發(fā)布時(shí)間：2020-10-30 04:14

　　 目的:肺癌作為當(dāng)前全球最常見的惡性腫瘤之一,嚴(yán)重威脅著人類的生命和健康,因此肺癌的防治至關(guān)重要。聚ADP-核糖基化反應(yīng)的關(guān)鍵酶聚ADP-核糖水解酶[poly(ADP-ribose)glycohydrolase,PARG]在腫瘤發(fā)生中發(fā)揮重要作用,本研究擬以PARG基因缺陷小鼠作為研究對(duì)象,探討PARG缺陷在苯并芘[Benzo(a)pyrene,BaP]致肺癌中的作用及可能機(jī)制,為肺癌的有效防治提供參考。方法:分別選擇6-8周齡野生型小鼠和PARG~(+/-)小鼠各24只,雌雄各半,將其隨機(jī)分為對(duì)照組和染毒組,每組6只。利用動(dòng)式吸入染毒柜分別染毒90天和180天,染毒組BaP濃度為10.0ug/m3,并設(shè)溶劑對(duì)照。染毒期間記錄小鼠的生存狀況和體重變化。染毒結(jié)束時(shí)收集小鼠肺臟和血液,利用HE染色進(jìn)行小鼠肺臟的病理分析,ELISA檢測(cè)小鼠血液中BaP暴露情況,應(yīng)用RT-PCR及Western blot技術(shù)檢測(cè)小鼠肺臟中EGFR和UCH-L1基因在mRNA和蛋白水平的表達(dá)變化,同時(shí)運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法驗(yàn)證EGFR和UCH-L1在肺組織中的表達(dá)。結(jié)果:1、PARG缺陷對(duì)BaP誘導(dǎo)小鼠肺癌過程的影響:(1)BaP暴露能抑制野生型小鼠的體重增長(zhǎng),而對(duì)PARG~(+/-)小鼠無(wú)顯著影響:野生型小鼠的體重在染毒90天和180天后均顯著低于對(duì)照組(P0.05);而PARG~(+/-)小鼠的體重在染毒90天和180天后均與對(duì)照組無(wú)明顯差異,且BaP染毒后野生型小鼠體重增長(zhǎng)均慢于PARG~(+/-)小鼠組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)隨著BaP暴露時(shí)間加長(zhǎng),野生型小鼠肺臟器系數(shù)出現(xiàn)了增大趨勢(shì),而PARG~(+/-)小鼠沒有明顯變化:BaP作用90天后的野生型小鼠肺臟器系數(shù)較對(duì)照組沒有明顯差別,染毒180天后肺臟器系數(shù)則明顯大于對(duì)照組(P0.05);PARG~(+/-)小鼠染毒90天與180天后肺臟器系數(shù)均無(wú)明顯變化。(3)隨著BaP暴露時(shí)間加長(zhǎng),野生型小鼠肺出現(xiàn)了腫瘤,肺損傷進(jìn)行性加重,PARG~(+/-)小鼠未出現(xiàn)腫瘤,肺損傷較輕:染毒180天的野生型小鼠肺臟出現(xiàn)腫瘤,嚴(yán)重肺泡彌漫性間質(zhì)化,肺泡結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破損;PARG~(+/-)小鼠染毒180天后未見腫瘤,部分肺泡間質(zhì)增厚,仍可見肺泡結(jié)構(gòu)。(4)經(jīng)過BaP暴露,野生型小鼠和PARG~(+/-)小鼠血液中BPDE-DNA均顯著升高:BaP暴露90天和180天后野生型小鼠和PARG~(+/-)小鼠的BPDE-DNA濃度均高于對(duì)照組(P0.05),野生型小鼠和PARG~(+/-)小鼠組間沒有明顯差異。2、PARG缺陷在BaP誘導(dǎo)小鼠肺癌中的潛在機(jī)制:BaP染毒90天后,野生型小鼠EGFR、UCH-L1在基因、蛋白水平的相對(duì)表達(dá)均上升(P0.05),PARG~(+/-)小鼠EGFR、UCH-L1在基因水平表達(dá)無(wú)顯著差異,EGFR蛋白表達(dá)明顯降低(P0.05),UCH-L1在蛋白水平表達(dá)無(wú)顯著差異;BaP染毒180天后野生型小鼠EGFR、UCH-L1在基因、蛋白水平的表達(dá)均顯著增強(qiáng)(P0.05),PARG~(+/-)小鼠EGFR、UCH-L1在基因、蛋白水平表達(dá)均降低(P0.05)。結(jié)論:1、PARG缺陷可對(duì)抗BaP致小鼠肺癌。2、PARG缺陷可能通過抑制EGFR信號(hào)通路激活和調(diào)控泛素化蛋白酶解過程對(duì)抗BaP致肺癌。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R114
【部分圖文】：

ARG 缺陷在苯并芘致肺癌過程中的作用及其潛在機(jī)制研究 碩士學(xué)位論文3.2 動(dòng)物一般狀況分析3.2.1BaP 染毒 90 天小鼠生長(zhǎng)狀態(tài)和體質(zhì)量變化染毒過程中，野生型型小鼠和 PARG+/-小鼠均沒有出現(xiàn)死亡，各組小均未出現(xiàn)叫聲異常、運(yùn)動(dòng)遲緩、易興奮、驚厥等異常行為，皮膚和皮毛沒有明顯改變。體質(zhì)量變化見圖 1-2，野生型型小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)在染毒前有明顯差異，染毒后野生型型小鼠體重明顯輕于對(duì)照組（P<0.05），野生型小鼠染毒組第 8 周出現(xiàn)下降，對(duì)照組則一直保持增長(zhǎng)的趨勢(shì)；BaP PARG+/-小鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)則沒有明顯差異，染毒組與對(duì)照組體質(zhì)量增長(zhǎng)保持穩(wěn)定增長(zhǎng)的趨勢(shì)。3.2.2 BaP 染毒 180 天小鼠生長(zhǎng)狀態(tài)和體質(zhì)量變化

BPDE-DNA 測(cè)定結(jié)果Tab 4 BPDE-DNA concentration of WT and PARG+/-mice exposed表 1-4 BaP 染毒后小鼠 BPDE-DNA 濃度變化（ng/mL）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組染毒劑量（ug/m3）0 10WT-90d 3.639±0.259 11.917±0.214*PARG+/--90d 4.250±1.010 12.977±0.276*WT-180d 3.200±0.327 9.514±0.315*PARG+/--180d 4.031±0.095 12.861±0.355*注：*表示與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；WT-90d：野生型小鼠組 90 天+/--90d：PARG+/-小鼠組 90 天；WT-180d：野生型小鼠組 180 天；PARG+/--180d：PARG 180 天。

PARG 缺陷在苯并芘致肺癌過程中的作用及其潛在機(jī)制研究 碩士學(xué)位論文3.5.2BaP 染毒 180 天后小鼠肺形態(tài)學(xué)改變野生型小鼠肺部損傷程度與染毒時(shí)間呈正相關(guān)，BaP 染毒 180 天后野生型小鼠肺出現(xiàn)嚴(yán)重肺泡彌漫性間質(zhì)化，且肺泡結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破損，明顯的炎性浸潤(rùn)，出現(xiàn)異常結(jié)節(jié)，如圖 1-6 中紅色箭頭所指，非正常細(xì)胞數(shù)量異常增多，病理學(xué)分析出現(xiàn)腫瘤組織，PARG+/-小鼠則出現(xiàn)部分肺泡間質(zhì)增厚，肺泡結(jié)構(gòu)仍可見，未發(fā)現(xiàn)腫瘤組織，見圖 1-6。
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本文編號(hào)：2861971