發(fā)布時間：2020-06-29 17:40

【摘要】：原發(fā)免疫性血小板減少癥(primary immune thrombocytopenia,ITP)是一種國內(nèi)外常見的自身免疫性疾病,部分患者面部、四肢、臟器等常有出血現(xiàn)象,出血程度嚴(yán)重時可威脅到生命。中醫(yī)將ITP分為血熱妄行證、瘀血內(nèi)阻證、陰虛火旺證、氣不攝血證4種證型,其中氣不攝血證是中醫(yī)臨床上ITP最常見的證型。目前,ITP的發(fā)病機制尚未明確,其治療方法也未能統(tǒng)一,若要解決這兩個問題,相應(yīng)的病證結(jié)合動物模型是深入研究的關(guān)鍵手段。因此,本課題在以往研究的基礎(chǔ)上對ITP氣不攝血證動物模型的制備方法進行了研究,并在此模型上對益氣攝血顆粒(Yiqishexue Granules,YQSX)的藥效學(xué)進行了初步探索。目的:模擬ITP氣不攝血證患者的疾病和證候表現(xiàn),建立ITP氣不攝血證動物模型,并對此模型進行動態(tài)研究,闡明其病理變化的過程,此外在該模型上對益氣攝血顆粒的藥效學(xué)進行初步探索,為ITP氣不攝血證的發(fā)病機制和治療方法提供新的思路和途徑。方法:1ITP氣不攝血證小鼠模型的建立與評價采用腹腔注射抗血小板血清(anti-platelet serum,APS)復(fù)合睡眠剝奪的方法建立ITP氣不攝血證小鼠模型。Balb/c小鼠隨機分為3周(正常組、模型組)、4周(正常組、模型組)、5周(正常組、模型組),每組12只。3周模型組小鼠在第1周睡眠剝奪,第2、3周腹腔注射APS復(fù)合睡眠剝奪;4周模型組小鼠在第1、2周睡眠剝奪,第3、4周腹腔注射APS復(fù)合睡眠剝奪;5周模型組小鼠在第1、2、3周睡眠剝奪,第4、5周腹腔注射APS復(fù)合睡眠剝奪。實驗結(jié)束后,通過檢測小鼠外周血血小板(platelet,PLT)計數(shù)、出血情況、脾臟指數(shù)、脾臟T與B淋巴細胞亞群等相關(guān)疾病指標(biāo)和體質(zhì)量、抓力、脈搏幅度、舌象等相關(guān)證候指標(biāo),確定建立ITP氣不攝血證小鼠模型的最佳周期及方法。2 ITP氣不攝血證小鼠模型的動態(tài)研究在確定ITP氣不攝血證小鼠模型的最佳造模周期(3周)與方法(第1周睡眠剝奪,第2、3周腹腔注射APS復(fù)合睡眠剝奪)的基礎(chǔ)上,結(jié)合該模型特點選取7d、10d、21d 3個時間點進行動態(tài)觀察。將Balb/c小鼠隨機分為正常組(39只)、模型組(45只),第7d、10d、21d后各取一批小鼠進行指標(biāo)檢測,分別檢測小鼠外周血PLT計數(shù)、出血分級、骨髓巨核細胞分類及計數(shù)、脾臟指數(shù)、脾臟病理、脾臟T與B淋巴細胞亞群、肺臟病理等相關(guān)疾病指標(biāo),體質(zhì)量、抓力、脈搏幅度等相關(guān)證候指標(biāo),以及PLT形態(tài)、活化與功能、凋亡等相關(guān)指標(biāo)。3益氣攝血顆粒對ITP氣不攝血證小鼠藥效學(xué)的初步探索Balb/c小鼠隨機分為正常組、模型組、YQSX高劑量組(15.22g生藥/kg)、YQSX低劑量組(7.61g生藥/kg)、醋酸潑尼松組,每組12只。第1次腹腔注射APS24h后開始灌胃給藥,連續(xù)給藥12d。各給藥組給藥體積均為20ml/kg/d;正常組、模型組小鼠給予等量的生理鹽水。實驗結(jié)束后,檢測小鼠外周血PLT計數(shù)、出血分級、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、脾臟T與B淋巴細胞亞群等相關(guān)疾病指標(biāo),體質(zhì)量、抓力、舌象等相關(guān)證候指標(biāo)和血小板活化、凋亡相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果:1ITP氣不攝血證小鼠模型的建立與評價(1)疾病指標(biāo)與正常組比較,3周、4周、5周模型組小鼠均有不同程度的出血情況;外周血PLT計數(shù)均顯著降低(P0.01);脾臟指數(shù)均顯著增大(P0.01);3周、4周模型組小鼠胸腺指數(shù)無明顯變化(P0.05),5周模型組小鼠胸腺指數(shù)顯著減小(P0.01);CD3+T 細胞、CD4+T 細胞、CD8+T 細胞、CD4+/CD8+均顯著降低(P0.05-0.01),3周模型組小鼠CD19+B細胞無明顯變化(P0.05),4周、5周模型組小鼠CD19+B細胞明顯降低(P0.05)。(2)證候指標(biāo)正常組小鼠毛色亮白光潤,大便黃褐色、成條狀;3周、4周、5周模型組小鼠毛色粗糙暗黃、有瞇眼與豎毛情況,大便黑褐色或濕便。與正常組比較,3周、4周、5周模型組小鼠體質(zhì)量均無明顯變化(P0.05);抓力均顯著降低(P0.01);3周、5周模型組小鼠脈搏幅度顯著降低(P0.01),4周模型組小鼠脈搏幅度無明顯變化(P0.05);3周、4周、5周模型組小鼠舌面R、G、B、R/B值均無明顯變化(P0.05),3周模型組小鼠舌面R/G值明顯降低(P0.05)。2 ITP氣不攝血證小鼠模型的動態(tài)研究(1)疾病指標(biāo)與正常組比較,7d時模型組小鼠無出血情況、脾臟指數(shù)無明顯變化(P0.05),10d、21d時模型組小鼠均有不同程度不同部位的出血現(xiàn)象、脾臟指數(shù)顯著增高(P0.01);7d、10d、21d時模型組小鼠PLT計數(shù)均顯著降低(P0.01);7d時模型組小鼠的顆粒巨、產(chǎn)板巨、巨核細胞總數(shù)明顯降低(P0.05),10d時模型組小鼠的幼稚巨明顯降低(P0.05),顆粒巨、裸核巨、巨核細胞總數(shù)均明顯增高(P0.05),21d時模型組小鼠的幼稚巨、顆粒巨、裸核巨、巨核細胞總數(shù)均顯著增高(P0.05-0.01);7d時模型組小鼠的CD3+T細胞顯著增高(P0.01),10d、21d時顯著降低(P0.01),7d、10d時模型組小鼠的CD4+T細胞均顯著降低(P0.01),21d時無明顯變化(P0.05),7d模型組小鼠的CD8+T細胞顯著增高(P0.01),10d、21d時無明顯差異(P0.05),7d、21d時模型組小鼠的CD19+B細胞顯著增高(P0.01),10d時無明顯變化(P0.05)。(2)證候指標(biāo)正常組小鼠的毛色亮白、光潤,大便黃褐色、成條狀,精神狀態(tài)良好,7d、10d、21d時模型組小鼠毛色較暗、粗糙,有瞇眼與豎毛情況,大便黑褐色或濕便。與正常組比較,7d、10d、21d時模型組小鼠的體質(zhì)量、抓力、脈搏幅度均顯著降低(P0.01)。(3)PLT相關(guān)指標(biāo)與正常組比較,7d、10d、21d時模型組小鼠TPO、TGF-β1、β-TG、PF4、ATP、ADP、CD62P、ROS-MFI 均顯著增高(P0.05-0.01);7d、10d 時模型組小鼠△屮m顯著降低(P0.01),21d時顯著升高(P0.01);7d時模型組小鼠PNA、PMA均無明顯變化(P0.05),10d時均顯著降低(P0.01),21d時PNA明顯增高(P0.05)、PMA顯著降低(P0.01)。3益氣攝血顆粒對ITP氣不攝血證小鼠藥效學(xué)的初步探索(1)疾病指標(biāo)與正常組比較,模型組小鼠有出血現(xiàn)象;外周血中PLT計數(shù)顯著下降(P0.01);脾臟指數(shù)顯著增高(P0.01);胸腺指數(shù)無明顯差異(P0.05);CD3+T 細胞顯著下降(P0.01)、CD4+T 細胞、CD8+T 細胞、CD4+/CD8+、CD19+B細胞均無明顯變化(P0.05)。與模型組比較,醋酸潑尼松組、YQSX高劑量組小鼠出血現(xiàn)象有不同程度的改善;YQSX高劑量組小鼠外周血中PLT計數(shù)明顯增高(P0.05);醋酸潑尼松組小鼠脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均顯著降低(P0.01);醋酸潑尼松組小鼠CD3+T細胞、CD8+T細胞顯著增高(P0.01),CD4+/CD8+顯著下降(P0.01),CD4+T細胞、CD19+B細胞均無明顯變化(P0.05)。(2)證候指標(biāo)與正常組比較,模型組小鼠體質(zhì)量無明顯變化(P0.05);抓力顯著下降(P0.01);R/G值明顯降低(P0.05)。與模型組比較,醋酸潑尼松組、YQSX高、低劑量組體質(zhì)量均無明顯變化(P0.05);醋酸潑尼松組小鼠抓力無明顯變化(P0.05),YQSX高、低劑量組明顯升高(P0.05-0.01);醋酸潑尼松組、YQSX高、低劑量組小鼠R/G值無明顯變化(P0.05)。(3)PLT相關(guān)指標(biāo)與正常組比較,模型組小鼠CD62P、AV無明顯變化(P0.05),但有明顯升高趨勢;與模型組比較,醋酸潑尼松組、YQSX低劑量組小鼠CD62P均無明顯變化(P0.05),YQSX高劑量組明顯降低(P0.05);YQSX高、低劑量組AV均無明顯變化(P0.05),但有明顯降低趨勢。結(jié)論:1 ITP氣不攝血證小鼠模型的最佳建立周期為3周,建立方法為第1周睡眠剝奪,第2、3周腹腔注射APS復(fù)合睡眠剝奪。2 ITP氣不攝血證小鼠模型的病理變化為先形成氣虛后出血又加重氣虛的動態(tài)過程,符合中醫(yī)氣不攝血的病因病機。3益氣攝血顆粒可提高ITP氣不攝血證小鼠的抓力和外周血小板計數(shù),抑制血小板活化,對其疾病和證候的主要指標(biāo)有改善作用。
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5;R-332
【圖文】：

圖１－１小鼠外周血ＰＬＴ計數(shù)（ｆ±５，《）逡逑與正常組比較，＊Ｐ＜０．０５，＊＊尸＜０．０１逡逑

圖１－２模型組小鼠出血的部位逡逑３．１．３小鼠臟器指數(shù)逡逑

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本文編號：2734142