發(fā)布時間：2020-07-02 07:46

【摘要】：目的:本文采用血液生化檢測、病理形態(tài)學(xué)檢測、免疫組化以及計算機圖像半定量分析等技術(shù),觀察傳統(tǒng)中藥地龍?zhí)崛∥铩�蚓激酶對腎間質(zhì)纖維化大鼠的腎臟保護作用,并探討其作用機制,為中醫(yī)藥防治腎臟纖維化提供科學(xué)依據(jù),以更好地發(fā)揮臨床指導(dǎo)作用。方法:第一部分將50只健康的清潔級SD大鼠隨機分為五組:假手術(shù)組、UUO模型組、蚓激酶低劑量組、蚓激酶中劑量組、蚓激酶高劑量組,每組10只,普通健康飲食適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)模型,造模后連續(xù)觀察14天,使其自然形成腎間質(zhì)纖維化模型。第二部分從造模后第2天開始對治療組采用灌胃法進行藥物干預(yù),給藥劑量按人與大鼠間每公斤體重占體表面積比值算得,蚓激酶低劑量組給予蚓激酶9萬U·kg~(-1),蚓激酶中劑量組給予18萬U·kg~(-1),蚓激酶高劑量組給予36萬U·kg~(-1),給藥體積為10 ml·kg~(-1);假手術(shù)組和UUO模型組每天給予等量生理鹽水,造模后第2天開始給藥,每天灌胃一次,連續(xù)14天。第三部分于術(shù)后第14天行腹腔麻醉,迅速采取腹主動脈血、摘取結(jié)扎側(cè)腎臟放入福爾馬林并制備為蠟塊。檢測血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),采用HE染色及Masson染色觀察腎臟組織病理形態(tài)學(xué)損傷變化,用免疫組織化學(xué)法檢測腎臟組織切片中TGF-β1、α-SMA、PAI-1、Col-Ⅰ以及Nox4蛋白的表達情況,并進行半定量分析。第四部分各組大鼠的實驗數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析處理,計量資料首先采用單因素方差分析,各組間差異存在統(tǒng)計學(xué)意義且樣本符合正態(tài)分布,再進行獨立樣本t檢驗,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±s)表示,以p0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。根據(jù)分析結(jié)果探討蚓激酶對于腎間質(zhì)纖維化的保護作用及可能機制。結(jié)果:1.生化指標(biāo)檢測結(jié)果:與假手術(shù)組相比較,UUO模型組大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)略有不同程度升高,但無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05);與UUO模型組相比較,蚓激酶給藥各組Scr和BUN指標(biāo)無明顯差異(p0.05)。2.組織病理學(xué):假手術(shù)組腎臟無肉眼可見變化。UUO模型組、蚓激酶各組梗阻側(cè)腎臟體積有著不同程度增大,可見腎積水,腎實質(zhì)變薄或有囊性感,腎臟包膜顯著增厚,結(jié)扎處以上輸尿管粗大,內(nèi)有黃褐色的混濁尿液,提示單側(cè)輸尿管梗阻模型建立成功。HE染色可見假手術(shù)組腎臟組織結(jié)構(gòu)正常,未見腎小管及集合管擴張及萎縮、間質(zhì)纖維組織增生及炎細胞浸潤;UUO模型組腎盂擴張,腎實質(zhì)變薄,殘存少部分正常腎臟組織,部分腎小球萎縮,大部分腎小管和集合管萎縮甚至消失,間質(zhì)纖維組織顯著增生出現(xiàn)纖維化,較多淋巴、漿細胞、中性粒細胞浸潤,可見膿腫形成,局部腎盂尿路上皮增生;與模型組相比,蚓激酶給藥各組腎小管萎縮程度及炎癥細胞浸潤程度較模型組降低,腎小管和集合管輕度萎縮,間質(zhì)纖維組織纖維化程度呈劑量依賴性減輕。Masson染色顯示假手術(shù)組染色主要位于腎小球基膜,Bowman囊、系膜區(qū)和腎小管基底膜,腎小管周圍間質(zhì)則未見藍色膠原纖維沉積;UUO模型組Masson染色可見較多腎小球、腎小管、集合管存在,間距增寬,間質(zhì)有較多膠原纖維增生,藍色膠原纖維染色,膠原纖維較粗大;蚓激酶給藥各組膠原纖維與模型組相比藍色染色面積呈劑量依賴性減少。3.免疫組織化學(xué)結(jié)果:假手術(shù)組無明顯病理變化,UUO模型組視野中可見大量陽性反應(yīng)點,TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ、PAI-1及Nox4的陽性表達均明顯升高(p0.05)。與UUO模型組比較,蚓激酶各劑量組的陽性表達均呈劑量依賴性降低(p0.05)。結(jié)論:實驗結(jié)果表明:蚓激酶對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠的腎間質(zhì)纖維化具有良好的保護作用,其機制可能是通過抑制促纖維化因子TGF-β1、α-SMA、PAI-1及Nox4的表達以及Col-Ⅰ膠原的合成來延緩腎臟纖維化的進程。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1 腎小管間質(zhì)損傷情況看出，UUO 模型組與假手術(shù)組相比 Masson 染色與 UUO 模型組相比，均有不同程度的降低，其。結(jié)果（如圖 3 所示），假手術(shù)組（圖 3-1）Massowman 囊、系膜區(qū)和腎小管基底膜，腎小管周圍UUO 模型組（圖 3-2）Masson 染色可見較少腎距增寬，間質(zhì)較多膠原纖維增生，藍色膠原纖酶給藥各組（圖 3-3/4/5）膠原纖維與模型組相少。的選擇化是慢性腎臟病發(fā)展至終末期腎臟病的共同途病發(fā)展至后期只能靠透析維持或者行腎移植術(shù)

圖 2-1 假手術(shù)組 HE×100 圖 2-2 UUO 模型組 HE×100圖 2-3 蚓激酶低劑量組 HE×100 圖 2-4 蚓激酶中劑量組 HE×100

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王祥;高娜;黃燕萍;;TGF-β1、TNF-α及α-SMA與腎間質(zhì)纖維化[J];中國婦幼健康研究;2015年06期

2 鄭敏敏;蔡旭東;鐘光輝;;地龍組分對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠的保護作用[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2015年09期

3 王丹彤;王丹輝;;中藥地龍的化學(xué)成分及藥理作用研究[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2015年68期

4 唐鼎;Q們

本文編號：2737928