MiR-200c調(diào)節(jié)放射性口腔黏膜炎的病理過(guò)程
發(fā)布時(shí)間：2020-12-09 04:38
背景和目的:放射性口腔黏膜炎是接受放療的腫瘤病人,特別是頭頸腫瘤患者最常見(jiàn)的并發(fā)癥之一。它常常表現(xiàn)為嚴(yán)重的疼痛和潰瘍形成。它的發(fā)病過(guò)程包括五個(gè)階段:起始階段,初級(jí)損傷反應(yīng)階段,信號(hào)放大階段,潰瘍形成階段和愈合階段。但是,放射性口腔黏膜炎的病理過(guò)程中關(guān)鍵調(diào)控因子依然未知。在本研究中,我們揭示了 miR-200家族中的一員,miR-200c在調(diào)節(jié)放射性口腔黏膜炎的病理過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果:本研究建立放射性口腔黏膜炎小鼠模型,發(fā)現(xiàn)放射性口腔黏膜炎病理過(guò)程中,除了 miR-429,大部分 miR-200 家族成員（miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141）表達(dá)顯著增高。原代培養(yǎng)人正常角化細(xì)胞電離輻射后miR-200c表達(dá)亦明顯增加。進(jìn)一步運(yùn)用miR-200c-3p-shRNA敲減人正常角化細(xì)胞miR-200c的表達(dá),發(fā)現(xiàn)電離輻射后敲減miR-200c的人正常角化細(xì)胞衰老顯著減少、細(xì)胞增殖能力明顯增強(qiáng)。電離輻射引起人正常角化細(xì)胞活性氧、p47蛋白明顯增加,但是在miR-200c敲減細(xì)胞中都被顯著抑制,相比于對(duì)照組細(xì)胞,miR-200c敲減細(xì)胞DNA雙鏈...
【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖２?ＭｉＲ－２００家族在?
后表迗量沒(méi)有明顯改變，而ｍｉＲ－２００ａ、ｍｉＲ－２００ｂ、ｍｉＲ－２００ｃ于ＩＲ后２４小時(shí)表達(dá)??明顯升高，并持續(xù)到４８小時(shí)。在ＮＨＫ細(xì)胞中，ｍｉＲ－２００ｃ是整個(gè)家族中表達(dá)量最??高的，并于輻照后６小時(shí)表達(dá)即明顯增高（圖３Ａ）。為進(jìn)一步研究ｍｉＲ－２００ｃ在??ＲＩＯＭ病理過(guò)程中發(fā)揮的作用，分別用編碼ｍｉＲ－２００ｃ特異性ｓｈＲＮＡ的慢病毒和??陰性對(duì)照病毒感染ＮＨＫ，構(gòu)建了?ｍｉＲ－２００ｃ敲減的穩(wěn)定細(xì)胞系（ＮＨＫ?／?ｍｉＲ－２００ｃ－）??和對(duì)照細(xì)胞系（ＮＨＫ／Ｃｏｎｔｒｏｌ）。ＩＲ后２、３、７天，在ＮＨＫ／Ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞系中，??ｍｉＲ－２００ｃ明顯表迗?jiān)黾樱危龋?／?ｍｉＲ－２００ｃ－細(xì)胞系中，ｍｉＲ－２００ｃ表達(dá)量變化不??大（圖３Ｂ）。已有研究表明，ＩＲ會(huì)導(dǎo)致ＮＨＫ壓力誘導(dǎo)的永久性衰老。我們發(fā)現(xiàn)??ｍｉＲ－２００ｃ敲減可以明顯抑制ＩＲ后細(xì)胞的ｐ－半乳糖苷酶活性（衰老標(biāo)記），并且ＩＲ后??７天，ｍｉＲ－２００ｃ敲減細(xì)胞依然具有增殖活力，而８２％對(duì)照細(xì)胞發(fā)生衰老（圖３Ｃ）。??細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)細(xì)胞放射敏感性的金標(biāo)準(zhǔn)。觀察到ＩＲ后ｍｉＲ－２００ｃ敲減??細(xì)胞系的克隆形成率與植板率明顯高于對(duì)照細(xì)胞（圖３Ｄ）
氧（ＲＯＳ）生成。因此，我們首先研究ｍｉＲ－２００ｃ對(duì)ＩＲ后ＲＯＳ產(chǎn)生的影響。細(xì)胞??ＤＨＥ染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)ＩＲ后４天和６天，ＮＨＫ?／?Ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞內(nèi)有明顯??的ＲＯＳ生成，但ＮＨＫ／ｍｉＲ－２００ｃ－細(xì)胞中ＲＯＳ產(chǎn)生較對(duì)照細(xì)胞顯著降低（圖４Ａ）。??ＩＲ后２、５、７天，ＮＨＫ／Ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞內(nèi)ＲＯＳ產(chǎn)生所需的關(guān)鍵酶ｐ４７的蛋白表達(dá)??量明顯增加，但是ＮＨＫ／ｍｉＲ－２００ｃ－細(xì)胞ｐ４７蛋白水平較對(duì)照細(xì)胞顯著降低（圖４Ｂ）。??為進(jìn)一步研究ｍｉＲ－２００ｃ敲減是否影響ＩＲ后的ＤＮＡ損傷修復(fù)，進(jìn)行彗星實(shí)驗(yàn)??和Ｙ－Ｈ２ＡＸ免疫熒光染色，這兩種方法都是衡量ＤＮＡ雙鏈斷裂水平的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)。??與ＮＨＫ?／?Ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞相比，ＩＲ后１０小時(shí)，ＮＨＫ／ｍｉＲ－２００ｃ－細(xì)胞表現(xiàn)為更短的彗??尾和更小的尾部ＤＮＡ含量百分比（圖４Ｃ）。另外，ＩＲ后ＮＨＫ／Ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞的??細(xì)胞核內(nèi)產(chǎn)生明顯的Ｙ－Ｈ２ＡＸ焦點(diǎn)，但在，ＮＨＫ／ｍｉＲ－２００ｃ－細(xì)胞內(nèi)這種焦點(diǎn)明顯減??少（圖４Ｄ）。與Ｙ－Ｈ２ＡＸ焦點(diǎn)結(jié)果相一致
本文編號(hào)：2906288
【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖２?ＭｉＲ－２００家族在?
后表迗量沒(méi)有明顯改變，而ｍｉＲ－２００ａ、ｍｉＲ－２００ｂ、ｍｉＲ－２００ｃ于ＩＲ后２４小時(shí)表達(dá)??明顯升高，并持續(xù)到４８小時(shí)。在ＮＨＫ細(xì)胞中，ｍｉＲ－２００ｃ是整個(gè)家族中表達(dá)量最??高的，并于輻照后６小時(shí)表達(dá)即明顯增高（圖３Ａ）。為進(jìn)一步研究ｍｉＲ－２００ｃ在??ＲＩＯＭ病理過(guò)程中發(fā)揮的作用，分別用編碼ｍｉＲ－２００ｃ特異性ｓｈＲＮＡ的慢病毒和??陰性對(duì)照病毒感染ＮＨＫ，構(gòu)建了?ｍｉＲ－２００ｃ敲減的穩(wěn)定細(xì)胞系（ＮＨＫ?／?ｍｉＲ－２００ｃ－）??和對(duì)照細(xì)胞系（ＮＨＫ／Ｃｏｎｔｒｏｌ）。ＩＲ后２、３、７天，在ＮＨＫ／Ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞系中，??ｍｉＲ－２００ｃ明顯表迗?jiān)黾樱危龋?／?ｍｉＲ－２００ｃ－細(xì)胞系中，ｍｉＲ－２００ｃ表達(dá)量變化不??大（圖３Ｂ）。已有研究表明，ＩＲ會(huì)導(dǎo)致ＮＨＫ壓力誘導(dǎo)的永久性衰老。我們發(fā)現(xiàn)??ｍｉＲ－２００ｃ敲減可以明顯抑制ＩＲ后細(xì)胞的ｐ－半乳糖苷酶活性（衰老標(biāo)記），并且ＩＲ后??７天，ｍｉＲ－２００ｃ敲減細(xì)胞依然具有增殖活力，而８２％對(duì)照細(xì)胞發(fā)生衰老（圖３Ｃ）。??細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)細(xì)胞放射敏感性的金標(biāo)準(zhǔn)。觀察到ＩＲ后ｍｉＲ－２００ｃ敲減??細(xì)胞系的克隆形成率與植板率明顯高于對(duì)照細(xì)胞（圖３Ｄ）
氧（ＲＯＳ）生成。因此，我們首先研究ｍｉＲ－２００ｃ對(duì)ＩＲ后ＲＯＳ產(chǎn)生的影響。細(xì)胞??ＤＨＥ染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)ＩＲ后４天和６天，ＮＨＫ?／?Ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞內(nèi)有明顯??的ＲＯＳ生成，但ＮＨＫ／ｍｉＲ－２００ｃ－細(xì)胞中ＲＯＳ產(chǎn)生較對(duì)照細(xì)胞顯著降低（圖４Ａ）。??ＩＲ后２、５、７天，ＮＨＫ／Ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞內(nèi)ＲＯＳ產(chǎn)生所需的關(guān)鍵酶ｐ４７的蛋白表達(dá)??量明顯增加，但是ＮＨＫ／ｍｉＲ－２００ｃ－細(xì)胞ｐ４７蛋白水平較對(duì)照細(xì)胞顯著降低（圖４Ｂ）。??為進(jìn)一步研究ｍｉＲ－２００ｃ敲減是否影響ＩＲ后的ＤＮＡ損傷修復(fù)，進(jìn)行彗星實(shí)驗(yàn)??和Ｙ－Ｈ２ＡＸ免疫熒光染色，這兩種方法都是衡量ＤＮＡ雙鏈斷裂水平的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)。??與ＮＨＫ?／?Ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞相比，ＩＲ后１０小時(shí)，ＮＨＫ／ｍｉＲ－２００ｃ－細(xì)胞表現(xiàn)為更短的彗??尾和更小的尾部ＤＮＡ含量百分比（圖４Ｃ）。另外，ＩＲ后ＮＨＫ／Ｃｏｎｔｒｏｌ細(xì)胞的??細(xì)胞核內(nèi)產(chǎn)生明顯的Ｙ－Ｈ２ＡＸ焦點(diǎn)，但在，ＮＨＫ／ｍｉＲ－２００ｃ－細(xì)胞內(nèi)這種焦點(diǎn)明顯減??少（圖４Ｄ）。與Ｙ－Ｈ２ＡＸ焦點(diǎn)結(jié)果相一致
本文編號(hào)：2906288
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