發(fā)布時間：2020-07-03 02:16

【摘要】：目的觀察溫補腎陽法對CUMS抑郁模型大鼠AC-cAMP-PKA信號通路的影響,和通過對大鼠大腦組織的光鏡下觀察,確定大鼠抑郁模型的病理變化及治療效果,探索其作用機理,為臨床使用提供依據(jù)。方法選用體重(200±20g)和Open-Field法評分相近的雄性SD大鼠84只,分為兩部分,各部分隨機分為4組,即空白組,抑郁癥模型組,溫補腎陽方組、鹽酸氟西汀組。采用目前國際最為公認(rèn)的CUMS法建立大鼠抑郁癥模型,共安排21天,每2種刺激不能連續(xù)出現(xiàn)。7種不同刺激交替出現(xiàn)2l天后,用Open-Field實驗進(jìn)行評估,判斷造模是否成功。采取灌胃給藥方式。從實驗22天開始,溫補腎陽方組、鹽酸氟西汀組分別灌胃給予相應(yīng)藥物�？瞻捉M、抑郁癥模型對照組灌以等量生理鹽水。每日1次,連續(xù)21天。第一部分共60只大鼠取海馬組織,酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa)測定AC、cAMP含量,用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測海馬組織PKAc蛋白水平。第二部分共24只大鼠取腦組織,經(jīng)脫水、修剪、包埋、切片、HE染色、封片等程序,最后鏡檢,分標(biāo)本照相并硬盤記錄數(shù)據(jù)。結(jié)果1.Open-Field實驗結(jié)果:第一部分針對58只大鼠的Open-Field實驗結(jié)果顯示除空白組外,其余各組大鼠經(jīng)過21天慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激(CUMS)刺激后,均表現(xiàn)出不同程度抑郁樣改變。Open-Field實驗中各模型組造模后水平得分、垂直得分顯著降低(P0.01),提示CUMS刺激引起大鼠運動能力和探索能力下降,造模成功。各組大鼠經(jīng)過21天的灌胃處理后,溫補腎陽方組、鹽酸氟西汀組大鼠的抑郁行為得到顯著改善,Open-Field實驗中溫補腎陽方組及鹽酸氟西汀組大鼠水平得分、垂直得分顯著提高,與抑郁模型組相比,具有顯著差異(P0.01)。溫補腎陽方組與鹽酸氟西汀組相比,兩者行為學(xué)指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。表明溫補腎陽方能顯著改善大鼠的抑郁行為,且其抗抑郁的功效與鹽酸氟西汀接近。第二部分24只大鼠的Open-Field實驗結(jié)果顯示造模結(jié)束后(第21天、第42天),模型組、溫補腎陽方組、鹽酸氯西汀組與空白組相比,水平活動得分和垂直活動得分均明顯降低,差別具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。第21天,各治療組與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)差異,第42天,溫補腎陽方組與模型組比較,水平活動得分和垂直活動得分均明顯上升,差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),鹽酸氟西汀組與模型組比較,水平活動得分明顯上升,差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),垂直活動得分差異無統(tǒng)計學(xué)意義,各治療組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義。給藥結(jié)束后(第42天)與造模結(jié)束后(第21天)比較,空白組、模型組無統(tǒng)計學(xué)差異,溫補腎陽方組、鹽酸氟西汀組水平活動得分及垂直活動得分均有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。說明溫補腎陽方能有效改善大鼠的抑郁行為,其療效與鹽酸氟西汀組無明顯差異。2.Elisa法檢測大鼠海馬AC、cAMP的結(jié)果:與空白組比較,模型大鼠海馬中AC含量明顯降低(P0.01);與模型組比較,鹽酸氟西汀組、溫補腎陽方組大鼠海馬中AC含量明顯增加(P0.05,P0.05)。與空白組比較,模型大鼠海馬中cAMP含量明顯降低(P0.01);與模型組比較,鹽酸氟西汀組、溫補腎陽方組大鼠海馬中cAMP含量明顯增加(P0.05,P0.05)。提示抑郁癥模型的大鼠海馬AC、cAMP含量顯著降低,溫陽中藥和鹽酸氟西汀治療均可增加大鼠海馬AC、cAMP含量,基本達(dá)到空白組水平。3.Western Blot法檢測大鼠海馬PKAc的結(jié)果:與空白組比較,模型大鼠海馬中PKAc含量明顯降低(P0.01);與模型組比較,鹽酸氟西汀組、溫補腎陽方組大鼠海馬中PKAc含量明顯增加(P0.01,P0.01),提示溫補腎陽方和鹽酸氟西汀均可提高抑郁模型大鼠海馬中PKAc。兩治療組間比較,差異有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。4.大鼠抑郁模型腦組織病理檢查結(jié)果:與空白組比較,模型組出現(xiàn)皮質(zhì)表層水腫,錐體細(xì)胞輕中度水腫,腦組織輕中度炎細(xì)胞浸潤。與模型組比較,溫補腎陽方組腦灰質(zhì)、白質(zhì)區(qū)組織結(jié)構(gòu)正常,灰質(zhì)區(qū)細(xì)胞層次清楚,錐體及顆粒細(xì)胞排列整齊,細(xì)胞大小、數(shù)目、形態(tài)、分布均正常,細(xì)胞核、漿結(jié)構(gòu)清晰,著色均勻,胞漿呈淡紅色,細(xì)胞突起可見,胞核呈藍(lán)色且較清亮,錐體細(xì)胞輕度水腫,腦組織可見輕度炎細(xì)胞浸潤。鹽酸氟西汀組腦灰質(zhì)、白質(zhì)區(qū)組織結(jié)構(gòu)正常,灰質(zhì)區(qū)細(xì)胞層次清楚,錐體及顆粒細(xì)胞排列整齊,細(xì)胞大小、數(shù)目、形態(tài)、分布均正常,細(xì)胞核、漿結(jié)構(gòu)清晰,著色均勻,胞漿呈淡紅色,細(xì)胞突起可見,胞核呈藍(lán)色且較清亮,有少量標(biāo)本可見錐體細(xì)胞輕度水腫,腦組織輕度炎細(xì)胞浸潤。結(jié)論溫補腎陽法的抗抑郁作用明確,能明顯提高CUMS抑郁模型大鼠Open-Field實驗評分,可顯著改善抑郁實驗動物的行為學(xué)異常,增加海馬內(nèi)AC、cAMP含量,提高海馬內(nèi)PKAc表達(dá),AC-cAMP-PKA信號通路得到了上調(diào),并且能改善皮質(zhì)表層水腫,錐體細(xì)胞水腫,腦組織炎細(xì)胞浸潤情況,起到抗抑郁作用,改善大鼠抑郁狀態(tài)。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5;R-332
【圖文】：

24以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)，OD值為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，各檢測物標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，2，3，4。圖1 大鼠AC標(biāo)準(zhǔn)曲線圖圖2 大鼠cAMP標(biāo)準(zhǔn)曲線圖根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。3.6.4 Western Blot 測定大鼠海馬 PKAC 蛋白表達(dá)

測物標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，2，3，4。圖1 大鼠AC標(biāo)準(zhǔn)曲線圖圖2 大鼠cAMP標(biāo)準(zhǔn)曲線圖根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。3.6.4 Western Blot 測定大鼠海馬 PKAC 蛋白表達(dá)

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 楊林;基于國醫(yī)大師郭子光“人—癥—病—證”體系對抑郁癥中醫(yī)生活質(zhì)量量表的研究與優(yōu)化[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2018年

2 趙恒宇;基于國醫(yī)大師郭子光“人-癥-病-證”體系對抑郁癥中醫(yī)證候要素辨病辨證量表的研究及優(yōu)化[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2018年

本文編號：2739029