發(fā)布時間：2018-01-31 06:18

  本文關(guān)鍵詞： 前列腺癌 WTAP 癌基因　出處：《南京醫(yī)科大學》2016年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：前列腺癌是泌尿生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一。在美國,其發(fā)病率已超過肺癌,成為危害男性健康的首位因素。在我國,由于前列腺活檢技術(shù)的提高,PSA篩查的普及以及生活方式的改變,前列腺癌的發(fā)病率呈迅猛上升趨勢。綜合治療通常能為早期前列腺癌患者帶來相對良好的預后,然而依然存在相當一部分前列腺癌患者在發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移后才得以確診,導致預后不佳。中晚期前列腺癌患者雖然可通過接受內(nèi)分泌治療控制和改善病情,但其中絕大多數(shù)仍會進展為預后極差的去勢抵抗性前列腺癌。因此,深入探尋前列腺癌發(fā)生發(fā)展的分子通路及相關(guān)基因異常,闡明腫瘤發(fā)生發(fā)展機制,尋找其轉(zhuǎn)移及耐藥的分子機制及有效靶點,對于提高前列腺癌的早期診斷效率、發(fā)掘新的治療靶點與預后判斷方法具有重要意義�；�因在腫瘤中的表達與功能向來是腫瘤發(fā)生發(fā)展與轉(zhuǎn)移機制研究的重點,也是腫瘤早期診斷,靶向治療與預后判斷研究的重點。近年來研究發(fā)現(xiàn),WTAP基因在人的正常生理過程和腫瘤發(fā)生發(fā)展中均起到重要調(diào)控作用。WTAP在體內(nèi)外均可與WT1基因特異性結(jié)合,可參與m6A甲基化修飾,RNA選擇性剪接,細胞周期調(diào)控等多種機體正常生理過程；亦在多種惡性腫瘤如膠質(zhì)母細胞瘤、膽管癌、急性髓細胞性白血病和結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要調(diào)控作用,但WTAP在前列腺癌中的表達和作用尚不明確。本課題旨在探究前列腺癌中WTAP的表達和作用,探究前列腺癌發(fā)生及進展的分子機制,為前列腺癌的早期診斷和治療提供新思路。第一部分WTAP在前列腺癌中的表達及臨床意義目的：探討WTAP基因在前列腺癌組織中的表達水平與相關(guān)臨床病理學指標及患者預后的關(guān)系。方法：應(yīng)用實時熒光定量PCR(qRT-PCR)法和Western Blot法檢測前列腺癌組織和配對的正常組織中WTAP基因的表達水平。免疫組織化學方法檢測前列腺癌組織中WTAP表達情況。統(tǒng)計分析WTAP表達與臨床指標及預后的關(guān)系。結(jié)果：qReal-time PCR檢測和Western Blot檢測結(jié)果顯示W(wǎng)TAP基因在前列腺癌組織中的表達水平高于配對的正常前列腺組織(P0.05)。Kaplan-Meier分析表明,相比于WTAP低表達的患者,WTAP高表達的PCa患者的無生化復發(fā)生存時間更短(log- rank test, P 0.05)。PCa患者中WTAP表達水平與腫瘤遠處轉(zhuǎn)移和無生化復發(fā)生存率呈明顯相關(guān)性(P0.05)。多變量分析表明,WTAP表達和腫瘤病理分級是PCa患者無生化復發(fā)生存率的獨立預后因子。結(jié)論：WTAP在前列腺癌組織中高表達,WTAP高水平表達與前列腺癌遠處轉(zhuǎn)移和無生化復發(fā)相關(guān),并且是PCa患者獨立危險因子。第二部分WTAP對前列腺癌細胞功能的影響及分子機制的研究目的：探討前列腺癌細胞系WTAP表達水平對細胞增殖、遷移、侵襲、細胞周期、動物成瘤能力的影響及可能的分子機制。方法：運用慢病毒轉(zhuǎn)染法,在前列腺癌細胞系PC3、DU145、LNCaP中構(gòu)建WTAP的過表達和敲低模型,并用實時熒光定量PCR(q RT-PCR)和Western blot檢測轉(zhuǎn)染效率。用CCK-8試劑盒檢測敲低或者過表達WTAP后細胞增殖能力,并用細胞克隆實驗進行驗證。以Transwell法檢測細胞遷移和侵襲能力。PI染色流式細胞儀檢測敲低或者過表達WTAP后對細胞周期的影響。在小鼠皮下原位注射敲低或者過表達WTAP的PC3細胞或?qū)φ占毎?觀察細胞在動物體內(nèi)成瘤能力。結(jié)果：成功構(gòu)建兩株敲低shWTAP1、shWTAP2、一株過表達WTAP和陰性對照NC的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株。穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞用CCK-8染色檢測細胞增殖能力,結(jié)果表明與對照NC組比,過表達WTAP細胞增殖能力明顯增強(P0.05),敲低shWTAP1、 shWTAP2細胞增殖能力降低(P0.05)。細胞克隆實驗進一步驗證此結(jié)果。遷移和侵襲實驗結(jié)果表明與對照NC組比較,過表達WTAP后PCa細胞遷移和侵襲能力明顯增強(p0.01),敲低WTAP后PCa細胞遷移侵襲能力明顯減弱(p0.05)。流式細胞儀檢測細胞周期結(jié)果顯示與對照NC組相比較,敲低前列腺癌PC3的WTAP表達,細胞周期G0/G1期比例顯著增高,對應(yīng)S期和G2/M期的比例明顯下降(P0.05),而過表達WTAP細胞周期G0/G1期比例下降,對應(yīng)S期和G2/M期比例的增加(P0.05)。裸鼠皮下成瘤試驗結(jié)果顯示,接種腫瘤細胞28天后與對照組相比,敲低WTAP組腫瘤的重量分別為240±29mg,120±10mg,70±12mg(以均數(shù)±標準差表示,P0.05)。通過Western blot檢測WTAP表達改變前后對相關(guān)通路蛋白表達水平影響。結(jié)果表明：與對照組相比vimentin和β-actin在經(jīng)過慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)沉默后的PC3,DU145和LNCaP中明顯低表達(P0.05),E-cadherin高表達(P0.05),在過表達細胞中vimentin和β-catenin高表達(P0.05)而E-cadherin低表達(P0.05)。另外,過表達WTAP的PC3,DU145與LNCaP細胞中WT1與TBL1表達升高(P0.05)；在敲低WTAP的PC3,DU145和LNCaP細胞中表達顯著降低(P0.05)。結(jié)論：體外實驗顯示W(wǎng)TAP能夠影響PCa細胞系增殖、遷移、侵襲和細胞周期,且進一步影響動物體內(nèi)成瘤能力。并可能通過調(diào)控EMT和WTAP-WT1-TBL1通路來調(diào)節(jié)腫瘤的生物學行為。
[Abstract]:In recent years , the expression and function of WTAP gene in prostate cancer have been studied by using real - time fluorescence quantitative polymerase chain reaction ( qRT - PCR ) and Western Blot . The effects of WTAP on cell proliferation , migration , invasion , cell cycle , cell cycle , and cell cycle of PCa were investigated . The results showed that the expression of WTAP in prostate cancer cell line was significantly higher than that in control NC group ( P0.05 ) . Compared with control group , vimentin and 尾 - actin were significantly lower ( P0.05 ) . The expression of WT1 and TBL1 increased significantly ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.25

【相似文獻】

相關(guān)博士學位論文 前1條

1 成功;WTAP基因在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2016年

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本文編號：1478437