢驗、效力檢驗等,,結(jié)果均合格。為了檢測本疫苗的免疫效果,對本源動物鹿進行免疫,使用間接ELISA方法進行抗體效價水平的檢測,檢測結(jié)果證明本疫苗可以誘使鹿產(chǎn)生比較明顯的免疫應(yīng)答。通過本試驗研究表明,制備的梅花鹿黏膜病滅活疫苗質(zhì)量好、安全性高、實際應(yīng)用性強,為這一領(lǐng)域的研究打下了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Bovine viral diarrhea / mucosal virus ( BVDV ) is a single - stranded positive strand RNA virus , which is a representative virus of the genus Flaviviridae , which has cross - reactivity with swine fever virus and sheep boundary virus in the same genus .
In conclusion , it has been proved that the vaccination of BVDV attenuated vaccine can lead to abortion or stillbirth . In conclusion , it is necessary to create a special inactivated vaccine of Cervus nippon with independent intellectual property , so as to make the immune prevention work of sika deer mucosal disease more scientific .
In order to ensure the safety of the vaccine , the virus was purified and screened . The results showed that the vaccine could induce the deer to produce a relatively simple and stable vaccine . The results showed that the vaccine could induce the deer to produce a relatively single and stable vaccine .
【學(xué)位授予單位】:吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2014
【分類號】:S855.3
【參考文獻】
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本文編號:1836338
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