發(fā)布時(shí)間：2020-07-02 11:35

【摘要】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)治療各種神經(jīng)退行性疾病在基礎(chǔ)研究中已經(jīng)得到證實(shí)。黃芪是我國(guó)傳統(tǒng)補(bǔ)氣中藥的一種,其可以誘導(dǎo)BMSCs分化為神經(jīng)細(xì)胞已經(jīng)得到證實(shí)。黃芪甲苷Ⅳ是黃芪的主要有效成分中的一種,其是否可以促進(jìn)BMSCs向神經(jīng)細(xì)胞分化目前沒(méi)有實(shí)驗(yàn)證明。SAMR1小鼠是正常衰老小鼠,作為阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型小鼠SAMP8小鼠的對(duì)照小鼠。SAMR1小鼠BMSCs培養(yǎng)以及誘導(dǎo)分化研究較少,其是否可以體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞沒(méi)有相關(guān)的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)將探討黃芪甲苷Ⅳ誘導(dǎo)SAMR1小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞的效果,以及作用機(jī)制。首先使用全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)SAMR1小鼠的BMSCs,培養(yǎng)至3代備用。接著采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞表面CD29,CD34,CD90的表達(dá)。我們以0,20,40,80,160mg/ml濃度黃芪甲苷Ⅳ對(duì)BMSCs進(jìn)行誘導(dǎo),分別在0h,1h,6h,12h,24h,48h,72h免疫熒光檢測(cè)其N(xiāo)SE和Nestin的表達(dá)。之后采用Western blot檢測(cè)誘導(dǎo)過(guò)程中Notch-1和β-catenin蛋白的表達(dá)。最后使用RT-qPCR檢測(cè)誘導(dǎo)后Nestin、NSE、Notch-1、β-catenin mRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示,SAMR1小鼠BMSCs培養(yǎng)至第3代,細(xì)胞基本呈長(zhǎng)梭形,細(xì)胞體積增大,基本純化。流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CD29(+),CD34(-),CD90(+),證實(shí)其為BMSCs。通過(guò)對(duì)不同濃度誘導(dǎo)效果統(tǒng)計(jì)分析得出,20,40,80mg/ml黃芪甲苷Ⅳ誘導(dǎo)組(T1,T2,T3)誘導(dǎo)后NSE和Nestin免疫熒光表達(dá)顯著高于對(duì)照組(C)(P0.01),160mg/ml(T4)濃度組細(xì)胞出現(xiàn)死亡現(xiàn)象,誘導(dǎo)后1h細(xì)胞開(kāi)始表達(dá)NSE和Nestin,48h后誘導(dǎo)效果明顯下降,6h,12h,24h誘導(dǎo)效果好,沒(méi)有明顯差異(P0.05),40mg/ml組誘導(dǎo)12h神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)量最高。經(jīng)40mg/ml誘導(dǎo)12h后RT-qPCR結(jié)果顯示,誘導(dǎo)后Nestin、NSE mRNA顯著高于對(duì)照組(P0.05)。誘導(dǎo)組Notch-1 mRNA表達(dá)低于對(duì)照組(P0.05),誘導(dǎo)組β-catenin mRNA表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P0.01)。經(jīng)40mg/ml誘導(dǎo)12h后Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,誘導(dǎo)組Notch-1蛋白表達(dá)低于對(duì)照組(P0.01),誘導(dǎo)組β-catenin蛋白表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P0.01)。通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們證明黃芪甲苷Ⅳ可有誘導(dǎo)SAMR1小鼠BMSCs體外分化為神經(jīng)細(xì)胞,40mg/ml濃度誘導(dǎo)12h效果好。黃芪甲苷Ⅳ誘導(dǎo)分化過(guò)程中,通過(guò)提高β-catenin蛋白和mRNA的表達(dá),抑制Notch1蛋白和mRNA的表達(dá),促進(jìn)了BMSCs分化為神經(jīng)細(xì)胞。
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2738150