發(fā)布時間：2020-07-03 06:39

【摘要】：目的:紅景天苷(Salidroside,SAL)是植物紅景天(Rhodiola rosea)的主要生物活性成分。已有研究表明紅景天苷可通過改善胰島素抵抗(insulin resistance,IR)而具有治療2型糖尿病(Type 2 Diabetes,T2DM)的作用。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)能促進棕櫚酸(palmitic acid,PA)跨血管內(nèi)皮細胞轉(zhuǎn)運,并介導心肌胰島素抵抗。本課題擬研究紅景天苷對TNF-α促PA跨心肌微血管內(nèi)皮細胞(Cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)穿胞(transcytosis)轉(zhuǎn)運促發(fā)心肌胰島素抵抗的作用及其機制。方法:(1)利用脂肪酸體外穿胞模型,檢測紅景天苷、半胱天冬酶caspase-1抑制劑(Ac-YVAD-cmk)對TNF-α促脂肪酸跨微血管內(nèi)皮細胞穿胞作用的影響。(2)采用蛋白印跡(Western Blotting)方法檢測NLRP3,pro-caspase-1,caspase-1,pro-白介素-1β(pro-Interleukin-1β,pro-IL-1β)及白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)的表達,考察紅景天苷對TNF-α激活NLRP3炎癥小體的作用。(3)采用2',7'-二氯二氫熒光素二乙酸酯(2',7'-Dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)和MitoSOX~(TM) Red熒光探針檢測細胞內(nèi)活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)和線粒體內(nèi)超氧陰離子水平,考察紅景天苷對TNF-α增加內(nèi)皮細胞氧化應激的作用。(4)在原代SD大鼠的乳鼠心肌細胞和CMECs共培養(yǎng)模型中,檢測在胰島素刺激下,心肌細胞對2-[N-(7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑-4-基氨基)-2-脫氧-D-葡萄糖(2-[N-(7-nitrobenz2-oxa-1,3-diaz-ol-4-ylamino)-2-deoxy-D-glucose,2-NBDG)的攝取;在細胞水平考察紅景天苷對TNF-α與PA協(xié)同誘導心肌胰島素抵抗的影響。(5)在動物實驗中,采用小動物正電子發(fā)射斷層掃描(Positive emission tomography,PET)檢測胰島素刺激下心臟對~(18)F-2-氟-D-脫氧-葡萄糖(~(18)F-2-fluro-D-deoxy-glucose,~(18)F-FDG)攝取量,計算百分注射劑量率(%ID/cc)。處死小鼠收集心肌組織樣本,使用γ計數(shù)儀直接測定心臟放射值,在整體動物水平上考察紅景天苷對TNF-α與PA協(xié)同誘導心肌胰島素抵抗的影響。結(jié)果:(1)利用脂肪酸穿胞模型可觀察到TNF-α增加脂肪酸跨CMECs的穿胞,紅景天苷可抑制TNF-α促脂肪酸穿胞的作用。半胱天冬酶caspase-1抑制劑(Ac-YVAD-cmk)也可抑制TNF-α促脂肪酸穿胞的作用,而Ac-YVAD-cmk加SAL預處理與單用Ac-YVAD-cmk相比,在抑制TNF-α促脂肪酸穿胞的作用中沒有顯著差異。(2)Western Blotting結(jié)果顯示,TNF-α可顯著增加NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1和IL-1β的表達,而紅景天苷可顯著抑制TNF-α引起NLRP3、IL-1β的表達。(3)通過使用DCFH-DA熒光探針,TNF-α可導致CMECs內(nèi)ROS水平時間依賴性的升高;而紅景天苷可抑制TNF-α引起的內(nèi)皮細胞中ROS水平的升高。使用MitoSOX~(TM) Red熒光探針檢測CMECs線粒體超氧陰離子水平,發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象,即隨著TNF-α孵育時間的延長,線粒體超氧陰離子水平不斷升高;紅景天苷對此也有抑制作用。(4)CMECs-心肌細胞共培養(yǎng)實驗中,TNF-α與PA共孵育CMECs加重了心肌細胞胰島素抵抗,而紅景天苷預處理可顯著減弱這一作用。(5)小動物PET結(jié)果顯示,TNF-α+PA組小鼠胰島素刺激的心臟~(18)F-FDG攝取明顯減少,而紅景天苷預處理可改善TNF-α+PA引起的胰島素刺激心臟~(18)F-FDG攝取的降低。心臟組織γ計數(shù)檢測的結(jié)果與PET掃描結(jié)果一致。結(jié)論:TNF-α可引起CMECs細胞內(nèi)ROS和線粒體內(nèi)超氧陰離子水平的上調(diào)及NLRP3炎癥小體的激活,NLRP3炎癥小體的激活參與了TNF-α促進PA在心肌微血管內(nèi)皮細胞的穿胞轉(zhuǎn)運,進而加重PA所引起的心肌細胞胰島素抵抗的作用。而紅景天苷可能通過降低TNF-α引起的氧化應激增加和NLRP3激活,發(fā)揮抑制TNF-α促脂肪酸穿胞及誘發(fā)胰島素抵抗的作用。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張沙沙;曹葉偉;李姣;朱肖翔;劉亞洲;姜靜雨;;高效液相法測定西藏紅景天飲料中紅景天苷[J];檢驗檢疫學刊;2019年01期

2 蒲忠慧;陳希文;王雄清;劉紅軍;孫小程;趙順?gòu)?;均勻設計法優(yōu)選紅景天苷提取工藝的研究[J];食品研究與開發(fā);2016年14期

3 陳熙;丁斌;蒲順昌;丁夢祥;朱婷婷;劉星月;龍昌輝;;紅景天保健酸奶的生產(chǎn)工藝研究[J];食品界;2018年08期

4 秦紅麗;;紅景天的藥理研究進展及臨床應用[J];人人健康;2017年12期

5 次仁巴姆;趙曉玲;馬興斌;王靜;佘永新;色珠;吳金措姆;四郎玉珍;拉巴次旦;白瑪玉珍;李寶海;;人工種植紅景天不同藥用部位中紅景天苷的含量測定[J];中國實驗方劑學雜志;2014年08期

6 安偉建;陳冠;王文彤;陶遵威;劉偉新;;HPLC法測定不同產(chǎn)地紅景天屬植物中紅景天苷[J];中草藥;2007年07期

7 劉洪玲;孫向紅;孫偉;;HPLC法測定康壽靈合劑中紅景天苷[J];中草藥;2006年06期

8 馬瀟,黃曉萍,宋玉成,王蘭霞,張伯崇;HPLC法測定扶康膠囊中紅景天苷的含量[J];中國藥事;2003年10期

9 羅秀珍,鐘忠,謝忱,徐麗珍,楊世林;HPLC測定RGA膠囊中紅景天苷的含量[J];中國中藥雜志;2002年03期

10 杜麗;王楠;馬玲;;紅景天治療低氧性肺動脈高壓的分子藥理研究進展[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2019年24期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李天奇;范維琥;李勇;羅心平;;紅景天苷對兔股動脈粥樣斑塊模型穩(wěn)定性的影響[A];中華醫(yī)學會心血管病學分會第八次全國心血管病學術(shù)會議匯編[C];2006年

2 林海泓;朱軍;施海明;羅心平;;紅景天苷對人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖、分泌的影響[A];第八次全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病學術(shù)會議論文集[C];2007年

3 林海泓;朱軍;施海明;羅心平;;紅景天苷對人骨髓間充質(zhì)干細胞增殖、分泌的影響[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病中青年醫(yī)師論壇論文匯編[C];2008年

4 林海泓;羅心平;朱軍;施海明;范維琥;;紅景天苷對間充質(zhì)干細胞增殖、分泌影響的實驗研究[A];第十次中國中西醫(yī)結(jié)合學會心血管病學術(shù)大會暨第五次江西省中西醫(yī)結(jié)合學會心血管病學術(shù)大會論文匯編[C];2010年

5 羅維;張鵬;艾磊;周越;陳曉萍;;不同濃度紅景天苷對成肌細胞體外分化的影響及可能機制[A];2015第十屆全國體育科學大會論文摘要匯編(二)[C];2015年

6 孟凡欣;趙成國;楊東生;趙明智;劉明石;滕利榮;;紅景天類脂質(zhì)體制劑耐缺氧活性研究[A];第六屆泛環(huán)渤海生物化學與分子生物學會學術(shù)交流會論文集[C];2016年

7 季宇彬;王瑩;汲晨鋒;;紅景天苷對運動性疲勞影響的研究[A];2008第十一次全國臨床藥理學學術(shù)大會論文集[C];2008年

8 張學偉;張敏;;紅景天苷對樹突狀細胞表型和功能的影響[A];第十二屆全國免疫學學術(shù)大會摘要匯編[C];2017年

9 黃曉穎;樊榮;盧圓圓;林乾頂;;紅景天苷對常壓肺心病大鼠保護作用的研究[A];中華醫(yī)學會呼吸病學年會——2011（第十二次全國呼吸病學學術(shù)會議）論文匯編[C];2011年

10 孟凡欣;趙成國;楊東生;趙明智;劉明石;滕利榮;;紅景天類脂質(zhì)體制劑抗缺血再灌注活性研究[A];第六屆泛環(huán)渤海生物化學與分子生物學會學術(shù)交流會論文集[C];2016年

相關(guān)重要報紙文章 前6條

1 記者 李哲 通訊員 張華;大腸桿菌“互養(yǎng)”可合成紅景天苷[N];健康報;2018年

2 記者 孫玉松 通訊員 張華;大腸桿菌“合體”讓紅景天苷實現(xiàn)高產(chǎn)[N];科技日報;2018年

3 主任醫(yī)師 楊峰;紅景天消疲抗缺氧奇藥[N];21世紀藥店;2017年

4 記者 李仲宏;新工藝提取紅景天苷[N];阿壩日報;2008年

5 鐘顯飛 蔣明德;四川實驗證實:紅景天苷可誘導HSC細胞凋亡[N];中國醫(yī)藥報;2005年

6 本報首席記者 許琦敏;科研老兵，有責任在最困難之處開辟道路[N];文匯報;2019年

相關(guān)博士學位論文 前10條

1 李慧;紅景天苷對大氣細顆粒物致小鼠皮膚衰老的干預作用及初步機制探究[D];南方醫(yī)科大學;2018年

2 劉永;紅景天苷口服給藥后藥代動力學及在體腸吸收特性研究[D];東北林業(yè)大學;2017年

3 吳雷濤;DJ-1/Nrf2通路在紅景天苷保護多巴胺神經(jīng)元中的作用及機制[D];中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學;2018年

4 趙迎春;紅景天苷抑制骨肉瘤143B細胞侵襲、遷移及其機制的實驗研究[D];武漢大學;2018年

5 蘇義基;紅景天苷干預NF-κB及MAPK信號通路影響大鼠脊髓損傷模型運動功能的研究[D];廣西醫(yī)科大學;2017年

6 趙武奇;紅景天苷緩釋微囊技術(shù)及其優(yōu)化研究[D];吉林大學;2004年

7 馬莉;紅景天苷抗疲勞作用及其機制的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學;2006年

8 曹立莉;紅景天苷、DL0108及AV的神經(jīng)保護作用及機制研究[D];沈陽藥科大學;2005年

9 李天奇;紅景天和麝香保心丸對兔動脈粥樣斑塊穩(wěn)定性的影響及機制研究[D];復旦大學;2006年

10 魯華;紅景天苷對高糖環(huán)境下小鼠足細胞的保護作用及機制研究[D];河北醫(yī)科大學;2017年

相關(guān)碩士學位論文 前10條

1 劉書麗;紅景天苷抑制TNF-α促棕櫚酸跨血管內(nèi)皮轉(zhuǎn)運及介導心肌胰島素抵抗的作用及其機制研究[D];華中科技大學;2019年

2 常艷秋;輻照紅景天乙醇提取物降血糖作用的研究[D];延邊大學;2019年

3 林曉堅;紅景天苷抗血小板活性及抗血栓作用的研究[D];貴州醫(yī)科大學;2019年

4 馬瑩;紅景天苷對應激性高糖H9c2心肌細胞的保護作用及機制研究[D];南京中醫(yī)藥大學;2019年

5 彭正虹;紅景天苷對STZ誘導的糖尿病大鼠晶狀體保護作用及機制的研究[D];西南醫(yī)科大學;2019年

6 戴滋瀛;紅景天苷對胃癌細胞抑瘤機制及化療增敏作用的研究[D];蘭州大學;2019年

7 姜夢嫣;基于UDPG原位再生體系合成紅景天苷的研究[D];北京農(nóng)學院;2018年

8 程仕強;紅景天苷對巨噬細胞極化的調(diào)控及對巨噬細胞中脂質(zhì)積累的影響[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2018年

9 史佩;紅景天苷對不同海拔條件下大鼠心肌細胞凋亡及相關(guān)蛋白表達的影響[D];甘肅中醫(yī)藥大學;2018年

10 楊立霞;紅景天苷通過PI3K/Akt/HIF-1α途徑減弱急性低壓低氧誘導的心肌損傷的機制研究[D];甘肅中醫(yī)藥大學;2018年

本文編號：2739329