目的:1.高效、穩(wěn)定的體外培養(yǎng)大量的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),并對BMSCs進(jìn)行細(xì)胞生物學(xué)鑒定。2.觀察梓醇對BMSCs的細(xì)胞增殖作用,深入探討梓醇對BMSCs促成軟骨分化的作用。3.觀察梓醇對體外BMSCs細(xì)胞遷移的影響,進(jìn)一步研究梓醇在促細(xì)胞遷移過程與Wnt非經(jīng)典信號通路Wnt5a/CaMKII的關(guān)系。方法:1.應(yīng)用全骨髓貼壁法培養(yǎng)SD大鼠BMSCs,取狀態(tài)良好的第3代BMSCs行細(xì)胞表面抗原流式細(xì)胞檢測及誘導(dǎo)成脂肪、成骨細(xì)胞分化。2.CCK-8法檢測梓醇對BMSCs增殖的影響,RT-PCR檢測梓醇對BMSCs分化為軟骨細(xì)胞的特異性基因COLⅠ、Aggrecan和SOX9基因的表達(dá)。3.Transwell法觀察梓醇對BMSCs細(xì)胞遷移的影響,并通過構(gòu)建過表達(dá)Wnt5a慢病毒載體的方法感染BMSCs。通過熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白熒光表達(dá)及RT-PCR檢測Wnt5a基因的表達(dá)量確定慢病毒感染效果。進(jìn)一步Western-blot檢測慢病毒感染BMSCs中CaMKII的表達(dá)來觀察梓醇對其下游CaMKII蛋白的影響。結(jié)果:1.流式細(xì)胞檢測細(xì)胞表面抗原標(biāo)志物結(jié)果顯示CD29、CD44、C...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

AB圖1.1培養(yǎng)24h的原代細(xì)胞A和培養(yǎng)至第3代細(xì)胞B的形態(tài)學(xué)觀察(100×）（三）BMSCs的流式細(xì)胞鑒定SD大鼠BMSCs流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，培養(yǎng)的第3代BMSCs均表達(dá)CD29、CD44、CD90，陽性率分別為99.84%、96....

AB圖1.1培養(yǎng)24h的原代細(xì)胞A和培養(yǎng)至第3代細(xì)胞B的形態(tài)學(xué)觀察(100×）（三）BMSCs的流式細(xì)胞鑒定SD大鼠BMSCs流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示，培養(yǎng)的第3代BMSCs均表達(dá)CD29、CD44、CD90，陽性率分別為99.84%、96....

梓醇對BMSCs成軟骨分化及體外遷移能力的實(shí)驗(yàn)研究骨、成脂誘導(dǎo)分化可見BMSCs體外成骨誘導(dǎo)3周后茜素紅染色，細(xì)胞化結(jié)節(jié)形成，并逐漸融合，見圖1.3；成脂誘導(dǎo)2，顯示細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)染紅的脂滴，形態(tài)大小不一合，見圖1.4�！痢�

圖1.4成脂誘導(dǎo)染紅脂滴(×200)純度、強(qiáng)活力、生物特性均一的BMSCs對用顯得至關(guān)重要。早在半世紀(jì)前，F(xiàn)riede持造血和分化的祖細(xì)胞，并于1974年體外]，直至1991年Caplan將這類干細(xì)胞命名為于骨髓中，還能夠從臍血、脂肪、骨骼、

本文編號：4010432