目的:篩選與黃曲霉毒素B1（AFB1）誘導的穩(wěn)定表達CYP2A13的BEAS-2B（B-2A13）細胞惡性轉化相關的關鍵外泌體型miRNAs簇;探索外泌體型miR-487a/miR-487b簇在AFB1誘導的B-2A13細胞惡性轉化進程中的作用及其機制。方法:1.利用Affymetrix miRNA芯片中檢測的AFB1長期低劑量處理的惡性轉化的P50 B-2A13細胞株和未發(fā)生惡性轉化的P50 B-Vector細胞株的mi RNAs表達譜,篩選出兩種細胞間差異表達的miRNAs。2.采用OmicsBean軟件分析差異表達的miRNAs的靶基因所參與的基因通路,再利用miRbase數(shù)據(jù)庫對篩選出的miRNA逐一進行檢索,篩選出成簇的miRNAs。3.使用SBI試劑盒提取細胞上清中的外泌體,采用RT-qPCR對比分析P50 B-2A13和B-2A13細胞及外泌體中miRNAs的相對表達水平,篩選出在細胞和外泌體中表達同步的miR-487a/miR-487b簇作為關鍵的外泌體型miRNAs簇。4.采用瞬時轉染miRNA inhibitor的方法在P50 B-2A13細胞中分別單獨和聯(lián)合抑制m... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

差異表達的miRNAs（芯片分析）

南京醫(yī)科大學碩異表達的 miRNAs 調控的基因通路分析上調的 miRNAs 所調控靶基因的功能分析 1-2 所示，Biological Process，Cell Component，Molecular Fathway 是功能分析的 4 大類，分別代表生物過程、細胞組分GG 通路。以 p＜0.05 為標準，在上調 miRNAs 所調控的靶 個基因參與了生物過程，473 個基因參與細胞組分，513 個關，另外有 87 個基因參與 KEGG 通路。上調 miRNAs 的析中每個類別的計數(shù)如上圖所示。

圖 1-3 對上調 miRNA 的靶基因功能注釋分析（GO 分析）如圖 1-4 所示，對上調 miRNAs 的靶基因進行 Pathway 分析。Pathway 是指代謝通路，對差異 miRNAs 調控的基因進行 pathway 分析，可以了解實驗條件下顯著改變的代謝通路。上調的 miRNAs 所調控的靶基因參與多條通路，主要包括以下幾方面的分子間相互作用和反應網(wǎng)絡：代謝、遺傳信息加工、環(huán)境信息加工、細胞轉化、器官系統(tǒng)、人類疾病和其他。在環(huán)境信息加工中，上調miRNAs 所調控的靶基因主要參與 PI3K-Akt 信號通路、MAPK 信號通路、Rap1 信號通路、AMPK 信號通路、Hippo 信號通路等；在細胞轉化中，落在內吞作用、激動蛋白細胞骨架調節(jié)、細胞粘附連接等通路的基因較多，說明細胞惡性轉化的生物過程可能是受上調的 miRNAs 所調控的這些信號通路來完成的；對疾病富集結果顯示，這些靶基因參與多種疾病進程，其中以腫瘤相關疾病為主，包括前列腺癌、結直腸癌、白血病、黑色素瘤、非小細胞肺癌等。這些上調的 miRNA 的靶基因在多種腫瘤中均有富集，說明這些 miRNAs 可能通

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Contamination of Aflatoxins in Different Kinds of Foods in China[J]. JUN WANG AND XIU-MEI LIU Institute of Nutrition and Food Safety, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100050, China.  Biomedical and Environmental Sciences. 2007(06)



本文編號：2899849