發(fā)布時間：2020-07-02 13:48

【摘要】：研究背景和目的:無菌性假體松動和假體周圍感染導致的炎性骨溶解是全關節(jié)置換術的主要并發(fā)癥,目前治療該并發(fā)癥的主要方法仍是全關節(jié)置換手術的翻修。關節(jié)置換中假體周圍的細菌內毒素或植入物來源的磨損顆粒引起的炎癥反應是破骨細胞形成和活性升高的主要原因,炎癥引起的破骨細胞的活化和骨吸收功能的亢進導致引起了關節(jié)假體周邊的局部骨溶解最終導致假體的松動而引起手術的失敗。因此,能夠減輕炎癥反應和抑制破骨細胞分化和抑制過度骨吸收的藥物或化合物為預防關節(jié)置換的無菌性假體松動提供一個非常有希望的治療途徑。瑞香素是一種天然香豆素衍生物,具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤的作用,臨床上被用于治療類風濕性關節(jié)炎。在本研究中,我們首次報道了瑞香素在小鼠顱骨骨溶解模型中對脂多糖誘導的炎癥性骨破壞具有保護作用。瑞香素的這種保護作用部分可以歸因于其對RANKL誘導的體外破骨細胞分化、融合和骨吸收的直接抑制作用。通過分子機制研究分析發(fā)現(xiàn),瑞香素抑制破骨細胞中的ERK和NFATc1信號級聯(lián)的激活�？傊�,我們的研究結果表明,瑞香素作為一種天然化合物具有治療炎癥性骨溶解的潛力。研究方法:(一)體外細胞實驗(1)首先我們探索瑞香素是否對破骨細胞的分化有抑制作用,我們將小鼠骨髓腔中沖洗出的骨髓巨噬細胞培養(yǎng)4-5天后種到96孔板中,在RANKL和MCSF刺激下,用不同濃度的瑞香素干預經Trap染色觀察并計數(shù)破骨細胞的數(shù)量,測定瑞香素對破骨細胞形成的影響。接下來利用CCK8實驗檢測瑞香素對小鼠骨髓巨噬細胞(BMMs)增殖的影響。最后利用不同濃度的瑞香素刺激RANKL誘導的破骨細胞分化,利用Real-time PCR檢測瑞香素作用后破骨細胞相關基因表達的差異。(2)通過羥基磷灰石骨吸收實驗所致的陷窩面積和破骨細胞肌動蛋白環(huán)的測量,探索瑞香素對破骨細胞的功能影響。(3)為了探索瑞香素影響破骨細胞分化和骨吸收的相關分子機制,我們通過Western blot實驗檢測瑞香素對MAPK和NF-κB信號通路的影響,接下來利用luciferase實驗檢測瑞香素對NFATc1的影響。最后通過Western blot實驗觀察瑞香素對核內蛋白NFATc1和C-Fos的影響。(二)體內動物實驗將瑞香素應用于LPS誘導的小鼠顱蓋骨骨溶解中,探索瑞香素對炎癥因子引起的局部骨溶解的治療作用,并在動物體內實驗中驗證瑞香素對破骨細胞分化和功能的抑制作用。實驗結果:(一)體外實驗(1)瑞香素對破骨細胞的分化和形成具有抑制作用,并影響了破骨細胞特異性基因的表達,且在此濃度范圍中對BMMs無毒性作用。(2)瑞香素抑制了破骨細胞骨吸收功能的亢進。(3)瑞香素通過抑制ERK的磷酸化和核內蛋白NFATc1來影響破骨細胞的分化和骨吸收。(二)體內實驗瑞香素對LPS誘導的小鼠局部骨溶解有治療作用。結果:瑞香素通過抑制ERK和NFATc1通路治療LPS誘導的骨溶解和RANKL介導的破骨細胞形成。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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