【摘要】：骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)治療各種神經(jīng)退行性疾病在基礎(chǔ)研究中已經(jīng)得到證實。黃芪是我國傳統(tǒng)補氣中藥的一種,其可以誘導BMSCs分化為神經(jīng)細胞已經(jīng)得到證實。黃芪甲苷Ⅳ是黃芪的主要有效成分中的一種,其是否可以促進BMSCs向神經(jīng)細胞分化目前沒有實驗證明。SAMR1小鼠是正常衰老小鼠,作為阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠SAMP8小鼠的對照小鼠。SAMR1小鼠BMSCs培養(yǎng)以及誘導分化研究較少,其是否可以體外誘導分化為神經(jīng)細胞沒有相關(guān)的報道。本實驗將探討黃芪甲苷Ⅳ誘導SAMR1小鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞分化為神經(jīng)細胞的效果,以及作用機制。首先使用全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)SAMR1小鼠的BMSCs,培養(yǎng)至3代備用。接著采用流式細胞技術(shù)檢測培養(yǎng)細胞表面CD29,CD34,CD90的表達。我們以0,20,40,80,160mg/ml濃度黃芪甲苷Ⅳ對BMSCs進行誘導,分別在0h,1h,6h,12h,24h,48h,72h免疫熒光檢測其NSE和Nestin的表達。之后采用Western blot檢測誘導過程中Notch-1和β-catenin蛋白的表達。最后使用RT-qPCR檢測誘導后Nestin、NSE、Notch-1、β-catenin mRNA的表達。結(jié)果顯示,SAMR1小鼠BMSCs培養(yǎng)至第3代,細胞基本呈長梭形,細胞體積增大,基本純化。流式細胞技術(shù)檢測CD29(+),CD34(-),CD90(+),證實其為BMSCs。通過對不同濃度誘導效果統(tǒng)計分析得出,20,40,80mg/ml黃芪甲苷Ⅳ誘導組(T1,T2,T3)誘導后NSE和Nestin免疫熒光表達顯著高于對照組(C)(P0.01),160mg/ml(T4)濃度組細胞出現(xiàn)死亡現(xiàn)象,誘導后1h細胞開始表達NSE和Nestin,48h后誘導效果明顯下降,6h,12h,24h誘導效果好,沒有明顯差異(P0.05),40mg/ml組誘導12h神經(jīng)細胞表達量最高。經(jīng)40mg/ml誘導12h后RT-qPCR結(jié)果顯示,誘導后Nestin、NSE mRNA顯著高于對照組(P0.05)。誘導組Notch-1 mRNA表達低于對照組(P0.05),誘導組β-catenin mRNA表達顯著高于對照組(P0.01)。經(jīng)40mg/ml誘導12h后Western blot檢測結(jié)果顯示,誘導組Notch-1蛋白表達低于對照組(P0.01),誘導組β-catenin蛋白表達顯著高于對照組(P0.01)。通過實驗我們證明黃芪甲苷Ⅳ可有誘導SAMR1小鼠BMSCs體外分化為神經(jīng)細胞,40mg/ml濃度誘導12h效果好。黃芪甲苷Ⅳ誘導分化過程中,通過提高β-catenin蛋白和mRNA的表達,抑制Notch1蛋白和mRNA的表達,促進了BMSCs分化為神經(jīng)細胞。
【學位授予單位】：河北北方學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫政華;邵晶;郭玫;;黃芪化學成分及藥理作用研究進展[J];中醫(yī)臨床研究;2015年25期

2 侯陽;李福智;左中夫;劉學政;;黃芪多糖誘導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)樣細胞分化[J];中國老年學雜志;2014年10期

3 陳旭東;王建國;;黃芪誘導人羊膜上皮細胞WISH細胞株向神經(jīng)細胞分化并抑制Notch1表達及促進細胞存活[J];生理學報;2012年06期

4 梁峰;馬潔華;楊麗娜;;川芎嗪聯(lián)合創(chuàng)傷性腦組織勻漿液誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)樣細胞分化[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年23期

5 王新生;趙熒;李海峰;張曉麗;薄愛華;;黃芪誘導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的分化特點(英文)[J];中國組織工程研究與臨床康復;2009年19期

6 楊新文;王勇;;黃芪誘導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分化為神經(jīng)樣細胞(英文)[J];中國組織工程研究與臨床康復;2008年25期

7 王新生;崔慧先;劉華;孫黎;;黃芪誘導骨髓間充質(zhì)干細胞分化進程中細胞內(nèi)鈣離子濃度的動態(tài)變化[J];中國組織工程研究與臨床康復;2007年42期

8 邢瑩;白瑞櫻;鄢文海;韓雪飛;段萍;許燕;樊志剛;;人骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞分化過程中Notch通路信號分子表達的變化[J];生理學報;2007年03期

9 董立華;王勇;陸長青;王凡;;黃芪誘導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分化為神經(jīng)樣細胞的研究[J];四川大學學報(醫(yī)學版);2007年03期

10 王勇;陸長青;王凡;;黃芪誘導大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分化為神經(jīng)樣細胞的研究[J];四川解剖學雜志;2006年01期

相關(guān)博士學位論文 前1條

1 任長樂;滋補脾陰方藥聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細胞移植對脊髓損傷影響的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學;2009年

本文編號：2738150