發(fā)布時(shí)間：2020-07-03 14:41

【摘要】：選題依據(jù):中藥質(zhì)量關(guān)系著中藥臨床應(yīng)用的安全性和有效性。目前中藥質(zhì)量評價(jià)很大程度上參照西藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)模式,測定一個(gè)或幾個(gè)指標(biāo)性成分的含量,忽視了中藥化學(xué)組成的整體性。指紋圖譜的使用雖可從整體角度全面表征中藥的化學(xué)信息,但無法有效闡釋中藥的化學(xué)成分與藥效之間的內(nèi)在關(guān)系,不足以體現(xiàn)中醫(yī)藥臨床配伍用藥的特點(diǎn)。黃芪為多年生草本豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根。具有益氣、固表、托毒生肌和利水退腫等功效,是典型的多效中藥。即一味中藥具有多種功能,置于不同的復(fù)方“配伍環(huán)境”中針對不同的病癥發(fā)揮出不同的功效。目前,黃芪主要通過檢測黃芪甲苷與毛蕊異黃酮苷的含量進(jìn)行質(zhì)量評價(jià),未能有效闡明黃芪在具體復(fù)方“配伍環(huán)境”條件下的定向“物質(zhì)基礎(chǔ)”。課題組基于多效黃芪的前期物質(zhì)基礎(chǔ)研究以及中醫(yī)辨證論治觀的思想,提出了新的辨識多效中藥定向藥效成分的新的研究策略,即從方劑入手研究多效中藥的定向藥效成分,且該中藥在方劑中處于君藥地位,辨識中藥在復(fù)方配伍環(huán)境中作用于特定病癥的“定向藥效成分群”。故,本研究將黃芪置于“黃芪建中湯”配伍環(huán)境中,以慢性萎縮性胃炎為藥效評價(jià)環(huán)境,應(yīng)用現(xiàn)代科學(xué)方式闡明黃芪對該復(fù)方的藥效貢獻(xiàn),利用譜效關(guān)系方法闡釋黃芪化學(xué)成分與藥效指標(biāo)之間的聯(lián)系,最終鎖定黃芪發(fā)揮定向藥效的活性成分群,為黃芪的定向質(zhì)量評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。目的:闡明黃芪建中湯中黃芪的藥效貢獻(xiàn)作用,分析黃芪發(fā)揮定向藥效的活性成分群,為黃芪的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。方法:(1)通過復(fù)制慢性萎縮性胃炎大鼠模型,設(shè)置黃芪、飴糖、缺黃芪或飴糖的陰性方、黃芪建中湯全方5個(gè)給藥組,以一般狀態(tài)、體重、胃液生化指標(biāo)、胃組織病理為傳統(tǒng)藥效學(xué)指標(biāo),采用~1H-NMR和LC-MS代謝組學(xué)方法分別對各組大鼠血清和胃組織線粒體代謝輪廓進(jìn)行分析,系統(tǒng)比較各給藥組藥效差異,探討黃芪對黃芪建中湯的藥效貢獻(xiàn)作用。(2)通過大孔吸附樹脂將黃芪化學(xué)成分分離為三個(gè)部位:水洗脫部位(A)、35%乙醇洗脫部位(B)和95%乙醇洗脫部位(C),與缺黃芪的陰性方組合形成不同配伍的黃芪建中湯,利用LC-MS技術(shù)對復(fù)方黃芪的化學(xué)成分進(jìn)行表征。并用于對慢性萎縮性胃炎大鼠的干預(yù)研究,從化學(xué)成分含量、傳統(tǒng)藥效學(xué)與血清核磁代謝組學(xué)三個(gè)角度探討黃芪不同化學(xué)部位對復(fù)方的藥效貢獻(xiàn)作用。(3)采用灰色關(guān)聯(lián)度與偏最小二乘法兩種關(guān)聯(lián)分析方法,探究黃芪不同化學(xué)部位成分分別與體重、胃液pH值、胃蛋白酶活性以及血清代謝組學(xué)數(shù)據(jù)之間的關(guān)系,進(jìn)一步篩選黃芪建中湯中黃芪治療慢性萎縮性胃炎的有效成分群。結(jié)果:(1)黃芪對黃芪建中湯的貢獻(xiàn)結(jié)果表明:與正常組相比,模型組大鼠狀態(tài)不佳、體重明顯減輕、胃液pH值顯著升高、胃蛋白酶活性顯著降低、血清與線粒體內(nèi)源性代謝紊亂。經(jīng)給藥后各組均有不同程度的回調(diào),其中黃芪建中湯全方治療效果最好,其次為黃芪與飴糖陰性方組,黃芪陰性方效果較差,明確并驗(yàn)證了黃芪對復(fù)方的藥效貢獻(xiàn)。(2)在黃芪不同化學(xué)部位配伍的黃芪建中湯指紋圖譜中,共鑒定并歸屬了24個(gè)黃芪的化學(xué)成分。傳統(tǒng)藥效學(xué)與血清代謝組學(xué)研究顯示,黃芪不同化學(xué)部位配伍的黃芪建中湯對體重、胃液pH值、胃蛋白酶活性以及血清差異代謝物均有不同程度的回調(diào)。其中,黃芪建中湯全方回調(diào)作用最好,黃芪不同化學(xué)部位組合后比單個(gè)化學(xué)部位的回調(diào)作用較好,黃芪陰性方的效果較差。(3)采用灰色關(guān)聯(lián)度方法對24個(gè)化學(xué)成分色譜峰的面積與各藥效指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行關(guān)聯(lián)分析,結(jié)果表明24個(gè)化學(xué)成分與藥效數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)度均大于0.6,本研究選擇前12個(gè)關(guān)聯(lián)度較大的成分進(jìn)行分析,與體重相關(guān)的關(guān)聯(lián)序?yàn)?14131521101212082297;與胃液pH值相關(guān)的關(guān)聯(lián)序?yàn)?281991016171213152422;與胃蛋白酶活性相關(guān)的關(guān)聯(lián)序?yàn)?124681511249221714。綜合傳統(tǒng)藥效數(shù)據(jù)相關(guān)的化學(xué)成分,獲得4個(gè)共有的成分,分別為8(3-Hydroxy-9,10-dimethoxyptercarpan)、9(7,2'-Dihydroxy-3,4'-dimethoxy isoflavan)、15(Formononetin-7-o-glc-6''-o-acetate)、22(Isoastragaloside I),表明這些成分可能為關(guān)鍵的活性成分。與血清代謝組學(xué)相關(guān)的關(guān)聯(lián)序?yàn)?2861524229177192111。其中與傳統(tǒng)藥效數(shù)據(jù)相關(guān)的4個(gè)關(guān)鍵成分均在代謝組學(xué)結(jié)果中找到,進(jìn)一步驗(yàn)證了傳統(tǒng)藥效指標(biāo)結(jié)果�；疑�關(guān)聯(lián)度只能分析變量間的密切程度,無法識別方向的相關(guān)關(guān)系,因此本課題同時(shí)采用偏最小二乘法進(jìn)行回歸分析篩選活性成分,顯示變量間的關(guān)系,彌補(bǔ)灰色關(guān)聯(lián)度這一弱勢,篩選回歸系數(shù)大于0的成分作為黃芪的活性成分。其結(jié)果表明,與體重相關(guān)的活性成分依次為:819211922161071813241723;與胃液pH值相關(guān)的活性成分依次為:8131792111819231016227;與胃蛋白酶活性相關(guān)的活性成分依次為:131721189811210222415236719165。綜合傳統(tǒng)藥效數(shù)據(jù)相關(guān)的化學(xué)成分,獲得13個(gè)共有的成分,順序?yàn)?8291113191718221016723。該成分主要為黃芪黃酮類與皂苷類成分。與血清代謝組學(xué)相關(guān)的活性成分依次為:138921171018112221516724。其中與傳統(tǒng)藥效指標(biāo)共有的活性成分為2(Calycosin-7-O-B-D-glycoside)、7(Calycosin-7-o-glc-6''-o-acetate)、8(3-Hydroxy-9,10-dimethoxyptercarpan)、9(7,2'-Dihydroxy-3,4'-dimethoxyisoflavan)、10(Dihydroxy-3',4'-dimethoxyisoflavane-glucoside)、11(Calycosin)、16(Dihydroxy-trimethoxy DHIF)、17(Astragaloside IV)、18(Astragaloside III)、22(Isoastragaloside I),該活性成分主要為黃芪黃酮類與皂苷類。灰色關(guān)聯(lián)相關(guān)的活性成分可在偏最小二乘分析相關(guān)的活性成分中找到,分別為8(3-Hydroxy-9,10-dimethoxyptercarpan)、9(7,2'-Dihydroxy-3,4'-dimethoxy isoflavan)、22(Isoastragaloside I),表明這三種成分為黃芪發(fā)揮藥效的關(guān)鍵活性成分,同時(shí)表明利用這兩種方法的結(jié)合進(jìn)行譜效關(guān)系分析可優(yōu)勢互補(bǔ)與相互驗(yàn)證。皮爾遜相關(guān)分析表明黃芪中總糖與各藥效指標(biāo)之間也存在較強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性。因此,黃芪中各成分相互作用、相互協(xié)同達(dá)到治療慢性萎縮性胃炎的最佳效果,同時(shí)證明了黃芪的加入為小建中湯的藥效增強(qiáng)了益氣建中之力。結(jié)論:本課題利用傳統(tǒng)藥效指標(biāo)與代謝組學(xué)方法驗(yàn)證了黃芪對黃芪建中湯的藥效貢獻(xiàn),利用譜效關(guān)系技術(shù)鎖定了黃芪在復(fù)方中發(fā)揮益氣建中作用的活性成分,為黃芪的定向質(zhì)量控制提供了依據(jù),也為后期黃芪內(nèi)在質(zhì)量的闡釋提供了參考依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

OPLS-DA 增大組間差異，提取兩組樣本間與疾病有關(guān)的差異代謝物。.0 進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，結(jié)合 S-plot 圖以及 VIP 值，最終確定與疾病相關(guān)的驗(yàn)結(jié)果芪對黃芪建中湯干預(yù)慢性萎縮性胃炎的傳統(tǒng)藥效影響狀態(tài)：正常組大鼠無異常狀況，精神良好，皮毛光亮，動作敏捷，大組大鼠精神逐漸萎靡，毛色枯黃，食欲差，體型消瘦，出現(xiàn)瞇眼與便藥后，大鼠上述癥狀均出現(xiàn)不同程度的改善，其中 HQJZ 組改善作用 組與 YY 組改善作用次之，HY 組改善作用較弱。：體重的減輕是慢性萎縮性胃炎病狀的一個(gè)典型特征。如圖 1 所示，的增加，模型組體重明顯低于正常組。經(jīng)給藥治療后體重均有不同程其中 HQJZ 組的效果最佳；HQ 組與 YY 組改善作用次之，HY 組改善

第三章 黃芪對黃芪建中湯干預(yù)慢性萎縮性胃炎的藥效貢獻(xiàn)研究模型組大鼠胃黏膜變薄，部分粘膜脫落，嗜酸性粒細(xì)胞浸潤，腺體萎縮甚至裂，為典型的慢性萎縮性胃炎病理特征，證明造模成功。經(jīng)藥物治療后，胃傷均有不同程度的改善，其中 HQJZ 組的胃黏膜保護(hù)作用最明顯，僅為極輕HQ 組的效果次之；HY 組的效果較差，出現(xiàn)粘膜上皮細(xì)胞中度水樣變性及壞

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