發(fā)布時(shí)間：2020-07-02 08:41

【摘要】：目的:觀察化濁解毒活血通絡(luò)法對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠模型血腦屏障及其緊密連接ZO-1和occludin表達(dá)量的影響,從血腦屏障緊密連接蛋白的角度探索本方法對(duì)腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用。方法:以改進(jìn)后的Zea-Longa等人的線栓法通過(guò)阻斷大鼠一側(cè)(本實(shí)驗(yàn)選用右側(cè))大腦中動(dòng)脈制造局部梗死性腦缺血再灌注損傷模型。實(shí)驗(yàn)選用成年SD大鼠共54只,均為雄性,隨機(jī)分成假手術(shù)組(即正常組)、模型組、尼莫地平組(即對(duì)照組)、化濁解毒活血通絡(luò)方高劑量組(下文簡(jiǎn)稱“中藥高劑量組”)、化濁解毒活血通絡(luò)方中劑量組(下文簡(jiǎn)稱“中藥中劑量組”)、化濁解毒活血通絡(luò)方低劑量組(下文簡(jiǎn)稱“中藥低劑量組”)6組,每組9只(n=9)。各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均于術(shù)后24小時(shí)進(jìn)行神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評(píng)分,給予相應(yīng)藥物治療,假手術(shù)組與模型組兩組以0.9%氯化鈉替代藥物灌胃,尼莫地平組給以尼莫地平溶液灌胃,應(yīng)用中藥治療的三組大鼠分別予相應(yīng)濃度的化濁解毒活血通絡(luò)方中藥湯劑灌胃。持續(xù)灌服治療7天,記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物治療過(guò)程中的一般情況,7天后按實(shí)驗(yàn)計(jì)劃再次評(píng)定各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損程度,完成后迅速斷頭處死,取各組大鼠梗死側(cè)大腦半球腦組織分別進(jìn)行HE染色,電子光鏡下拍照,留取圖象觀察缺血區(qū)域腦組織細(xì)胞形態(tài)變化,免疫組化法檢測(cè)ZO-1和occludin的表達(dá),RT-PCR法檢測(cè)該指標(biāo)在各組大鼠缺血側(cè)腦組織中的表達(dá)量。結(jié)果:1各組神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評(píng)分比較顯示:手術(shù)后24h:假手術(shù)組大鼠無(wú)明顯的神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損癥狀,模型組及各用藥組均出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損癥狀,各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。連續(xù)灌胃7d后:模型組與假手術(shù)組相比較,神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評(píng)分升高明顯(P0.05);與模型組相比較,尼莫地平組與中藥高劑量組神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評(píng)分均出現(xiàn)明顯下降(P0.05);兩組間神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損評(píng)分無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);中藥低劑量組及中藥中劑量組神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損程度有所減輕(P0.05),兩組之間神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損程度無(wú)明顯差異(P0.05)。2各組HE染色結(jié)果:光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)假手術(shù)組大鼠腦組織細(xì)胞分布整齊緊密,形態(tài)規(guī)則,細(xì)胞漿圓潤(rùn)豐富,染色均勻,呈紫紅色,細(xì)胞核淡染呈藍(lán)色;模型組大鼠缺血側(cè)腦組織缺血中心區(qū)域可觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)溶解破壞,大量壞死神經(jīng)元細(xì)胞存在,細(xì)胞腫脹,體積增大,細(xì)胞核破裂或溶解。其余各用藥組大鼠大腦缺血區(qū)域可觀察到上述病理改變,中藥低劑量組及中劑量組與模型組相比較缺血壞死區(qū)有所減小,尼莫地平組與中藥高劑量組與模型組相比較缺血壞死區(qū)明顯減小。3免疫組化法檢測(cè)ZO-1表達(dá)的變化:光鏡下陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞胞漿染色呈棕黃色,細(xì)胞核呈圓形或類圓形,大多數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞于缺血區(qū)周圍集中分布。假手術(shù)組ZO-1持續(xù)表達(dá),呈現(xiàn)連續(xù)分布狀態(tài);與假手術(shù)中相比,模型組ZO-1表達(dá)明顯減弱,僅呈散在少量點(diǎn)狀陽(yáng)性染色(P0.05);與模型組相比,尼莫地平組與中藥高劑量組ZO-1表達(dá)量都有明顯增加(P0.05),連續(xù)表達(dá)與間斷表達(dá)并存,兩組之間差異不明顯(P0.05);中藥低劑量組、中藥中劑量ZO-1表達(dá)量均有所增加(P0.05),可見間斷表達(dá),兩組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4免疫組化法檢測(cè)occludin表達(dá):光鏡下陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞胞漿染色呈棕黃色,細(xì)胞核呈圓形或類圓形,大多數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞于缺血區(qū)周圍集中分布。假手術(shù)組occludin持續(xù)表達(dá),呈現(xiàn)連續(xù)分布狀態(tài);與假手術(shù)中相比,模型組occludin表達(dá)明顯減弱,僅呈少量點(diǎn)狀散在陽(yáng)性染色,(P0.05);與模型組相比,尼莫地平組與中藥高劑量組occludin表達(dá)量均增加明顯(P0.05),連續(xù)表達(dá)與間斷表達(dá)并存,兩組之間無(wú)明顯差異(P0.05);中藥低劑量組、中藥中劑量occludin表達(dá)量均有所增加(P0.05),可見間斷表達(dá),中藥中劑量組較中藥低劑量組增加明顯(P0.05)。5 RT-PCR法檢測(cè)ZO-1表達(dá):模型組與假手術(shù)組比較,ZO-1表達(dá)量明顯降低(P0.05);與模型組相比,尼莫地平組與中藥高劑量組ZO-1表達(dá)量均明顯升高(P0.05);兩組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);中藥低劑量組、中藥中劑量ZO-1表達(dá)量均有增加(P0.05),兩組之間無(wú)明顯差異(P0.05)。6 RT-PCR法檢測(cè)occludin表達(dá):模型組與假手術(shù)組比較,occludin表達(dá)量明顯降低(P0.05);與模型組相比,尼莫地平組與中藥高劑量組occludin表達(dá)量均顯著升高(P0.05);兩組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);中藥低劑量組、中藥中劑量組occludin表達(dá)量均有增加(P0.05),兩組之間無(wú)明顯差異(P0.05)。結(jié)論:1化濁解毒活血通絡(luò)法可以減輕腦缺血再灌注損傷模型大鼠神經(jīng)系統(tǒng)功能缺損程度,促進(jìn)肢體功能的恢復(fù),減輕大鼠腦組織缺血區(qū)域的細(xì)胞損傷。2化濁解毒活血通絡(luò)法對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠缺血腦組織具有一定的的神經(jīng)保護(hù)作用,其機(jī)制可能與保護(hù)血腦屏障和增加緊密連接蛋白ZO-1及occludin的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖 1 假手術(shù)組（*400） 圖 2 模型組（*400）Fig. 1Sham operation group Fig. 2Model group圖 3 尼莫地平組（*400） 圖 4 中藥高劑量組（*400）

圖 1 假手術(shù)組（*400） 圖 2 模型組（*400）Fig. 1Sham operation group Fig. 2Model group圖 3 尼莫地平組（*400） 圖 4 中藥高劑量組（*400）

【參考文獻(xiàn)】

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1 曲友直;楊震;李敏;高國(guó)棟;;黃芪甲苷對(duì)腦缺血再灌注后血腦屏障的保護(hù)作用及IL-1β含量、MMP-9蛋白表達(dá)的影響[J];卒中與神經(jīng)疾病;2016年06期

2 劉星芳;張秀梅;單熱愛;;腦缺血/再灌注損傷對(duì)血腦屏障的影響及干預(yù)措施的研究進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué);2016年21期

3 楊濤;王凈凈;陶琳;鐘喬青;吳彬才;;補(bǔ)腎祛痰活血湯對(duì)缺血再灌注損傷大鼠Occludin、ZO-1蛋白的調(diào)節(jié)作用[J];湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2016年08期

4 王一凡;楊霄鵬;曾志磊;白宏英;婁季宇;;姜黃素對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠MMP-2活性和血腦屏障通透性的影響[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2016年02期

5 何筑;況時(shí)祥;張樹森;鄒家莉;;腦通湯對(duì)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷內(nèi)皮屏障抗原及緊密連接相關(guān)蛋白Claudin-5、ZO-1表達(dá)的影響[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2015年21期

6 田軍彪;趙層閃;高晶晶;牟萍;萬(wàn)溪;蔡月花;劉學(xué)飛;徐麗娟;;化濁解毒活血通絡(luò)方對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年09期

7 鐘志越;李炳;劉明;李宏治;梁曉俊;申捷;;醒腦靜注射液對(duì)全腦缺血再灌注大鼠血腦屏障ZO-1表達(dá)的影響[J];中國(guó)病理生理雜志;2015年07期

8 辛浩琳;郭娜;徐忠信;;MMP-2、MMP-9對(duì)腦缺血再灌注大鼠緊密連接蛋白影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐;2015年07期

9 莊越;金文香;;血管生成素1對(duì)腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用及其機(jī)制[J];中國(guó)神經(jīng)精神疾病雜志;2014年05期

10 孟祥亞;王鵬琴;;針灸對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷NF-κB信號(hào)通路影響[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2014年05期

本文編號(hào)：2737982