發(fā)布時(shí)間：2020-06-30 16:12

【摘要】：目的:探討花旗松素(Tax)抑制小鼠子宮炎癥的效應(yīng)及對(duì)炎癥部位巨噬細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)機(jī)制。方法:性成熟小鼠25只隨機(jī)分為對(duì)照組和處理組。處理組又分為L(zhǎng)PS處理組、LPS+低濃度Tax(25 mg/kg)處理組、LPS+中濃度Tax(50 mg/kg)處理組及LPS+高濃度Tax(100 mg/kg)處理組。對(duì)照組、LPS處理組采取每天上午9點(diǎn)灌胃PBS 0.4 ml,1次/天;其中,對(duì)照組于第5天尾部靜脈注射PBS 0.2 ml;LPS處理組于第5天尾靜脈注射LPS 0.2ml;LPS+Tax 25 mg/kg處理組每天上午9點(diǎn)灌胃25 mg/kg Tax,LPS+Tax 50 mg/kg處理組每天灌胃50 mg/kg Tax,LPS+Tax 100 mg/kg處理組每天灌胃100 mg/kg Tax,LPS+低、中、高Tax處理組均于第5天尾靜脈注射LPS 0.2 ml,所有LPS處理小鼠注射至第6天。所有小鼠第8天頸椎脫臼法處死,摘取子宮,觀察其外形變化并用于后續(xù)檢測(cè)。免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)對(duì)照組和處理組小鼠子宮中CD86~+(M1)和CD163~+(M2)型巨噬細(xì)胞的數(shù)量和分布差異,ELISA法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組炎性細(xì)胞因子TNF-α和抑制炎癥性細(xì)胞因子IL-10的含量差異,驗(yàn)證Tax的抑制炎癥效應(yīng)。qPCR技術(shù)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組小鼠子宮組織中M2型巨噬細(xì)胞趨化因子CXCL12及其受體CXCR4 mRNA表達(dá)差異,western blot檢測(cè)CXCL12及其受體CXCR4蛋白水平的表達(dá)差異,判定Tax的抗炎機(jī)制。結(jié)果:LPS處理小鼠至小鼠子宮致炎后,免疫組化檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組實(shí)驗(yàn)小鼠相比,LPS處理組的小鼠白子宮中M1型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志分子CD86在LPS處理的第4天表達(dá)量增加,差異達(dá)到了極顯著水平。而當(dāng)用不同濃度Tax處理炎性子宮小鼠時(shí),隨著Tax的處理濃度的增加,CD86的表達(dá)量呈下降趨勢(shì),LPS+Tax 100 mg/kg處理組炎癥性子宮中CD86的表達(dá)量參照于對(duì)照組無(wú)明顯差異。同樣方法檢驗(yàn)M2型巨噬細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白CD163,發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,LPS處理后,一定時(shí)間內(nèi)小鼠子宮中CD163的表達(dá)量下降,且差異達(dá)到了極顯著水平。隨著Tax處理濃度的增加,CD163的表達(dá)量呈升高趨勢(shì),中濃度Tax處理組參照于對(duì)照組差異呈現(xiàn)顯著升高變化,LPS+Tax 100 mg/kg處理組與對(duì)照組差異則不明顯。ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LPS處理小鼠致小鼠子宮產(chǎn)生炎癥后,小鼠子宮中TNF-α的表達(dá)量急劇升高,與對(duì)照組差異比較明顯,為極顯著水平。當(dāng)用不同濃度的Tax的處理后,小鼠子宮中TNF-α的表達(dá)量隨Tax處理濃度的增加,表達(dá)量下降。同時(shí)檢測(cè)抑炎性細(xì)胞因子IL-10表達(dá)變化,結(jié)果顯示為隨著Tax處理濃度的增加,IL-10的表達(dá)呈現(xiàn)相對(duì)應(yīng)的升高趨勢(shì)。qPCR和western blot分別用于檢測(cè)M2型巨噬細(xì)胞趨化因子CXCL12及其受體CXCR4 mRNA和蛋白的表達(dá)差異,結(jié)果顯示LPS于尾靜脈注射小鼠后,二者在基因和蛋白水平上表達(dá)均下降,高濃度Tax處理組小鼠子宮中CXCL12基因和蛋白的表達(dá)量與對(duì)照組相比差異不顯著,CXCR4蛋白的表達(dá)量雖已升高,但與對(duì)照組相比差異仍比較明顯,為顯著水平。隨著Tax的處理濃度的增加,二者表達(dá)水平都顯現(xiàn)出相應(yīng)上升的趨勢(shì)。結(jié)論:(1)由各實(shí)驗(yàn)組小鼠子宮外形變化及免疫組化、ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,一定濃度的Tax可有效抑制小鼠子宮的炎癥反應(yīng)。(2)Tax對(duì)抗小鼠子宮炎癥的機(jī)制之一可能是Tax通過(guò)調(diào)節(jié)M2型巨噬細(xì)胞趨化蛋白CXCL12及其受體CXCR4的表達(dá)影響炎性部位巨噬細(xì)胞極化方向,并進(jìn)一步影響不同種類(lèi)細(xì)胞因子的生成。(3)一定濃度的Tax對(duì)Th1免疫反應(yīng)具有抑制作用,對(duì)Th2免疫反應(yīng)具有促進(jìn)作用。
【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖 1-1 Tax 結(jié)構(gòu)式Fig. 1-1 The structure formula of Tax號(hào)通路相關(guān)[108]。王秋月等的研究經(jīng)元具有較好的保護(hù)功能，其作用弱了細(xì)胞的凋亡的效應(yīng)[109]。佟苗苗minotransferase ） 和 天 冬 氨 酸 氨肝實(shí)質(zhì)損害指標(biāo)的檢測(cè)確定 Tax 有]。Tax 的初步研究證明其具有上述多x 早在 2009 年之前就用于關(guān)于心腦文獻(xiàn)表明，Tax 具有很好的抗炎、抗關(guān)于 Tax 抗衰老和細(xì)胞凋亡效應(yīng)，

.1 Tax 對(duì)炎性小鼠子宮中巨噬細(xì)胞的影響.1.1 Tax 對(duì)炎性小鼠子宮 CD86+（M1 型）巨噬細(xì)胞的影響表 3-1 不同濃度 Tax 對(duì)小鼠子宮組織 CD86+（M1 型）巨噬細(xì)胞數(shù)目的影響（n=5，x ±SD）Table.3-1 The influence of different concentrations of Tax on mouse uterine tissue CD86+(M1) macrophage number. (n=5, x ±SD)組別Group陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)Positive cell number差異顯著性Significance of differenceα=0.05 α=0.01對(duì)照組 214.40±15.24 d CLPS 298.20±11.80 a ALPS+Tax 25mg/kg 265.00±12.48 b BLPS+Tax 50mg/kg 247.80±6.46 c BLPS+Tax100mg/kg 217.20±13.39 d C注：小寫(xiě)字母表示 P<0.05，大寫(xiě)字母表示 P<0.01Note: lowercases mean P<0.05, capitals mean P<0.01

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10 蔣

本文編號(hào)：2735521