發(fā)布時間：2020-11-21 12:30

　　 引言:大鼠束縛浸水應(yīng)激(restraint water-immersion stress,RWIS)模型被廣泛用來研究應(yīng)激性胃粘膜損傷的發(fā)生機制及其臨床治療的篩選等。眾多實驗結(jié)果表明:大鼠RWIS狀態(tài)下胃機能的改變主要是由于支配胃的副交感神經(jīng)活動加強所致。投射在胃中的迷走神經(jīng)副交感神經(jīng)纖維主要來自于迷走背核(DMV),部分來自于疑核(NA)。此外,孤束核(NTS)接受來自于胃的內(nèi)臟感覺信息。迷走背核、孤束核和最后區(qū)這三個核團在解剖學(xué)中位置相鄰,功能相關(guān)性較大,且之間具有密切的纖維聯(lián)系,所以將它們合稱為迷走復(fù)合體(DVC)。 P物質(zhì)(SP)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一種豐富的神經(jīng)肽,它參與多種生理病理過程,這些過程包括應(yīng)激適應(yīng)、情緒焦慮現(xiàn)象等。與之相一致的是,在腦中,NK1作為P物質(zhì)最主要的受體,也在應(yīng)激和情緒焦慮過程中發(fā)揮著作用。很多研究結(jié)果表明,各種應(yīng)激性刺激會改變SP和NK1在腦中的含量。已有研究指出,腦中的SP在應(yīng)激引起的生理和行為活動中發(fā)揮一定作用。在活體大鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)給予SP,會導(dǎo)致大鼠的心血管系統(tǒng)和行為出現(xiàn)與給予應(yīng)激性刺激時相似的變化。當(dāng)機體發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)時,腦中一定區(qū)域的神經(jīng)元開始活動,對這些區(qū)域SP的研究更進一步證實了這一觀點。采用藥物方法或者基因敲除方法阻滯NK1的作用,可以觀察到腦內(nèi)某些參與應(yīng)激反應(yīng)的核團c-Fos(神經(jīng)元興奮的標(biāo)志物)表達量降低。由于SP在迷走復(fù)合體(DVC)中大量存在,所以推測這種遞質(zhì)在調(diào)控胃的運動的過程中發(fā)揮一定作用。但是在RWIS過程中,迷走復(fù)合體中的SP及其受體NK1的表達會發(fā)生何種變化,這個問題到目前為止尚未見文獻報道。所以,本實驗主要針對這一問題進行研究。近期的報道指出,緊張性刺激會導(dǎo)致SP在下丘腦和腦邊緣系統(tǒng)如杏仁核的含量增多,且這種效應(yīng)隨刺激強度的加大而更加顯著。在腦內(nèi),通過增大SP的含量(微量注射SP),可以觀察到動物出現(xiàn)類似于焦慮情緒引起的行為改變�；�于以上研究成果,在本研究中,我們也對下丘腦(主要是室旁核-PVN,腳內(nèi)核-EP,視上核-SON,多巴胺細(xì)胞群-A13和杏仁核(主要是內(nèi)側(cè)杏仁核-MeA)在RWIS過程中的SP、NK1表達狀況進行了研究。 方法:雄性Wistar大鼠隨機分為5組,分別是0 min (即對照組)和30,60,120 ,180 min組進行RWIS,每組10只大鼠。RWIS完畢后,取出大鼠,過量戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉動物,取胃,甲醛固定統(tǒng)計胃潰瘍指數(shù)。取胃后的大鼠迅速進行心臟灌流,固定并脫水腦組織后進行冰凍切片。切片行免疫組化操作:過氧化氫/甲醇阻斷內(nèi)源性酶活性,封閉后入SP或NK1一抗中孵育,然后進行二抗、酶標(biāo)試劑檢測和DAB顯色過程,最后封片顯微照相數(shù)據(jù)統(tǒng)計。以累計光密度(IOD值)和平均累計光密度(AIOD值)作為SP和NK1表達程度的指標(biāo))。 結(jié)果:對照組大鼠延髓和下丘腦多個核團中,SP和NK1都有不同程度的表達。其中,延髓孤束核、迷走背核、最后區(qū)和最后區(qū)周圍區(qū)SP的表達量都比較高,SP陽性部位出現(xiàn)棕色顆粒狀或連續(xù)絲狀現(xiàn)象,而疑核處SP表達量較低。于此相應(yīng)的是,NK1在孤束核和迷走背核處表達量較高,陽性部位可見明顯的陽性細(xì)胞和陽性纖維。給予RWIS不同時間段的應(yīng)激后,各核團中的SP和NK1表達量呈現(xiàn)出規(guī)律性變化,孤束核和迷走背核的變化尤其顯著,IOD值和AIOD值均出現(xiàn)了先降低后恢復(fù)的趨勢。在對照組大鼠下丘腦處,SP在室旁核(PVN)表達量較高,且隨著RWIS應(yīng)激不同時間,變化規(guī)律較為明顯。SP在內(nèi)側(cè)杏仁核、下丘腦背部及附近多巴胺細(xì)胞區(qū)域幾乎沒有表達,但NK1在這三個位置的表達量都較高,且隨著RWIS進行,部分應(yīng)激組與對照組相比有顯著性差異。 結(jié)論:大鼠RWIS過程中,迷走復(fù)合體、下丘腦室旁核SP和NK1受體的表達發(fā)生變化,提示大鼠束縛-浸水應(yīng)激致胃機能紊亂的神經(jīng)機制中,SP神經(jīng)元以及NK1受體起一定作用。
【學(xué)位單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R573.1
【部分圖文】：

盡量減輕實驗大鼠的痛苦、減少所用數(shù)量。1.2 大鼠束縛-浸水應(yīng)激（RWIS）模型的制備與實驗分組圖1-1 大鼠的束縛浸水應(yīng)激性胃粘膜損傷模型用乙醚輕度麻醉，待動物四肢癱軟，肌張力消失后，稱重。然后將大鼠仰臥于木板上，并用膠布將四肢粘貼固定，操作輕柔。待其清醒后，“立位”浸于冷水中，水位與胸骨劍突齊平，水溫控制在20±1℃。按照浸水時間，將大鼠隨機分為1、2、3、4、5五組，RWIS時間分別為0min、30min、60min、120min、180min，其中第一組為對照組。RWIS完畢后，取出大鼠，過量戊巴比妥鈉(100 mg/kg

鼠腦干迷走復(fù)合體處 SP 陽性反應(yīng)。（A）正常大鼠腦干切片中性紅染色，示迷走復(fù)合V,AP）的位置關(guān)系。（B）對照組大鼠腦干迷走復(fù)合體 SP 表達情況。（C）B 圖中綠色果。（D）B 圖中紅色方框區(qū)域的顯微效果。CC：中央水管。

鼠腦干迷走復(fù)合體處 SP 陽性反應(yīng)。（A）正常大鼠腦干切片中性紅染色，示迷走復(fù)合MV,AP）的位置關(guān)系。（B）對照組大鼠腦干迷走復(fù)合體 SP 表達情況。（C）B 圖中綠色果。（D）B 圖中紅色方框區(qū)域的顯微效果。CC：中央水管。
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本文編號：2893001