發(fā)布時間：2020-07-02 13:48

【摘要】：研究背景和目的:無菌性假體松動和假體周圍感染導(dǎo)致的炎性骨溶解是全關(guān)節(jié)置換術(shù)的主要并發(fā)癥,目前治療該并發(fā)癥的主要方法仍是全關(guān)節(jié)置換手術(shù)的翻修。關(guān)節(jié)置換中假體周圍的細(xì)菌內(nèi)毒素或植入物來源的磨損顆粒引起的炎癥反應(yīng)是破骨細(xì)胞形成和活性升高的主要原因,炎癥引起的破骨細(xì)胞的活化和骨吸收功能的亢進(jìn)導(dǎo)致引起了關(guān)節(jié)假體周邊的局部骨溶解最終導(dǎo)致假體的松動而引起手術(shù)的失敗。因此,能夠減輕炎癥反應(yīng)和抑制破骨細(xì)胞分化和抑制過度骨吸收的藥物或化合物為預(yù)防關(guān)節(jié)置換的無菌性假體松動提供一個非常有希望的治療途徑。瑞香素是一種天然香豆素衍生物,具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤的作用,臨床上被用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。在本研究中,我們首次報道了瑞香素在小鼠顱骨骨溶解模型中對脂多糖誘導(dǎo)的炎癥性骨破壞具有保護(hù)作用。瑞香素的這種保護(hù)作用部分可以歸因于其對RANKL誘導(dǎo)的體外破骨細(xì)胞分化、融合和骨吸收的直接抑制作用。通過分子機制研究分析發(fā)現(xiàn),瑞香素抑制破骨細(xì)胞中的ERK和NFATc1信號級聯(lián)的激活。總之,我們的研究結(jié)果表明,瑞香素作為一種天然化合物具有治療炎癥性骨溶解的潛力。研究方法:(一)體外細(xì)胞實驗(1)首先我們探索瑞香素是否對破骨細(xì)胞的分化有抑制作用,我們將小鼠骨髓腔中沖洗出的骨髓巨噬細(xì)胞培養(yǎng)4-5天后種到96孔板中,在RANKL和MCSF刺激下,用不同濃度的瑞香素干預(yù)經(jīng)Trap染色觀察并計數(shù)破骨細(xì)胞的數(shù)量,測定瑞香素對破骨細(xì)胞形成的影響。接下來利用CCK8實驗檢測瑞香素對小鼠骨髓巨噬細(xì)胞(BMMs)增殖的影響。最后利用不同濃度的瑞香素刺激RANKL誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化,利用Real-time PCR檢測瑞香素作用后破骨細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的差異。(2)通過羥基磷灰石骨吸收實驗所致的陷窩面積和破骨細(xì)胞肌動蛋白環(huán)的測量,探索瑞香素對破骨細(xì)胞的功能影響。(3)為了探索瑞香素影響破骨細(xì)胞分化和骨吸收的相關(guān)分子機制,我們通過Western blot實驗檢測瑞香素對MAPK和NF-κB信號通路的影響,接下來利用luciferase實驗檢測瑞香素對NFATc1的影響。最后通過Western blot實驗觀察瑞香素對核內(nèi)蛋白NFATc1和C-Fos的影響。(二)體內(nèi)動物實驗將瑞香素應(yīng)用于LPS誘導(dǎo)的小鼠顱蓋骨骨溶解中,探索瑞香素對炎癥因子引起的局部骨溶解的治療作用,并在動物體內(nèi)實驗中驗證瑞香素對破骨細(xì)胞分化和功能的抑制作用。實驗結(jié)果:(一)體外實驗(1)瑞香素對破骨細(xì)胞的分化和形成具有抑制作用,并影響了破骨細(xì)胞特異性基因的表達(dá),且在此濃度范圍中對BMMs無毒性作用。(2)瑞香素抑制了破骨細(xì)胞骨吸收功能的亢進(jìn)。(3)瑞香素通過抑制ERK的磷酸化和核內(nèi)蛋白NFATc1來影響破骨細(xì)胞的分化和骨吸收。(二)體內(nèi)實驗瑞香素對LPS誘導(dǎo)的小鼠局部骨溶解有治療作用。結(jié)果:瑞香素通過抑制ERK和NFATc1通路治療LPS誘導(dǎo)的骨溶解和RANKL介導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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