發(fā)布時間：2020-07-07 08:11

【摘要】：目的研究考察左歸丸干預高血脂模型孕鼠對其子代糖耐量減低(IGT)易感蛋白表達的影響及其機制,以明確左歸丸干預母代是通過何種方式對子代IGT易感蛋白的表達產(chǎn)生長遠的有利影響,并進一步預防或延緩子代IGT的發(fā)生。方法將SD大鼠隨機分為4組(每組雌12,雄6),即正常對照組,模型對照組,胰島素(4mg·kg~(-1))組,左歸丸(10g·kg~(-1))組。模型組和胰島素組以及左歸丸干預組雌鼠采用高脂飼料喂飼法以創(chuàng)造高血脂環(huán)境。造模成功后雌雄2:1合籠過夜,孕鼠于第三天(P3d)開始給藥,胰島素組按4mg·kg~(-1)肌肉注射給藥,左歸丸組按10g·kg~(-1)灌胃給藥,正常對照組和模型對照組給予生理鹽水,灌胃組大鼠均按20mL·kg~(-1)給藥,1日1次,至P19d(預產(chǎn)期)。待F0代孕鼠分娩F1代鼠后,稱取F1代鼠體重,每窩F1代子鼠各保留12只(6♂,6♀),組別不變,并從第五周開始每周稱量F1代各組大鼠體重。從第10周開始每周對各組大鼠進行一次糖耐量負荷試驗(先測空腹血糖,繼之2g·kg~(-1)的葡萄糖灌胃,2h后檢測血糖水平),待模型對照組大鼠出現(xiàn)IGT(餐后血糖水平7.8-11.2mmol/L)后,處死各組大鼠,取血清適量,組織灌注后取胰腺、肝臟等組織,采用HE染色觀察各組大鼠肝臟和胰臟的病理病變情況;采用iTRAQ(isobaric Tag for Relative and Absolute Quantitation)技術對差異蛋白進行篩選;采用RT-PCR技術對與IGT密切的差異蛋白進行mRNA表達水平檢測;采用ELISA法檢測差異蛋白信號通路相關指標;進一步從差異蛋白信號通路的角度探討左歸丸胚胎期干預對IGT模型大鼠IGT遺傳易感基因以及差異蛋白表達狀況的影響及機理。結(jié)果1.與正常對照組比較,高脂血癥誘導的模型對照組子代(F1代)大鼠出生后不同時間體重顯著或極顯著降低(~*P0.05,~(**)P0.01);與模型對照組比較,胰島素組和左歸丸組出生后不同時間體重顯著或極顯著增加(~#P0.05,~(##)P0.01)。2.與正常對照組比較,模型對照組的血脂四項(TC、TG、HDL、LDL)水平和血糖水平(空腹及餐后)顯著或極顯著升高(~*P0.05,~(**)P0.01);與模型對照組比較,胰島素組和左歸丸組的血脂四項水平和血糖水平出現(xiàn)不同程度的改善(~#P0.05,~(##)P0.01)。3.與正常對照組比較,模型對照組的肝臟和胰臟組織病理切片顯示脂肪樣改變、組織瘀血以及胰島細胞萎縮;與模型對照組比較,胰島素組和左歸丸組的脂肪樣改變、組織瘀血以及胰島細胞萎縮有所緩解。4.蛋白組學分析顯示增殖蛋白激酶-3(ERK1)與糖代謝密切相關,是IGT差異蛋白;與正常對照組比較,模型對照組的ERK1水平顯著降低(P0.05);同模型對照組比較,胰島素組和左歸丸組的ERK1水平顯著降低(P0.05)。5.同正常對照組比較,模型對照組F1代大鼠ERK1的m RNA表達水平顯著上調(diào)(~*P0.05);同模型對照組比較,胰島素組和左歸丸組F1代大鼠ERK1的mRNA表達水平無顯著差異。6.同正常對照組比較,模型對照組的血清Beta2、INS、INSR、PI3K表達水平顯著或極顯著升高(~*P0.05,**P0.01),IRS1表達水平顯著下降(~*P0.05)。同模型對照組比較,胰島素組的Beta2、PI3K表達水平顯著下降(~#P0.05),IRS1表達水平顯著升高(~#P0.05),但INS、INSR的表達水平未見顯著降低;同模型對照組比較,左歸丸組的INS、INSR、PI3K表達水平顯著下降(~#P0.05),IRS1表達水平顯著升高(~#P0.05),但Beta2的表達水平未見顯著降低。結(jié)論左歸丸胚胎期干預可以對高血脂環(huán)境出生F1代大鼠IGT的發(fā)病產(chǎn)生一定的防治作用,其機制可能是:機體自身多種蛋白之間共同作用,抑制ERK1整條同路的最終表達結(jié)果。左歸丸滋補腎陰,胚胎期的干預對胎兒產(chǎn)生了表觀遺傳修飾作用,體內(nèi)達到另外一種形式的陰陽平衡,強化了胎兒對宮內(nèi)不良環(huán)境的適應能力,降低了高糖高脂環(huán)境對胎兒的不良影響,降低F1代大鼠后天IGT發(fā)病的風險。同時驗證了中醫(yī)“腎藏精”、“主生殖”、“主生長發(fā)育”以及“陰平陽秘,精神乃治”的基本理論。
【學位授予單位】：山西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5;R-332
【圖文】：

A5注：(A1:0w A2:5w A3:9w A4:13w A5:15w)與正常對照組比較*P < 0.05，**P < 0.01；與模型對照組比較#P < 0.05，##P < 0.01圖 1 左歸丸胚胎期干預對高脂血癥模型大鼠 F1 代不同時間體重的影響2.2 左歸丸胚胎期干預對高脂血癥模型大鼠 F1 代血糖的影響

E3 E4注：（ E1: 正常對照組 E2: 模型對照組 E3: 胰島素組 E4: 左歸丸組）圖 5 F1 代大鼠胰臟病理切片圖（HE 染色，×200 倍）

(從左至右) 正常對照組，模型對照組，胰島素組，左歸丸組。（如圖 1）圖 1 樣本抽提總蛋白的 SDS-PAGE 膠圖1.3.2 蛋白的還原烷基化（1）從每個樣本中等量取出 300ug 蛋白，體積上的差距用裂解液補齊。（2）加入終濃度 5mM DTT 還原二硫鍵，30℃反應 30min。（3）冷卻至室溫后加入 25mM IAM，封閉游離巰基，室溫避光反應 45min。（4）加入 10 倍體積-20℃預冷丙酮沉淀蛋白，-20℃靜置過夜。（5）20000g 4℃離心 10min，棄去上清，加入-20℃預冷 80%丙酮漂洗，-20℃靜置 1h。（6）同樣方式，加入預冷丙酮漂洗兩次，離心去上清。（7）蛋白沉淀室溫放置 10min

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

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相關博士學位論文 前5條

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相關碩士學位論文 前1條

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本文編號：2744875