發(fā)布時間：2020-07-07 06:22

【摘要】：目的:明確人面子葉乙酸乙酯部位的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ);考察人面子葉乙酸乙酯部位、黃酮單體的抗菌效果及其相互作用關(guān)系;探索人面子葉乙酸乙酯部位的抗菌作用機制。方法:采用基于LC-MS技術(shù)和數(shù)據(jù)庫比對技術(shù),全面分析人面子葉乙酸乙酯部位中化學(xué)成分,并通過UPLC-外標法測定黃酮類物質(zhì)兒茶素、表兒茶素、木犀草素、槲皮素的含量;聯(lián)合應(yīng)用微量量熱法和四元二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計方法,測定人面子葉乙酸乙酯部位對大腸桿菌的干預(yù)作用,并構(gòu)建人面子葉乙酸乙酯部位黃酮類物質(zhì)含量與抗菌效果之間的數(shù)學(xué)函數(shù),建立四種黃酮類物質(zhì)抗菌活性及相互作用關(guān)系的數(shù)學(xué)模型,考察人面子葉乙酸乙酯部位、黃酮單體的抗菌效果及其相互作用關(guān)系;采用基于UPLC/Q-TOF質(zhì)譜的代謝組學(xué)技術(shù),探索人面子葉乙酸乙酯部位干預(yù)大腸桿菌胞內(nèi)代謝的機制。結(jié)果:(1)人面子葉乙酸乙酯部位的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)本研究檢測發(fā)現(xiàn)S1樣品中有214種高含量化合物,S2樣品中有248種高含量化合物,S3樣品中有196種高含量化合物。對比研究發(fā)現(xiàn),3個樣品共有42種高含量物質(zhì),其中包括兒茶素、表兒茶素、木犀草素和槲皮素等黃酮類物質(zhì)。其中S1樣品槲皮素含量為7.018μg·mg~(-1),表兒茶素含量為0.916μg·mg~(-1),兒茶素含量為28.319μg·mg~(-1),木犀草素含量為0.796μg·mg~(-1)。S2樣品槲皮素含量為141.112μg·mg~(-1),表兒茶素含量為6.023μg·mg~(-1),兒茶素含量為297.039μg·mg~(-1),木犀草素含量為17.964μg·mg~(-1)。S3樣品槲皮素含量為78.417μg·mg~(-1),表兒茶素含量為4.426μg·mg~(-1),兒茶素含量為338.201μg·mg~(-1),木犀草素含量為1.655μg·mg~(-1)。(2)人面子葉中黃酮類物質(zhì)的抗菌活性及其相互作用的數(shù)學(xué)模型以人面子葉乙酸乙酯部位抗大腸桿菌最佳的S2樣品中黃酮物質(zhì)含量為切入點,采用基于微量量熱法的生物效應(yīng)測定技術(shù),確定四元二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計方案,建立回歸方程,得到兒茶素、表兒茶素、槲皮素、木犀草素與抗菌率之間的數(shù)學(xué)模型。通過方差分析和單因子效應(yīng)分析,發(fā)現(xiàn)黃酮單體抗菌活性強度依次為:木犀草素,兒茶素,槲皮素,表兒茶素。在兩因子交互效應(yīng)分析中發(fā)現(xiàn),木犀草素和兒茶素、木犀草素和槲皮素之間存在明顯的協(xié)同作用。(3)人面子葉干預(yù)大腸桿菌胞內(nèi)代謝的作用機制運用低溫淬滅和有機溶劑提取,結(jié)合UHPLC/Q-TOF高分辨率質(zhì)譜分析技術(shù),檢測大腸桿菌胞內(nèi)代謝產(chǎn)物,采用主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)篩選特異性的生物標志物,共有27種(S1樣品組)、29種(S2樣品組)和32種(S3樣品組)具有顯著性差異的代謝產(chǎn)物,其屬于磷脂類化合物,脂肪酸類化合物,甘油酯類化合物,花生四烯酸類化合物,糖類化合物。通過KEGG數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果顯示,主要受影響的通路分別是:鞘脂代謝,花生四烯酸代謝,α-亞麻酸代謝,甘油磷脂代謝(僅S3處理組)。人面子葉乙酸乙酯部位通過破壞大腸桿菌的細胞膜,導(dǎo)致桿菌死亡,發(fā)揮抗菌作用。結(jié)論:本研究明確了人面子葉乙酸乙酯部位的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)和四種黃酮的含量;建立了四元二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計數(shù)學(xué)模型,并成功應(yīng)用于人面子葉乙酸乙酯部位抗菌作用的考察,解析了黃酮單體的抗菌效果及其相互作用關(guān)系;從代謝組學(xué)角度出發(fā),探索人面子葉乙酸乙酯部位的抗菌作用機制,為全面揭示人面子葉抗菌作用、制定人面子葉的質(zhì)量標準奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284;R285
【圖文】：

成都中醫(yī)藥大學(xué) 2018 屆碩士學(xué)位論文中，正離子模式檢測 864 種化合物，負離子模式檢測到 1054 種化合物。EIC 中物質(zhì)離子的響應(yīng)強度可以表征化合物的含量，因此定義 EIC 中物質(zhì)的響應(yīng)強度大于 1.0×107的物質(zhì)是樣品中高含量物質(zhì)，使用該參數(shù)作為指標，篩選檢測到的化合物信息。結(jié)果表明，S1 樣品中檢測到 214 個高含量的化合物。其中，正離子模式檢測到 94 種化合物，負離子模式檢測到 120 種化合物（如附表 1 所示）

圖 2 人面子葉乙酸乙酯部位 S1 樣品的質(zhì)譜掃描圖Fig. 2 Mass Spectrometry Scan of S1 Samples掃描區(qū)間：A:1.382-1.797min, B:1.797-2.195min, C:2.593-2.643min, D:3.905-3.938min, E:3.938-3.971min, F:4.735-4.801min, G:4.801-4.834min, H:5.100-5.117min, I:5.316-5.366min, J:5.847-5.880min, K:6.076-6.096min, L:6.361-6.411min, M:6.527-6.544min, N:6.826-6.859min, O:7.341-7.374min, P:11.142-11.107min, Q:14.794-14.943min, R:17.965-18.562min, S:18.562-18.927min,T:18.927-19.724min.（2）人面子葉乙酸乙酯部位 S2 樣品的化學(xué)物質(zhì)信息人面子葉乙酸乙酯部位 S2 樣品中檢測到 2127 種化合物（圖 1B 和圖 3），其中正離子模式檢測到 773 種化合物，負離子模式檢測到 1354 種化合物。EIC 中物質(zhì)離子的響應(yīng)強度可以表征化合物的含量，因此定義 EIC 中物質(zhì)的響應(yīng)強度大于 1.0×107的物質(zhì)是樣品中高含量物質(zhì)，使用該參數(shù)作為指標，篩選檢測到的化合物信息。結(jié)果表明，S2 樣品中檢出高含量化合物 248 種，其中正離子檢測

圖 3 人面子葉乙酸乙酯部位 S2 樣品的質(zhì)譜掃描圖Fig. 3 Mass Spectrometry Scan of S2 SamplesA-T 圖掃描區(qū)間同圖 2 圖注.（3）人面子葉乙酸乙酯部位 S3 樣品的化學(xué)物質(zhì)信息人面子葉乙酸乙酯部位 S3 樣品中檢測到 1757 種化合物（圖 1C 和圖 4），其中正離子模式檢測到 784 種化合物，負離子模式檢測到 973 種化合物。使用上述方法進行篩選，結(jié)果表明，在 S3 樣品中檢測到 196 個高含量的化合物，其中正離子模式檢測到82個化合物，負離子模式檢測到114個化合物（如附表3所示）。

【參考文獻】

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1 王瑩;杜靜;;液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥復(fù)方研究中的應(yīng)用[J];浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志;2015年08期

2 靳淑敏;韓茹;董振詠;耿文婧;白莉;;液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥制劑分析中的應(yīng)用進展[J];河北醫(yī)藥;2015年05期

3 王洋;陳濤;潘霖;李正;崔維利;李進;;液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在丹參成分分析中的應(yīng)用[J];中草藥;2014年23期

4 邵峰;谷麗菲;劉榮華;黃慧蓮;陳慧娟;江東龍;;HPLC法測定不同產(chǎn)地山里紅中表兒茶素含量[J];江西中醫(yī)藥;2014年06期

5 魏舒暢;陳方圓;閆治攀;金輝;王繼龍;;二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計優(yōu)化紅芪總多糖與皂苷的酶解提取工藝[J];中成藥;2014年02期

6 李飛;王宇光;楊亮;朱冠秀;梁乾德;馬增春;肖成榮;譚洪玲;湯響林;高月;;UPLC-Q-TOF/MS分析不同比例丹參配伍藜蘆毒性生物堿變化規(guī)律[J];化學(xué)學(xué)報;2012年21期

7 石天松;;中藥滿山紅化學(xué)成分和分析方法的研究進展[J];華夏醫(yī)學(xué);2012年01期

8 王文忠;孫國萍;孟麗娟;鄭平;;回歸旋轉(zhuǎn)設(shè)計優(yōu)化當歸六黃滴丸成型工藝[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2011年11期

9 章斌;婁子洋;;液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在中藥代謝物及代謝組學(xué)研究中的應(yīng)用分析[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2011年06期

10 蘇秀芳;;正交試驗法優(yōu)選人面子葉揮發(fā)油提取工藝[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年01期

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1 朱洪影;細胞代謝物的實時質(zhì)譜分析方法研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2016年

2 徐文;液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在兩種中藥成分分析中的應(yīng)用[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 陳娟娟;液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)在藥用植物活性物質(zhì)分析研究中的應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2009年

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1 李朋玲;基于LC-Q/TOF-MS的代謝組學(xué)方法評價桃紅四物湯對血瘀模型大鼠的干預(yù)作用[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 邱昆成;藥對知母—黃柏的降糖作用及基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的化學(xué)物質(zhì)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 郜丹;基于生物熱動力學(xué)的微生物檢測新方法建立及應(yīng)用[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2014年

4 孫曉嬌;基于生物熱動力學(xué)研究附子、干姜不同配伍層次組合的寒熱藥性/屬性差異[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2014年

5 李曉雪;用于擬干酪乳桿菌代謝組學(xué)分析的樣品處理方法研究和應(yīng)用[D];華東理工大學(xué);2013年

6 唐小龍;附子含量測定、現(xiàn)代炮制工藝和液質(zhì)聯(lián)用分析研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2013年

7 宋冬梅;基于高效液相色譜及液質(zhì)聯(lián)用的化學(xué)藥品有關(guān)物質(zhì)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

8 任一臻;三種中草藥中黃酮類化合物的液質(zhì)聯(lián)用分析[D];東華大學(xué);2012年

9 劉洋;糖尿病腎病代謝組學(xué)的研究[D];新疆大學(xué);2011年

10 高潔;茅莓中有效成分的液質(zhì)聯(lián)用分析及藥理活性研究[D];浙江大學(xué);2011年

本文編號：2744765