發(fā)布時間：2020-12-05 17:53

　　目的:篩選與黃曲霉毒素B1（AFB1）誘導(dǎo)的穩(wěn)定表達(dá)CYP2A13的BEAS-2B（B-2A13）細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化相關(guān)的關(guān)鍵外泌體型miRNAs簇;探索外泌體型miR-487a/miR-487b簇在AFB1誘導(dǎo)的B-2A13細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化進(jìn)程中的作用及其機(jī)制。方法:1.利用Affymetrix miRNA芯片中檢測的AFB1長期低劑量處理的惡性轉(zhuǎn)化的P50 B-2A13細(xì)胞株和未發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的P50 B-Vector細(xì)胞株的mi RNAs表達(dá)譜,篩選出兩種細(xì)胞間差異表達(dá)的miRNAs。2.采用OmicsBean軟件分析差異表達(dá)的miRNAs的靶基因所參與的基因通路,再利用miRbase數(shù)據(jù)庫對篩選出的miRNA逐一進(jìn)行檢索,篩選出成簇的miRNAs。3.使用SBI試劑盒提取細(xì)胞上清中的外泌體,采用RT-qPCR對比分析P50 B-2A13和B-2A13細(xì)胞及外泌體中miRNAs的相對表達(dá)水平,篩選出在細(xì)胞和外泌體中表達(dá)同步的miR-487a/miR-487b簇作為關(guān)鍵的外泌體型miRNAs簇。4.采用瞬時轉(zhuǎn)染miRNA inhibitor的方法在P50 B-2A13細(xì)胞中分別單獨和聯(lián)合抑制m... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

差異表達(dá)的miRNAs（芯片分析）

南京醫(yī)科大學(xué)碩異表達(dá)的 miRNAs 調(diào)控的基因通路分析上調(diào)的 miRNAs 所調(diào)控靶基因的功能分析 1-2 所示，Biological Process，Cell Component，Molecular Fathway 是功能分析的 4 大類，分別代表生物過程、細(xì)胞組分GG 通路。以 p＜0.05 為標(biāo)準(zhǔn)，在上調(diào) miRNAs 所調(diào)控的靶 個基因參與了生物過程，473 個基因參與細(xì)胞組分，513 個關(guān)，另外有 87 個基因參與 KEGG 通路。上調(diào) miRNAs 的析中每個類別的計數(shù)如上圖所示。

圖 1-3 對上調(diào) miRNA 的靶基因功能注釋分析（GO 分析）如圖 1-4 所示，對上調(diào) miRNAs 的靶基因進(jìn)行 Pathway 分析。Pathway 是指代謝通路，對差異 miRNAs 調(diào)控的基因進(jìn)行 pathway 分析，可以了解實驗條件下顯著改變的代謝通路。上調(diào)的 miRNAs 所調(diào)控的靶基因參與多條通路，主要包括以下幾方面的分子間相互作用和反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)：代謝、遺傳信息加工、環(huán)境信息加工、細(xì)胞轉(zhuǎn)化、器官系統(tǒng)、人類疾病和其他。在環(huán)境信息加工中，上調(diào)miRNAs 所調(diào)控的靶基因主要參與 PI3K-Akt 信號通路、MAPK 信號通路、Rap1 信號通路、AMPK 信號通路、Hippo 信號通路等；在細(xì)胞轉(zhuǎn)化中，落在內(nèi)吞作用、激動蛋白細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)、細(xì)胞粘附連接等通路的基因較多，說明細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的生物過程可能是受上調(diào)的 miRNAs 所調(diào)控的這些信號通路來完成的；對疾病富集結(jié)果顯示，這些靶基因參與多種疾病進(jìn)程，其中以腫瘤相關(guān)疾病為主，包括前列腺癌、結(jié)直腸癌、白血病、黑色素瘤、非小細(xì)胞肺癌等。這些上調(diào)的 miRNA 的靶基因在多種腫瘤中均有富集，說明這些 miRNAs 可能通

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Contamination of Aflatoxins in Different Kinds of Foods in China[J]. JUN WANG AND XIU-MEI LIU Institute of Nutrition and Food Safety, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100050, China.  Biomedical and Environmental Sciences. 2007(06)



本文編號：2899849