發(fā)布時(shí)間：2020-07-02 07:46

【摘要】：目的:本文采用血液生化檢測、病理形態(tài)學(xué)檢測、免疫組化以及計(jì)算機(jī)圖像半定量分析等技術(shù),觀察傳統(tǒng)中藥地龍?zhí)崛∥铩�蚓激酶對腎間質(zhì)纖維化大鼠的腎臟保護(hù)作用,并探討其作用機(jī)制,為中醫(yī)藥防治腎臟纖維化提供科學(xué)依據(jù),以更好地發(fā)揮臨床指導(dǎo)作用。方法:第一部分將50只健康的清潔級SD大鼠隨機(jī)分為五組:假手術(shù)組、UUO模型組、蚓激酶低劑量組、蚓激酶中劑量組、蚓激酶高劑量組,每組10只,普通健康飲食適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)模型,造模后連續(xù)觀察14天,使其自然形成腎間質(zhì)纖維化模型。第二部分從造模后第2天開始對治療組采用灌胃法進(jìn)行藥物干預(yù),給藥劑量按人與大鼠間每公斤體重占體表面積比值算得,蚓激酶低劑量組給予蚓激酶9萬U·kg~(-1),蚓激酶中劑量組給予18萬U·kg~(-1),蚓激酶高劑量組給予36萬U·kg~(-1),給藥體積為10 ml·kg~(-1);假手術(shù)組和UUO模型組每天給予等量生理鹽水,造模后第2天開始給藥,每天灌胃一次,連續(xù)14天。第三部分于術(shù)后第14天行腹腔麻醉,迅速采取腹主動脈血、摘取結(jié)扎側(cè)腎臟放入福爾馬林并制備為蠟塊。檢測血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),采用HE染色及Masson染色觀察腎臟組織病理形態(tài)學(xué)損傷變化,用免疫組織化學(xué)法檢測腎臟組織切片中TGF-β1、α-SMA、PAI-1、Col-Ⅰ以及Nox4蛋白的表達(dá)情況,并進(jìn)行半定量分析。第四部分各組大鼠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理,計(jì)量資料首先采用單因素方差分析,各組間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義且樣本符合正態(tài)分布,再進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(?x±s)表示,以p0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。根據(jù)分析結(jié)果探討蚓激酶對于腎間質(zhì)纖維化的保護(hù)作用及可能機(jī)制。結(jié)果:1.生化指標(biāo)檢測結(jié)果:與假手術(shù)組相比較,UUO模型組大鼠尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)略有不同程度升高,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05);與UUO模型組相比較,蚓激酶給藥各組Scr和BUN指標(biāo)無明顯差異(p0.05)。2.組織病理學(xué):假手術(shù)組腎臟無肉眼可見變化。UUO模型組、蚓激酶各組梗阻側(cè)腎臟體積有著不同程度增大,可見腎積水,腎實(shí)質(zhì)變薄或有囊性感,腎臟包膜顯著增厚,結(jié)扎處以上輸尿管粗大,內(nèi)有黃褐色的混濁尿液,提示單側(cè)輸尿管梗阻模型建立成功。HE染色可見假手術(shù)組腎臟組織結(jié)構(gòu)正常,未見腎小管及集合管擴(kuò)張及萎縮、間質(zhì)纖維組織增生及炎細(xì)胞浸潤;UUO模型組腎盂擴(kuò)張,腎實(shí)質(zhì)變薄,殘存少部分正常腎臟組織,部分腎小球萎縮,大部分腎小管和集合管萎縮甚至消失,間質(zhì)纖維組織顯著增生出現(xiàn)纖維化,較多淋巴、漿細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤,可見膿腫形成,局部腎盂尿路上皮增生;與模型組相比,蚓激酶給藥各組腎小管萎縮程度及炎癥細(xì)胞浸潤程度較模型組降低,腎小管和集合管輕度萎縮,間質(zhì)纖維組織纖維化程度呈劑量依賴性減輕。Masson染色顯示假手術(shù)組染色主要位于腎小球基膜,Bowman囊、系膜區(qū)和腎小管基底膜,腎小管周圍間質(zhì)則未見藍(lán)色膠原纖維沉積;UUO模型組Masson染色可見較多腎小球、腎小管、集合管存在,間距增寬,間質(zhì)有較多膠原纖維增生,藍(lán)色膠原纖維染色,膠原纖維較粗大;蚓激酶給藥各組膠原纖維與模型組相比藍(lán)色染色面積呈劑量依賴性減少。3.免疫組織化學(xué)結(jié)果:假手術(shù)組無明顯病理變化,UUO模型組視野中可見大量陽性反應(yīng)點(diǎn),TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ、PAI-1及Nox4的陽性表達(dá)均明顯升高(p0.05)。與UUO模型組比較,蚓激酶各劑量組的陽性表達(dá)均呈劑量依賴性降低(p0.05)。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:蚓激酶對單側(cè)輸尿管梗阻大鼠的腎間質(zhì)纖維化具有良好的保護(hù)作用,其機(jī)制可能是通過抑制促纖維化因子TGF-β1、α-SMA、PAI-1及Nox4的表達(dá)以及Col-Ⅰ膠原的合成來延緩腎臟纖維化的進(jìn)程。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1 腎小管間質(zhì)損傷情況看出，UUO 模型組與假手術(shù)組相比 Masson 染色與 UUO 模型組相比，均有不同程度的降低，其。結(jié)果（如圖 3 所示），假手術(shù)組（圖 3-1）Massowman 囊、系膜區(qū)和腎小管基底膜，腎小管周圍UUO 模型組（圖 3-2）Masson 染色可見較少腎距增寬，間質(zhì)較多膠原纖維增生，藍(lán)色膠原纖酶給藥各組（圖 3-3/4/5）膠原纖維與模型組相少。的選擇化是慢性腎臟病發(fā)展至終末期腎臟病的共同途病發(fā)展至后期只能靠透析維持或者行腎移植術(shù)

圖 2-1 假手術(shù)組 HE×100 圖 2-2 UUO 模型組 HE×100圖 2-3 蚓激酶低劑量組 HE×100 圖 2-4 蚓激酶中劑量組 HE×100

【參考文獻(xiàn)】

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