發(fā)布時(shí)間：2018-08-29 18:58

【摘要】：目的評(píng)估肝癌HepG2細(xì)胞分泌的Exosome對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)分化為腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAF)的影響及其相互作用機(jī)制。方法在人脂肪MSC培養(yǎng)體系中加入HepG2細(xì)胞分泌的Exosome進(jìn)行培養(yǎng),采用Western blot法檢測(cè)CAF特征性蛋白的表達(dá)情況。將已鑒定為CAF樣條件培養(yǎng)基(CAF-CM)和牛血清白蛋白對(duì)照組分別加至HepG2培養(yǎng)基中,采用Western blot法和定量PCR檢測(cè)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)基因的表達(dá),MTS法檢測(cè)細(xì)胞增殖,Transwell法檢測(cè)HepG2細(xì)胞的遷移和侵襲。結(jié)果 HepG2細(xì)胞分泌的Exosome表達(dá)CD63、熱休克蛋白(HSP)70和HSP90。將Exosome加入MSC培養(yǎng)體系后14 d,可檢測(cè)到α平滑肌肌動(dòng)蛋白、成纖維細(xì)胞激活蛋白α、白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-8和IL-1β等CAF特征性蛋白的表達(dá)。MTS法檢測(cè)CAF-CM組的細(xì)胞增殖OD值為1.075±0.104,明顯高于對(duì)照組的0.874±0.066(P=0.023)和MSC條件培養(yǎng)基組的0.649±0.034(P=0.0005)。CAF-CM組遷移的HepG2細(xì)胞數(shù)為(42.5±9.1)個(gè),明顯高于對(duì)照組的(18.5±3.1)個(gè)(P=0.001);CAF-CM組侵襲細(xì)胞數(shù)為(29.0±3.5)個(gè),明顯高于對(duì)照組的(13.1±3.7)個(gè)(P=0.009)。CAF-CM組Smad交互蛋白1(P=0.040)、β-catenin(P=0.038)、纖連蛋白(P=0.029)和Vimentin(P=0.013)的表達(dá)較對(duì)照組顯著上調(diào);而CAF-CM組的緊密連接蛋白表達(dá)顯著低于對(duì)照組(P=0.010)。結(jié)論肝癌HepG2細(xì)胞系分泌的Exosome可誘導(dǎo)脂肪組織來源的MSC分化為CAF,后者又可以促進(jìn)HepG2細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。
[Abstract]:Objective to evaluate the effect of Exosome secreted by hepatocellular carcinoma (HepG2) cells on the differentiation of mesenchymal stem cells (MSC) into tumor-associated fibroblasts (CAF) and its interaction mechanism. Methods Exosome secreted by HepG2 cells was added to human adipose MSC culture system and the expression of CAF characteristic protein was detected by Western blot assay. CAF like conditioned medium (CAF-CM) and bovine serum albumin (BSA) control group were added to HepG2 medium, respectively. The expression of genes associated with epithelial mesenchymal transformation was detected by Western blot and quantitative PCR. The migration and invasion of HepG2 cells were detected by cell proliferation and transwell assay. Results Exosome secreted by HepG2 cells expressed CD63, heat shock protein (HSP) 70 and HSP90.. 偽 -smooth muscle actin was detected 14 days after Exosome was added to MSC culture system. The expression of fibroblast activator protein 偽, interleukin (IL) 6, IL-8 and IL-1 尾 in the CAF-CM group was 1.075 鹵0.104, which was significantly higher than that in the control group (0.874 鹵0.066) and MSC conditioned medium group (0.649 鹵0.034 (P0. 0005). CAF-CM group was (42. 5 鹵9. 1). The number of invasive cells in CAF-CM group was significantly higher than that in control group (18.5 鹵3.1) (29.0 鹵3.5), significantly higher than that in control group (13.1 鹵3.7) (P0. 009). The expression of 尾 -catenin (P0. 040), 尾-catenin (P0. 038), fibronectin (P0. 029) and Vimentin (P0. 013) in CAF-CM group were significantly higher than those in control group. The expression of tight junction protein in CAF-CM group was significantly lower than that in control group (P0. 010). Conclusion Exosome secreted by HepG2 cell line can induce MSC derived from adipose tissue to differentiate into CAF, which can promote proliferation, migration and invasion of HepG2 cells.
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院腫瘤內(nèi)科;中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所組織工程中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81472785、61435001)~~
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：2212109