發(fā)布時間：2020-07-05 05:15

【摘要】：靈芝是我國具有悠久歷史的藥食兼用真菌,具有補(bǔ)氣安神,止咳平喘,延年益壽的功效。靈芝中含有多糖類、氨基酸類、三萜類、生物堿類等化合物,其中多糖和三萜類化合物是主要的兩類活性物質(zhì)。本研究采用醇提萃取和水提醇沉等方法提取分離出靈芝三萜類化合物和靈芝多糖,結(jié)合化學(xué)和波譜學(xué)方法分析了兩類活性物質(zhì)的化學(xué)成分;利用腹腔注射LPS構(gòu)建小鼠急性肺損傷模型,通過計(jì)數(shù)肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞總數(shù),測定肺組織、血清、BALF中的TNF-α、IL-1β含量和肺組織中MPO含量,以及western blotting和EMSA分析炎性信號通路的表達(dá)情況,對靈芝三萜類化合物和多糖干預(yù)肺損傷作用進(jìn)行比較。以期進(jìn)一步闡明靈芝中起到主要預(yù)防肺損傷的有效成分,為研究靈芝預(yù)防肺損傷提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:(1)通過醇提萃取、水提醇沉、severg法脫蛋白等方法分別獲得靈芝三萜類化合物(GT)和靈芝多糖(GLP)這兩類活性物質(zhì),利用高效液相、液質(zhì)聯(lián)用、紅外光譜法、PMP衍生化、GC-MS等方法對活性物質(zhì)進(jìn)行分析,GT主要由ganoderic acid C2、ganoderic acid C6、ganoderic acid G、ganoderic acid B和ganoderic acid E等物質(zhì)組成,與參考文獻(xiàn)結(jié)果相符,GLP主要由葡萄糖和少量的甘露糖、半乳糖組成,甲基化分析顯示糖苷鍵連接方式為1-linked D-Glcp、1,3-linked D-Glcp、1,4-linked D-Glcp、1,6-linked D-Glcp、1,2,6-linked D-Glcp、1,6-linked D-Galp、1,2,6-linked D-Galp和1,3,6-linked D-Manp。(2)靈芝三萜類化合物和靈芝多糖對急性肺損傷小鼠炎性指標(biāo)的干預(yù)作用比較:腹腔注射LPS致小鼠急性肺損傷后,小鼠體重明顯降低,肺組織濕/干比和肺系數(shù)均顯著升高,肺泡灌洗液(BALF)中的細(xì)胞總數(shù)明顯增加,肺組織中的髓過氧化物酶(MPO)含量升高,此外,肺組織結(jié)構(gòu)遭到破壞,大量炎性細(xì)胞浸潤肺組織,支氣管收縮,肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張充血,CD68陽性巨噬細(xì)胞在肺組織氣管內(nèi)聚集,表現(xiàn)出明顯的肺損傷和肺氣腫傾向。兩類藥物組均可有效抑制小鼠體重減輕和肺組織濕/干比及肺系數(shù)的升高,降低BALF中的細(xì)胞含量和肺組織中的MPO含量,緩解肺組織損傷程度,減少肺組織中炎性細(xì)胞的浸潤及陽性巨噬細(xì)胞的聚集,且表現(xiàn)出一定的劑量依賴關(guān)系。同時GLP藥物組的干預(yù)效果優(yōu)于GT藥物組,對急性肺損傷具有更好的保護(hù)作用。(3)靈芝三萜類化合物和靈芝多糖對急性肺損傷小鼠炎性信號通路的干預(yù)作用比較:小鼠急性肺損傷后,與正常組相比,肺組織、血清和BALF中的促炎因子TNF-α、IL-1β含量顯著升高,上調(diào)肺組織中p-p38、p-ERK1/2、p-JNK、p-NFκBp65及IκB的蛋白表達(dá)水平及NF-κB和AP-1中的DNA結(jié)合活性。與模型組相比,兩類藥物組均可有效降低肺組織、血清和BALF中TNF-α、IL-1β含量,抑制MAPK和NF-κB炎性信號通路中特征性蛋白p-p38、p-ERK1/2、p-JNK、p-NFκBp65和IκB的表達(dá),降低LPS致小鼠肺損傷中的NF-κB和AP-1中的DNA結(jié)合活性,并表現(xiàn)出一定的劑量依賴關(guān)系。同時GLP藥物組的干預(yù)效果優(yōu)于GT藥物組,對急性肺損傷具有更好的保護(hù)作用。綜上所述,兩類藥物組均可緩解小鼠急性肺損傷,抑制炎性因子表達(dá),調(diào)控炎性信號通路,干預(yù)肺部炎癥的產(chǎn)生,且GLP干預(yù)效果優(yōu)于GT。
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

ALI 癥狀的方法藥物主要使用的抗炎藥有地塞米松片劑及地塞米松磷酸鈉注射液，通過上調(diào)糖皮質(zhì)激素受體水平和促進(jìn)糖皮質(zhì)激素受體蛋白的核激素受體在肺中的表達(dá)，來減輕 LPS 誘導(dǎo)的大鼠 ALI 后的肺部9]。早期有研究通過使用地塞米松藥物抑制了細(xì)胞因子 mRNA損傷癥狀[10-11]。除地塞米松[12]抗炎藥外，包括布地奈德[13]在內(nèi)治療均可預(yù)防性改善急性肺損傷癥狀。除了糖皮質(zhì)激素之外，影響細(xì)胞因子和趨化因子的表達(dá)來降低肺損傷，如抑制磷酸二丙戊茶堿[14-15]，可通過增加環(huán)磷酸腺苷，減少 TNF-α 的合成，皮細(xì)胞中 ICAM-1 的表達(dá)[16]。幾種抗生素，如氟苯尼考[17]，四19]，可減少 TNF-α 等炎癥介質(zhì)在肺泡灌洗液(bronchoalveolar lav圖 1. 1 LPS 誘導(dǎo)急性肺損傷的生物學(xué)機(jī)制[8]Fig 1.1 Biological Mechanism of LPS-inducedAcute Lung Injury[8]

合肥工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文品中的應(yīng)用，它所帶來的經(jīng)濟(jì)效益不容小覷美元的靈芝產(chǎn)業(yè)[33-34]，靈芝的巨大價值已被物學(xué)家 P. Karsten 發(fā)現(xiàn)并建立了靈芝屬，可靈芝亞屬 3 種，其中以靈芝作為靈芝屬的代表 20 世紀(jì)初在我國貴州省發(fā)現(xiàn)的靈芝[36]。目全球各地，大致從歐洲的溫帶到非洲的熱帶，非洲中部，南美及亞洲東部。靈芝在中國現(xiàn)，地理分布范圍涵蓋我國 29 個省市，若將從我國東北部的大興安嶺至西藏東南部畫一高寒的氣候不適于靈芝繁殖生長等原因，只地區(qū)氣候類型多樣，各種靈芝均有所分布，變化劃分為熱帶、亞熱帶和溫帶這 3 個分布

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2742141