發(fā)布時間：2020-07-02 08:41

【摘要】：目的:觀察化濁解毒活血通絡法對腦缺血再灌注損傷大鼠模型血腦屏障及其緊密連接ZO-1和occludin表達量的影響,從血腦屏障緊密連接蛋白的角度探索本方法對腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護作用。方法:以改進后的Zea-Longa等人的線栓法通過阻斷大鼠一側(cè)(本實驗選用右側(cè))大腦中動脈制造局部梗死性腦缺血再灌注損傷模型。實驗選用成年SD大鼠共54只,均為雄性,隨機分成假手術(shù)組(即正常組)、模型組、尼莫地平組(即對照組)、化濁解毒活血通絡方高劑量組(下文簡稱“中藥高劑量組”)、化濁解毒活血通絡方中劑量組(下文簡稱“中藥中劑量組”)、化濁解毒活血通絡方低劑量組(下文簡稱“中藥低劑量組”)6組,每組9只(n=9)。各組實驗動物均于術(shù)后24小時進行神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評分,給予相應藥物治療,假手術(shù)組與模型組兩組以0.9%氯化鈉替代藥物灌胃,尼莫地平組給以尼莫地平溶液灌胃,應用中藥治療的三組大鼠分別予相應濃度的化濁解毒活血通絡方中藥湯劑灌胃。持續(xù)灌服治療7天,記錄實驗動物治療過程中的一般情況,7天后按實驗計劃再次評定各組實驗動物神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損程度,完成后迅速斷頭處死,取各組大鼠梗死側(cè)大腦半球腦組織分別進行HE染色,電子光鏡下拍照,留取圖象觀察缺血區(qū)域腦組織細胞形態(tài)變化,免疫組化法檢測ZO-1和occludin的表達,RT-PCR法檢測該指標在各組大鼠缺血側(cè)腦組織中的表達量。結(jié)果:1各組神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評分比較顯示:手術(shù)后24h:假手術(shù)組大鼠無明顯的神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損癥狀,模型組及各用藥組均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損癥狀,各組之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。連續(xù)灌胃7d后:模型組與假手術(shù)組相比較,神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評分升高明顯(P0.05);與模型組相比較,尼莫地平組與中藥高劑量組神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評分均出現(xiàn)明顯下降(P0.05);兩組間神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評分無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05);中藥低劑量組及中藥中劑量組神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損程度有所減輕(P0.05),兩組之間神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損程度無明顯差異(P0.05)。2各組HE染色結(jié)果:光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)假手術(shù)組大鼠腦組織細胞分布整齊緊密,形態(tài)規(guī)則,細胞漿圓潤豐富,染色均勻,呈紫紅色,細胞核淡染呈藍色;模型組大鼠缺血側(cè)腦組織缺血中心區(qū)域可觀察到細胞結(jié)構(gòu)溶解破壞,大量壞死神經(jīng)元細胞存在,細胞腫脹,體積增大,細胞核破裂或溶解。其余各用藥組大鼠大腦缺血區(qū)域可觀察到上述病理改變,中藥低劑量組及中劑量組與模型組相比較缺血壞死區(qū)有所減小,尼莫地平組與中藥高劑量組與模型組相比較缺血壞死區(qū)明顯減小。3免疫組化法檢測ZO-1表達的變化:光鏡下陽性表達細胞胞漿染色呈棕黃色,細胞核呈圓形或類圓形,大多數(shù)陽性細胞于缺血區(qū)周圍集中分布。假手術(shù)組ZO-1持續(xù)表達,呈現(xiàn)連續(xù)分布狀態(tài);與假手術(shù)中相比,模型組ZO-1表達明顯減弱,僅呈散在少量點狀陽性染色(P0.05);與模型組相比,尼莫地平組與中藥高劑量組ZO-1表達量都有明顯增加(P0.05),連續(xù)表達與間斷表達并存,兩組之間差異不明顯(P0.05);中藥低劑量組、中藥中劑量ZO-1表達量均有所增加(P0.05),可見間斷表達,兩組之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4免疫組化法檢測occludin表達:光鏡下陽性表達細胞胞漿染色呈棕黃色,細胞核呈圓形或類圓形,大多數(shù)陽性細胞于缺血區(qū)周圍集中分布。假手術(shù)組occludin持續(xù)表達,呈現(xiàn)連續(xù)分布狀態(tài);與假手術(shù)中相比,模型組occludin表達明顯減弱,僅呈少量點狀散在陽性染色,(P0.05);與模型組相比,尼莫地平組與中藥高劑量組occludin表達量均增加明顯(P0.05),連續(xù)表達與間斷表達并存,兩組之間無明顯差異(P0.05);中藥低劑量組、中藥中劑量occludin表達量均有所增加(P0.05),可見間斷表達,中藥中劑量組較中藥低劑量組增加明顯(P0.05)。5 RT-PCR法檢測ZO-1表達:模型組與假手術(shù)組比較,ZO-1表達量明顯降低(P0.05);與模型組相比,尼莫地平組與中藥高劑量組ZO-1表達量均明顯升高(P0.05);兩組之間無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05);中藥低劑量組、中藥中劑量ZO-1表達量均有增加(P0.05),兩組之間無明顯差異(P0.05)。6 RT-PCR法檢測occludin表達:模型組與假手術(shù)組比較,occludin表達量明顯降低(P0.05);與模型組相比,尼莫地平組與中藥高劑量組occludin表達量均顯著升高(P0.05);兩組之間無明顯統(tǒng)計學差異(P0.05);中藥低劑量組、中藥中劑量組occludin表達量均有增加(P0.05),兩組之間無明顯差異(P0.05)。結(jié)論:1化濁解毒活血通絡法可以減輕腦缺血再灌注損傷模型大鼠神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損程度,促進肢體功能的恢復,減輕大鼠腦組織缺血區(qū)域的細胞損傷。2化濁解毒活血通絡法對腦缺血再灌注損傷模型大鼠缺血腦組織具有一定的的神經(jīng)保護作用,其機制可能與保護血腦屏障和增加緊密連接蛋白ZO-1及occludin的表達有關。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1 假手術(shù)組（*400） 圖 2 模型組（*400）Fig. 1Sham operation group Fig. 2Model group圖 3 尼莫地平組（*400） 圖 4 中藥高劑量組（*400）

圖 1 假手術(shù)組（*400） 圖 2 模型組（*400）Fig. 1Sham operation group Fig. 2Model group圖 3 尼莫地平組（*400） 圖 4 中藥高劑量組（*400）

【參考文獻】

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本文編號：2737982