發(fā)布時(shí)間：2024-09-18 09:49

　　DFNA5是導(dǎo)致非綜合征性耳聾的常染色體顯性遺傳的基因,與別的常染色體顯性遺傳基因的突變異質(zhì)性不同,目前已知的所有致聾突變類型均為導(dǎo)致第八外顯子跳躍的剪接位點(diǎn)突變。DFNA5除了與耳聾相關(guān),還發(fā)揮抑癌基因的功能,最新的研究表明DFNA5是引發(fā)細(xì)胞繼發(fā)性壞死的重要的效應(yīng)蛋白。盡管對(duì)于DFNA5蛋白功能的了解越來越深入,但是關(guān)于DFNA5剪接位點(diǎn)突變致聾的機(jī)制尚不明確。目的:通過一個(gè)常染色體顯性遺傳的耳聾大家系,篩選出致病基因。通過生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)DFNA5蛋白的功能,構(gòu)建第八外顯子跳躍突變型質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染不同細(xì)胞系研究DFNA5的分子功能,分析可能的致聾機(jī)制。方法:1.臨床收集一個(gè)常染色體顯性遺傳耳聾家系,提取家系成員的外周靜脈血DNA,通過全外顯子捕獲的方法尋找影響高頻聽力的的致病基因。提取該家族耳聾患者與聽力正常人血樣中的mRNA,逆轉(zhuǎn)錄PCR結(jié)合Sanger測(cè)序,驗(yàn)證剪切位點(diǎn)突變導(dǎo)致的mRNA改變。2.通過多序列比對(duì)工具尋找DFNA5同家族蛋白質(zhì)保守性序列;用SWISS-MODEL工具預(yù)測(cè)DFNA5蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)并推測(cè)突變型DFNA5蛋白可能的功能。3.采用基因克隆技術(shù)構(gòu)建野生型與突變型...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1程序性細(xì)胞壞死[2]

陰性菌的脂多糖結(jié)合[17]，非經(jīng)典途徑與經(jīng)典途徑只是存在起始C后期引發(fā)細(xì)胞焦亡的過程相似。不論是經(jīng)典途徑的Caspase-1或是Caspase-4/5/11，這些炎性Caspase都能夠劈開共同的底物GSDM死作用的GSDMD-N端，繼而使細(xì)胞膜通透性改變，使....

圖2.1家系圖（HaploPainter軟件繪制）

第2章實(shí)驗(yàn)研究患者79歲，最小患者10歲。第II代2位患者，年齡75-79歲，有殘余聽力。第Ⅲ代9位患者，主訴發(fā)病年齡在30-35歲左右，年輕時(shí)有患過中耳炎（Ⅲ:3，Ⅲ:4，Ⅲ:10），近期檢查未見鼓膜異常。第IV代3位患者，發(fā)病年齡分別....

圖2.2安捷倫外顯子捕獲流程圖

圖2.2安捷倫外顯子捕獲流程圖ina平臺(tái)測(cè)序Illumina平臺(tái)測(cè)序是基于橋式PCR以及熒光可逆終止子的邊合成邊測(cè)測(cè)序反應(yīng)是在flowcell中進(jìn)行，每個(gè)flowcell有八條通道，由于DNA已經(jīng)連接與通道上序列互補(bǔ)的序列，所以文庫(kù)片段會(huì)與通道表面上的單補(bǔ)結(jié)....

圖2.3Illumina平臺(tái)測(cè)序流程圖

圖2.3Illumina平臺(tái)測(cè)序流程圖3.6測(cè)序數(shù)據(jù)處理(1)使用FastQC軟件把Illumina平臺(tái)測(cè)序得到的原始數(shù)據(jù)中低質(zhì)量rea；(2)使用SOAPaligner軟件對(duì)測(cè)序得到reads與參考序列比對(duì)，將比對(duì)eads進(jìn)行后續(xù)SNP注釋....

本文編號(hào)：4005956