發(fā)布時(shí)間：2020-03-20 21:16

【摘要】：抑郁癥是一種復(fù)雜的心境及情感障礙類(lèi)疾病,又被稱(chēng)之為抑郁障礙,其主要臨床表現(xiàn)為顯著而持久的心境低落、興趣缺失、主動(dòng)性缺乏等。據(jù)WHO調(diào)查顯示,自2004年起,抑郁癥已成為人類(lèi)第三大頑癥,預(yù)計(jì)至2030年抑郁癥將成為影響人類(lèi)生活的第一大疾病。目前,臨床常用的抗抑郁藥大多存在抗抑郁譜窄、起效慢、不良反應(yīng)大和易復(fù)發(fā)等缺陷。據(jù)報(bào)道,仍有三分之一的抑郁癥患者對(duì)目前的抗抑郁藥物治療無(wú)效,提示我們對(duì)抗抑郁藥物的研發(fā)及抗抑郁的作用機(jī)制的認(rèn)識(shí)需要進(jìn)一步加深,為臨床抗抑郁治療提供更多的科學(xué)線(xiàn)索。抑郁癥病因復(fù)雜,涉及多種發(fā)病機(jī)制主要包括單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)假說(shuō)、下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)(HPA)軸亢進(jìn)假說(shuō)、腦內(nèi)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子假說(shuō)、氧化應(yīng)激假說(shuō)等。在過(guò)去的幾十年里,單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)假說(shuō)作為抑郁癥發(fā)病機(jī)制的主要病理假說(shuō),得到了廣泛關(guān)注,已成為目前臨床抗抑郁藥的主要靶點(diǎn)。大量臨床證據(jù)和基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)表明,神經(jīng)炎癥在抑郁癥病理進(jìn)程中發(fā)揮著不可忽視的作用。中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥過(guò)程可能通過(guò)影響神經(jīng)遞質(zhì)及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)平衡等多個(gè)途徑影響抑郁癥的發(fā)病。細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)可以通過(guò)細(xì)胞表面受體作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞,調(diào)節(jié)行為和突觸功能。神經(jīng)炎癥也能夠激活興奮性通路,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及大腦區(qū)域(如海馬和前額葉皮層)神經(jīng)元減少。這些研究提示,抑制神經(jīng)炎癥可能會(huì)發(fā)揮抗抑郁作用。研究報(bào)道許多傳統(tǒng)中藥具有顯著的抗抑郁臨床療效。因而,從傳統(tǒng)中草藥或者天然藥物中發(fā)現(xiàn)并開(kāi)發(fā)抗抑郁制劑有望成為抑郁癥藥物治療的突破方向之一。益母草堿是中藥益母草中的一種有效生物堿。益母草屬中藥唇形科益母草屬(Leonurus)植物,始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,其主要功效是活血、調(diào)經(jīng)、祛瘀、消水,善治經(jīng)產(chǎn)諸證,具有“血脈圣藥”之稱(chēng)。有研究報(bào)道,益母草能夠減輕孕期婦女的焦慮癥。益母草堿(Leonurine)作為其有效生物堿,又名SCM-198�，F(xiàn)代藥理研究已證實(shí)益母草堿具有興奮子宮、溶栓、抗凝、降血黏度、降脂、降低紅細(xì)胞聚集、抑制血小板聚集、改善微循環(huán)、抗氧自由基、抗炎、減輕細(xì)胞內(nèi)鈣超載等諸多作用。前期學(xué)者報(bào)道指出,益母草堿對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病及心血管功能異常具有治療作用,從而為拓寬其臨床應(yīng)用提供了藥理學(xué)基礎(chǔ)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),益母草堿有許多異于傳統(tǒng)適應(yīng)癥的藥理作用如能夠在腦缺血、帕金森病和阿爾茨海默等病中發(fā)揮中樞保護(hù)作用,顯著改善模型動(dòng)物的行為缺陷,促進(jìn)神經(jīng)元存活及抑制神經(jīng)炎癥。抑郁癥作為發(fā)病率最高的神經(jīng)精神疾病,與其他精神類(lèi)疾病有諸多相似病理機(jī)制。然而,益母草堿的抗抑郁作用尚不清楚。本文通過(guò)建立慢性溫和應(yīng)激(Chronic mild stress,CMS)誘導(dǎo)的小鼠抑郁癥模型,研究益母草堿的抗抑郁樣作用及其作用機(jī)制。研究結(jié)果顯示,給予益母草堿(60 mg/kg)治療四周后,能夠顯著升高CMS模型小鼠的糖水偏愛(ài)率,縮短強(qiáng)迫游泳和懸尾實(shí)驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間;改善CMS模型小鼠腦內(nèi)單胺類(lèi)和氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的異常;增加CMS模型小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量;增加CMS模型小鼠海馬神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子GDNF、BDNF水平;減輕海馬神經(jīng)元損傷。此外,益母草堿(60mg/kg)治療四周后,能顯著減少CMS模型小鼠海馬炎性因子白介素(IL)-1β、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α的蛋白水平,抑制NF-bκB信號(hào)通路激活。本研究發(fā)現(xiàn)益母草堿具有抗抑郁作用,其機(jī)制可能是抑制腦內(nèi)神經(jīng)炎癥、改善腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)水平異常,為深化益母草堿的臨床應(yīng)用提供了學(xué)術(shù)基礎(chǔ)。目的:應(yīng)用C57BL/6J小鼠建立CMS抑郁模型,觀察益母草堿對(duì)CMS模型小鼠的抗抑郁作用,闡明益母草堿抗抑郁作用的潛在機(jī)制。方法:本實(shí)驗(yàn)將雄性C57BL/6J小鼠(體重18-25 g)隨機(jī)分為五組:正常對(duì)照組、CMS抑郁模型組、CMS+益母草堿(30mg/kg/day,i.g)治療組、CMS+益母草堿(60 mg/kg/day,i.g)治療組、CMS+氟西汀(20mg/kg/day,i.g)治療組。每只單籠飼養(yǎng),除正常對(duì)照組外,其余四組給予慢性溫和應(yīng)激,持續(xù)六周,此期間正常對(duì)照組常規(guī)飼養(yǎng)。通過(guò)糖水偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)模型成功后,CMS +氟西汀治療組和抑郁癥模型+益母草堿治療組小鼠灌胃:氟西汀(20mg/kg/day,i.g),益母草堿(30mg/kg/day 或 60mg/kg/day,i.g),同時(shí)正常對(duì)照組小鼠每天灌胃給予等量生理鹽水配制的1%CMC-Na,連續(xù)給藥四周。1.通過(guò)糖水偏愛(ài)試驗(yàn)(sucrose preference test,SPT)、強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)(forced swimming test,FST)和懸尾試驗(yàn)(tailsuspensiontest,TST)評(píng)價(jià)益母草堿的抗抑郁作用;2.應(yīng)用高效液相色譜法(High performance liquid chromatography,HPLC)檢測(cè)益母草堿對(duì) CMS 模型小鼠海馬和前額葉皮層內(nèi)單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)及其代謝產(chǎn)物5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)、雙羥基乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA);氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸(Glutamate,Glu)、天冬氨酸(Aspartic acid,Asp)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid,GABA)、甘氨酸(Glycine,Gly)、�；撬�(Taurine,Tau)、絲氨酸(serine,Ser)、谷氨酰胺(Glutamine,Gln)的影響;3.應(yīng)用免疫熒光觀察益母草堿對(duì)CMS模型小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞的影響;4.應(yīng)用采用尼氏染色、透射電鏡技術(shù)及Tunel細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法觀察益母草堿對(duì)CMS模型小鼠海馬神經(jīng)元保護(hù)作用;5.應(yīng)用Western blot方法觀察益母草堿對(duì)CMS模型小鼠海馬腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF、膠質(zhì)源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(GDNF),炎性因子 IL-1β、TNF-α、IL-6,NF-kB(nuclearfactorkappaB)信號(hào)核轉(zhuǎn)錄因子P65、IKKβ的磷酸化水平的影響。結(jié)果:1.益母草堿改善CMS模型小鼠抑郁樣行為小鼠CMS造模六周后,較于正常對(duì)照組,小鼠糖水偏愛(ài)率顯著降低(P0.01),強(qiáng)迫游泳及懸尾實(shí)驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間顯著增加(P0.01)。與CMS抑郁模型組比較,給予益母草堿(60mg/kg)治療四周后,糖水偏愛(ài)率顯著升高(P0.05),強(qiáng)迫游泳和懸尾實(shí)驗(yàn)中不動(dòng)時(shí)間顯著縮短(P0.05)。表明益母草堿可顯著改善CMS模型小鼠的抑郁樣行為。2.益母草堿改善CMS模型小鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)異常小鼠CMS造模六周后,較于正常對(duì)照組,小鼠海馬與前額皮層5-HT、NE、DA的含量顯著降低(P0.05),海馬5-HIAA及前額皮層HVA和DOPAC含量顯著升高(P0.05)。與CMS模型組比較,給予益母草堿(60mg/kg)治療四周后,小鼠海馬與前額皮層5-HT、NE、DA含量顯著升高(P0.05);前額皮層DOPAC含量顯著減少(P0.05)。此外,較于正常對(duì)照組,CMS模型小鼠海馬腦區(qū)Asp濃度顯著升高(P0.01),GABA濃度顯著降低(P0.05);前額皮層Ser和Asp的濃度顯著升高(P0.05),Tau和Gln濃度顯著降低(P0.05)。給予益母草堿(60 mg/kg)治療四周后,顯著降低CMS模型小鼠海馬Asp,前額皮層Ser水平(P0.05),升高海馬GABA及前額葉皮層Tau水平(P0.05)。表明益母草堿可改善CMS模型小鼠腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)異常。3.益母草堿增加CMS模型小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量免疫熒光結(jié)果顯示,較于正常對(duì)照組,小鼠CMS造模六周后,海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAPP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著減少(P0.01),給予益母草堿(60mg/kg)治療四周后,顯著增加CMS模型小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(P0.05)。表明益母草堿對(duì)CMS模型小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞具有保護(hù)作用。4.益母草堿增加CMS模型小鼠海馬神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF、GDNF的水平Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組比較,CMS模型組小鼠海馬神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF、GDNF的水平顯著降低(P0.01)。給予益母草堿(60 mg/kg)治療四周后,顯著升高CMS模型小鼠海馬神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BDNF、GDNF的水平(P0.05)。表明,益母草堿可改善CMS模型小鼠腦內(nèi)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)水平。5.益母草堿減輕CMS模型小鼠海馬神經(jīng)損傷小鼠CMS造模六周后,海馬齒狀回(DG)顆粒細(xì)胞和CA3區(qū)錐體細(xì)胞排列疏松,細(xì)胞體積變小,核仁固縮,尼氏體減少;神經(jīng)元發(fā)生明顯凋亡且超微結(jié)構(gòu)發(fā)生損傷,可見(jiàn)大量損傷的線(xiàn)粒體,此外,海馬髓鞘變薄,g-ratio顯著升高(P0.01)。相較于CMS模型組,益母草堿(60mg/kg)治療組小鼠海馬DG區(qū)顆粒細(xì)胞和CA3區(qū)錐體細(xì)胞神經(jīng)元排列、胞體大小、胞核形態(tài)及尼氏體數(shù)目均接近正常,神經(jīng)元凋亡減輕,神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)及海馬髓鞘形態(tài)改善。表明益母草堿可改善CMS模型小鼠海馬神經(jīng)損傷。6.益母草堿抑制CMS模型小鼠海馬神經(jīng)炎癥Western b1ot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組比較,CMS模型組小鼠海馬炎癥因子IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白水平及IKKβ、P65的磷酸化水平顯著升高。給予益母草堿(60mg/kg)治療四周后,顯著降低CMS模型小鼠海馬炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-6蛋白水平(P0.01)及IKKβ、P65的磷酸化水平(P0.05)。表明益母草堿可顯著抑制CMS模型小鼠海馬神經(jīng)炎癥。結(jié)論:1.益母草堿改善CMS模型小鼠的抑郁樣癥狀。2.益母草堿的抗抑郁作用可能與抑制神經(jīng)炎癥、改善腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)水平異常有關(guān)。綜上所述,本文創(chuàng)新之處:1.益母草堿具有抗抑郁作用,揭示了益母草堿的藥理新作用,提示益母草堿可作為臨床抗抑郁的潛在治療藥物。
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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1 羅海鷗;楊明會(huì);趙宏;李紹旦;;抑郁癥患者神經(jīng)遞質(zhì)腦超慢漲落圖分析[J];軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào);2011年04期

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1 傅錦華;新型抗抑郁中藥舒肝解郁膠囊對(duì)抑郁模型大鼠的作用機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：2592208