發(fā)布時間：2018-01-31 01:50

  本文關鍵詞： 肺癌 肺泡灌洗液 GSTP1基因 甲基化 早期診斷　出處：《鄭州大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：肺癌是發(fā)病率和死亡率較高的惡性腫瘤,預后較差。多數肺癌患者在中晚期或者已經轉移不適合手術治療時才被確診,5年總體生存率不到15%,提高診斷率是迫切需要解決的問題,也對改善患者預后具有重要的意義。目前肺癌的篩查和診斷主要依賴影像學檢查和組織細胞學檢查,此外腫瘤分子標志物在肺癌的輔助診斷中也發(fā)揮重要作用。隨著對肺癌發(fā)病機制的研究,DNA異常甲基化逐漸成為研究熱點。DNA甲基化是發(fā)生在基因啟動子和第一外顯子區(qū)CpG島調控制基因轉錄的重要機制,DNA異常甲基化參與多種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。谷胱甘肽S轉移酶P1基因(Glutathione S-transferases P1,GSTP1)是多種致癌物的II相代謝酶基因,在維持細胞代謝分解致癌物、抗氧化損傷和抑制細胞癌變的過程中發(fā)揮重要作用。GSTP1基因啟動子異常甲基化是否參與到肺癌發(fā)病過程中,能否作為有價值的肺癌輔助診斷指標,尚不清楚。由于多數患者不能進行手術或者不能耐受手術,使得組織腫瘤基因檢測受到限制。因此本研究首先分析肺癌患者肺癌組織與肺泡灌洗液細胞中GSTP1基因啟動子甲基化狀態(tài)是否一致,來明確能否利用肺泡灌洗液代替肺癌組織檢測GSTP1基因啟動子甲基化,在此基礎上研究肺癌患者和肺部良性疾病患者肺泡灌洗液GSTP1基因啟動子甲基化狀態(tài)及其診斷肺癌的敏感度和特異度,并通過與外周血肺癌相關腫瘤標志物NSE、ProGRP、CAl25和CYFRA21-1診斷肺癌的一致性及敏感度和特異度的對比分析,及GSTP1基因啟動子甲基化與肺癌患者臨床病理特征的關聯性分析,研究GSTP1基因啟動子甲基化在肺癌診斷中的價值和意義,為肺癌尋找一種分子輔助診斷指標。方法:1.實驗分組:(1)肺泡灌洗液代替肺癌組織檢測GSTP1基因啟動子甲基化可行性的研究:收集50例肺癌患者的肺泡灌洗液及其肺癌組織標本,分別作為肺泡灌洗液組和肺癌組。(2)GSTP1基因啟動子甲基化在肺癌診斷中的價值研究:收集100例肺癌患者和100例肺部良性疾病患者的肺泡灌洗液和外周血標本,分別作為肺癌組和對照組;另收集100例健康人外周血標本,并作為正常組。2.利用PCR聯合高分辨率熔解曲線(High resolution melting assay,HRM)(PCR-HRM)方法檢測肺癌組織和肺泡灌洗液細胞GSTP1基因啟動子甲基化;采用電化學發(fā)光免疫分析檢測血清腫瘤標志物NSE、ProGRP、CAl25和CYFRA21-1水平。3.數據分析:利用SPSS 17.0軟件對結果數據進行統(tǒng)計學分析,GSTP1基因啟動子甲基化率用檢出率(%)表示。肺泡灌洗液代替肺癌組織用于檢測GSTP1基因啟動子甲基化可行性的研究采用Mc Nemar檢驗;各組GSTP1基因甲基化率的比較采用χ2(Chi-square)檢驗;利用Kappa統(tǒng)計量分析GSTP1基因啟動子甲基化與腫瘤標志物診斷肺癌的一致性;腫瘤標志物和GSTP1基因啟動子甲基化對肺癌診斷的價值通過繪制受試者操作特性(Receiveroperating characteristics,ROC)曲線進行分析;不同臨床病理特征肺癌患者的GSTP1基因甲基化率關聯性分析采用χ2檢驗。檢驗水準為α=0.05,以P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結果:1.肺泡灌洗液代替肺癌組織檢測GSTP1基因啟動子甲基化的可行性:肺癌組織組和肺泡灌洗液組GSTP1基因啟動子甲基化率分別為48.0%(24/50)和44%(22/50),兩組GSTP1基因啟動子甲基化率無明顯差異(P=0.688)。2.肺癌患者GSTP1基因啟動子甲基化狀態(tài)及其診斷肺癌的敏感度和特異度:肺癌組和對照組GSTP1基因啟動子甲基化率分別為57%(57/100)和12%(12/100)。經ROC曲線分析后,發(fā)現當以5%甲基化為cut-off值時,GSTP1基因甲基化診斷肺癌的敏感度和特異度最好,敏感度和特異度分別為57%和88.0%,此時肺癌組甲基化率為48.0%(48/100),對照組甲基化率為11.0%(11/100),兩組差異有統(tǒng)計學意義(χ2=32.91,P0.001)。3.GSTP1基因啟動子甲基化在肺癌診斷中的價值:GSTP1基因啟動子甲基化與NSE、ProGRP、CAl25和CYFRA21-1的Kappa值分別為0.733、0.712、0.466和0.485。經ROC曲線分析,肺泡灌洗液GSTP1基因甲基化與NSE、ProGRP、CAl25和CYFRA21-1診斷肺癌的AUC值分別為0.719、0.814、0.839、0.698和0.884,GSTP1基因啟動子甲基化診斷肺癌敏感度雖然低于NSE,但特異度與NSE相同,敏感度和特異度均高于CA125。4.GSTP1基因啟動子甲基化與肺癌患者臨床病理特征關聯性:肺癌患者肺泡灌洗液GSTP1基因啟動子甲基化率與年齡、性別及病理類型無關,P值分別為0.414、0.628和0.101。早期(Ⅰ和Ⅱ期)肺癌患者GSTP1基因甲基化率為32.7%(18/55),明顯低于晚期(Ⅲ和Ⅳ期)的66.7%(30/45),χ2=11.422,P=0.001,但顯著高于對照組,χ2=11.014,P=0.001;高分化和中分化肺癌患者甲基化率為37.3%(22/59),明顯低于低分化患者的63.4%(26/41),χ2=6.615,P=0.010,但顯著高于對照組,χ2=15.591,P0.001。結論:1.肺泡灌洗液可代替肺癌組織用于GSTP1基因啟動子甲基化的研究。2.肺癌患者GSTP1基因啟動子處于高甲基化狀態(tài),診斷肺癌靈敏度和特異度分別57.0%和88.0%,診斷價值較好,并且與腫瘤標志物診斷肺癌一致性較好,可用于肺癌的輔助診斷。3.GSTP1基因啟動子甲基化與肺癌病理分期和分化程度有關。
[Abstract]:The methylation status of GSTP1 gene in lung cancer patients and its significance in the diagnosis of lung cancer were studied . The methylation of GSTP1 gene was detected by using SPSS 17.0 software . The methylation rate of GSTP1 gene in lung cancer patients was 48.0 % ( 48 / 100 ) and 11.0 % ( 11 / 100 ) respectively .

【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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本文編號：1477844