發(fā)布時間：2020-07-05 11:37

【摘要】：本論文的研究聚焦于經(jīng)典復(fù)方青娥方和經(jīng)方復(fù)方黨參方。青娥方是出自《太平惠民和劑局方》的經(jīng)典名方,由杜仲(鹽制)、補骨脂(鹽制)、核桃仁(炒制)和大蒜四味中藥組成。方中各單味藥對學習記憶的保護作用的研究已有報道,但是關(guān)于青娥全方及其不同配伍對學習記憶方面的影響卻鮮有報道。復(fù)方黨參方是一個經(jīng)方,由黨參、當歸、枸杞、天門冬、酒大黃組成,經(jīng)長期臨床證實具有抗氧化、抗衰老等功能。本論文的目的之一是研究經(jīng)典復(fù)方青娥方不同配伍對東莨菪堿模型小鼠學習記憶的改善作用;另一目的是基于復(fù)方黨參方的抗氧化功能的保健食品的研究。因此,本論文主要開展了如下工作:(一)青娥方不同配伍對東莨菪堿模型小鼠學習記憶的改善作用青娥方及其不同拆方(杜仲、杜仲+補骨脂、杜仲+核桃仁、杜仲+大蒜,杜仲+補骨脂+核桃仁+大蒜、補骨脂)各按經(jīng)典復(fù)方配比,采用75%乙醇加熱回流提取,制得提取物。6個藥物配伍組,陽性組及模型組和空白對照組小鼠分別灌胃相應(yīng)的藥物2周后,東莨菪堿造模,研究各配伍藥物對模型動物學習和記憶的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),除杜仲+核桃仁外,其余配伍組均能不同程度延長模型小鼠在跳臺實驗中的學習記憶潛伏期(P0.05或P0.01);同時六種配伍提取物均能明顯降低模型小鼠在Morris水迷宮中的逃逸潛伏期(P0.05或P0.01),顯著增加模型小鼠在目的象限滯留時間百分比(P0.05或P0.01),升高目的象限運動距離百分比(P0.05或P0.01)。進一步機制研究發(fā)現(xiàn),青娥方不同配伍組可顯著降低小鼠海馬區(qū)域AChE活性(P0.01),增加BDNF的含量。其中以青娥全方的改善效果最為顯著。青娥方及其配伍組均具有改善東莨菪堿致小鼠短暫記憶障礙的效果,且全方效果優(yōu)于兩兩配伍組和君藥杜仲組及臣藥補骨脂組。該研究從青娥方對學習記憶的改善效果及其機制方面證實了其配伍的的合理性。(二)復(fù)方黨參膠囊的藥學研究(1)提取工藝研究:采用L9(34)正交設(shè)計,以總多糖、總黃酮、總皂苷含量為指標,優(yōu)選最佳的復(fù)方黨參方提取工藝。優(yōu)選的提取工藝為:藥材按處方配比混合后,以8倍量水浸泡4 h,提取3次,三次加水量分別為8,6,6,1 h/次。該工藝條件下,提取率可達到47.16%,提取物中總多糖含量為700.05mg/g,總黃酮含量為12.27mg/g,總皂苷含量為111.88mg/g。(2)提取物體外抗氧化研究:研究復(fù)方黨參方提取物對1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(dpph)、羥自由基(·oh)、超氧陰離子自由基(o2-·)的清除能力,結(jié)果發(fā)現(xiàn)復(fù)方黨參方提取物在0.04~1.23mg/ml濃度范圍內(nèi),對三種自由基均有清除能力,且隨著濃度的增大,清除能力增強。(3)劑型的選擇及制劑工藝研究:按擬定的膠囊劑進行實驗設(shè)計。以提取物和不同輔料組成的混合物的吸濕百分率為指標確定輔料的類型和比例;以成型率及制粒難易度為指標,篩選制劑最佳的成型工藝。最終確定的輔料為微晶纖維素:糊精為1:3,且藥:輔比為1.5:1時,以60%乙醇為潤濕劑,制得的囊心物流動性較小,滿足生產(chǎn)需求。因此優(yōu)選的制劑工藝為:以1.5:1的比例加入輔料(微晶纖維素:糊精=1:3),加60%乙醇作為潤濕劑,20目篩制粒,80℃干燥,整粒,裝囊。(4)質(zhì)量標準研究:從定性鑒別、含量測定及檢查三方面對復(fù)方黨參膠囊進行質(zhì)量控制研究。結(jié)果在薄層色譜鑒別中制劑中的當歸、枸杞子、大黃斑點清晰,準確,且陰性無影響;在檢查中,水分,裝量差異及崩解時限均符合《中國藥典》2015年版的相關(guān)要求;在含量測定中,作為制劑中定量指標的有效成分還原糖、總黃酮及總皂苷的平均含量分別為:23.20g/100g,8.71mg/100g,1.20g/100g。(5)抗氧化功能評價:按照《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范(2003版)》中抗氧化功能檢驗的方法,分別研究了復(fù)方黨參膠囊對d-半乳糖致衰老模型小鼠和60coγ射線輻照模型小鼠血清及肝臟中丙二醛(mda)水平、總超氧化物歧化酶(t-sod)和谷胱甘肽過氧化物酶(gsh-px)活性的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在d-半乳糖衰老模型中,復(fù)方黨參膠囊的中(1.2g/kg)、低劑量(0.6g/kg)均能明顯提高小鼠血清和肝臟中t-sod活性(p0.05或p0.01),顯著提高血清中g(shù)sh-px活性(p0.05或p0.01),顯著降低肝組織中mda含量(p0.01);高劑量(2.4g/kg)能顯著降低血清和肝臟中mda含量(p0.05或p0.01),同時顯著提高血清中t-sod活性(p0.01)。在60coγ輻照模型中,復(fù)方黨參膠囊的高劑量能夠顯著升高模型小鼠血清和肝臟中的gsh-px活性(p0.05或p0.01),同時還可以顯著降低模型小鼠肝臟中mda含量(p0.01)和提高t-sod活性(p0.05)。中劑量能夠顯著提高肝臟中g(shù)sh-px活性和降低mda含量(p0.01)。按保健食品抗氧化功能評價中動物實驗結(jié)果的判定標準,可證實該復(fù)方黨參膠囊具有抗氧化保健功能。
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

蘭州大學碩士學位論文 青娥方及復(fù)方黨參方的藥學研究1.4 研究內(nèi)容1.4.1 青娥方不同配伍對東莨菪堿模型小鼠學習記憶的改善效果考慮到青娥方各組分均具有改善學習記憶的作用，但青娥方全方改善學習記憶的研究報道較少。因此本論文擬研究青娥方及其各配伍組對東莨菪堿致小鼠學習記憶的改善作用以及其配伍的合理性。具體研究內(nèi)容包括：昆明小鼠隨機分為 9 組：⑴空白組；⑵模型組；⑶陽性組；⑷杜仲組；⑸杜仲＋補骨脂組；⑹杜仲＋核桃仁組；⑺杜仲＋大蒜組；⑻杜仲＋補骨脂＋核桃仁＋大蒜組；⑼補骨脂組；空白組和模型組灌胃等量自來水，各治療組灌胃給予相應(yīng)的配伍提取液 2 g/kg。從第 15 天開始，用氫溴酸東莨菪堿造模，并進行行為學實驗；在行為學實驗結(jié)束后，取各組小鼠的海馬區(qū)，檢測海馬區(qū)乙酰膽堿酯酶的活性和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子的含量的變化，以此探討青娥方不同配伍對學習記憶影響的機制（技術(shù)路線圖見圖 1-1）。

大學碩士學位論文 青娥方及復(fù)方黨參方的藥學研究3.以吸濕百分率為指標確定輔料的類型和比例；以成型率及制粒難易度為指篩選最佳成型工藝條件。4.根據(jù)國家相關(guān)部門對中藥新藥的管理規(guī)定，從定性鑒別、含量測定及檢查面對復(fù)方黨參膠囊的質(zhì)量控制內(nèi)容進行試驗研究。5.以 D-半乳糖和輻照的方式制造衰老模型，給予相應(yīng)的藥物治療后，觀察模物體內(nèi) MDA 含量、SOD 和 GSH-Px 活力的變化，確定復(fù)方黨參膠囊的功效。技術(shù)路線見圖 1-2。

【參考文獻】

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本文編號：2742556