發(fā)布時(shí)間：2018-02-01 22:44

  本文關(guān)鍵詞： 乳腺癌 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化 ING5 侵襲 轉(zhuǎn)移　出處：《青島大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:探討ING5在乳腺癌組織中的表達(dá)水平,與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,研究ING5對(duì)乳腺癌上皮間質(zhì)化的影響及其作用機(jī)制。方法:(1)采集乳腺癌患者接受手術(shù)切除的癌組織標(biāo)本共68例,熒光定量PCR檢測(cè)ING5 m RNA的表達(dá),分析與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性;該方法和western blot法分別檢測(cè)HMEC-1、MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞中ING5 m RNA及其蛋白的表達(dá)。(2)構(gòu)建ING5過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞系,用Transwell小室法檢測(cè)ING5過(guò)表達(dá)乳腺癌細(xì)胞侵襲和遷移,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡,MTT法檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性。(3)熒光定量PCR和western blot法分別檢測(cè)ING5過(guò)表達(dá)的人MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞中E-cadherin和N-cadherin m RNA和蛋白的表達(dá);用western blot檢測(cè)ING5過(guò)表達(dá)的MDA-MB-231細(xì)胞中p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt蛋白的表達(dá),采用Image-Pro Plus6.0軟件對(duì)其灰度值進(jìn)行分析。結(jié)果:(1)乳腺癌組織中ING5 m RNA的表達(dá)顯著低于癌旁組織,與腫瘤大小、臨床分期有關(guān)。ING5 m RNA及其蛋白在乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MCF-7中的表達(dá)顯著低于其在HMEC-1細(xì)胞中的表達(dá)。(2)ING5過(guò)表達(dá)的細(xì)胞構(gòu)建成功,Transwell小室法檢測(cè)結(jié)果是ING5過(guò)表達(dá)細(xì)胞的遷移及侵襲能力顯著低于對(duì)照組,NG5過(guò)表達(dá)細(xì)胞的凋亡細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組,ING5過(guò)表達(dá)細(xì)胞的各時(shí)間點(diǎn)的生存率均顯著降低。(3)ING5過(guò)表達(dá)細(xì)胞中的E-cadherin m RNA及其相應(yīng)蛋白的表達(dá)量明顯增高;而N-cadherin m RNA及其相應(yīng)蛋白的表達(dá)量則明顯降低。ING5過(guò)表達(dá)細(xì)胞中p-PI3K和p-Akt蛋白的表達(dá)量明顯降低,灰度值分析表明p-PI3K和p-Akt蛋白的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組,而PI3K和Akt蛋白的表達(dá)量與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。結(jié)論:ING5在乳腺癌組織中呈異常低表達(dá)狀態(tài),上調(diào)其表達(dá)能夠明顯抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡、侵襲及遷移能力下降;對(duì)EMT具有抑制作用,而該抑制作用可能是通過(guò)抑制PI3K和Akt的磷酸化,抑制PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
[Abstract]:Objective: to investigate the expression of ING5 in breast cancer and its relationship with clinicopathological parameters. To study the effect and mechanism of ING5 on epithelial stroma of breast cancer. The expression of ING5 m RNA was detected by fluorescence quantitative PCR, and the correlation with clinicopathological parameters of breast cancer was analyzed. This method and western blot method were used to detect HMEC-1. The expression of ING5 m RNA and its protein in MDA-MB-231 and MCF-7 cells. Transwell chamber assay was used to detect the invasion and migration of breast cancer cells overexpression of ING5 and apoptosis was detected by flow cytometry. Detection of cell proliferation activity by MTT. Fluorescence quantitative PCR and western. Detection of E-cadherin and N-cadherin in MDA-MB-231 and MCF-7 cells overexpressed by ING5 by blot method. Expression of RNA and protein; Western blot was used to detect the expression of p-PI3KPI3KPI3KPI3KPI3KPI3KPI3KP- Akt protein in MDA-MB-231 cells overexpressed by ING5. The expression of ING5 m RNA in breast cancer tissues was significantly lower than that in adjacent tissues. With the size of the tumor. The expression of .ING5m RNA and its protein in breast cancer cell line MDA-MB-231 and MCF-7 was significantly lower than that in HMEC-1 cell line. ING5 overexpression cells were successfully constructed. The results of Transwell chamber assay showed that the number of apoptotic cells of ING5 overexpression cells was significantly lower than that of control group. The survival rate of ING5 overexpression cells decreased significantly at each time point. The expression of E-cadherin m RNA and its corresponding proteins in the overexpression cells of ING5 was significantly increased. On the other hand, the expression of p-PI3K and p-Akt proteins in the overexpression cells of N-cadherin m RNA and its corresponding proteins were significantly decreased. The expression of p-PI3K and p-Akt protein was significantly lower than that of the control group. There was no significant difference in the expression of PI3K and Akt between the two groups. Conclusion the expression of PI3K and Akt is abnormally low in breast cancer, and up-regulation of the expression can significantly inhibit cell proliferation. Induced apoptosis, invasion and migration decreased; The inhibitory effect on EMT may be by inhibiting the phosphorylation of PI3K and Akt and inhibiting the PI3K/Akt signal transduction pathway.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：1483046