發(fā)布時(shí)間：2020-11-18 06:26

　　 背景膿毒癥即感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征(Systemic inflammatory response syndrome,SIRS)是現(xiàn)代危重病醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)及難點(diǎn),急性肝損傷是膿毒癥重要并發(fā)癥之一,直接影響其預(yù)后。炎癥細(xì)胞因子風(fēng)暴是膿毒癥急性肝損傷的主要發(fā)病機(jī)制之一。膽堿能抗炎通路(CAP)是膽堿能神經(jīng)及其遞質(zhì)調(diào)節(jié)對(duì)抗全身炎癥反應(yīng)的通路,主要通過(guò)煙堿型乙酰膽堿受體α7亞基(α7nicotinic acetylcholine receptors type,α7n ACh R)調(diào)節(jié)炎性因子的產(chǎn)生,對(duì)多種炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展起重要作用,α7n ACh R正逐漸成為調(diào)節(jié)炎癥因子產(chǎn)生和膽堿能抗炎效應(yīng)藥理學(xué)的靶標(biāo),具有“開(kāi)關(guān)”作用。GTS-21為α7n ACh R特異性激動(dòng)劑,在阿爾茨海默氏病和關(guān)節(jié)炎等許多免疫炎癥性疾病中發(fā)揮抗炎保護(hù)作用。目前α7n ACh R在膿毒癥急性肝損傷的抗炎機(jī)制及GTS-21對(duì)膿毒癥急性肝損傷保護(hù)作用鮮有報(bào)道。目的觀察α7n ACh R及其下游炎癥因子IL-18、IL-1β、HMGB1在LPS誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥急性肝損傷模型中的動(dòng)態(tài)表達(dá),探索α7n ACh R在急性膿毒癥肝損傷的發(fā)病機(jī)制;觀察GTS-21對(duì)小鼠膿毒癥急性肝損傷模型的保護(hù)作用,為膿毒癥性肝損傷提供新的治療依據(jù)。方法實(shí)驗(yàn)一α7n ACh R在LPS誘導(dǎo)的膿毒癥急性肝損傷的發(fā)病機(jī)制研究60只雄性C57BL/6小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組(n=10);急性肝損傷模型組(LPS 30mg/kg,n=50),急性肝損傷模型組又分為模型組1h、3h、6h、12h、24h五個(gè)亞組,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,采用LPS30mg/kg腹腔注射造模,造模后1h、3h、6h、12h、24h各點(diǎn)處死存活小鼠;正常對(duì)照組腹腔注射等體積LPS助溶劑(生理鹽水),1小時(shí)后處死小鼠。每組選取8個(gè)樣本,檢測(cè)正常對(duì)照組及小鼠肝臟HE染色的病理變化、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平,采用酶聯(lián)免疫ELISA法檢測(cè)肝臟組織IL-18、IL-1β、HMGB1水平,采用Real-Time PCR檢測(cè)肝組織α7n ACh R表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)二GTS-21靶向干預(yù)對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥急性肝損傷的保護(hù)作用(1)40只雄性C57BL/6小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組(n=10);空白對(duì)照組(GTS-21 3mg/kg,n=10);模型組(LPS 30mg/kg,n=10);GTS-21干預(yù)組(LPS 30mg/kg+GTS-21 3mg/kg,n=10),適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,模型組采用LPS 30mg/kg腹腔注射造模,正常對(duì)照組予等體積LPS助溶劑(生理鹽水)腹腔注射,空白對(duì)照組采用GTS-213mg/kg腹腔注射,不注射LPS,干預(yù)組于造模前(LPS 30mg/kg)30min腹腔注射GTS-21 3mg/kg。于造模后6h處死各組小鼠(各組均無(wú)小鼠死亡),每組選取8個(gè)樣本,檢測(cè)各組小鼠肝臟HE染色的病理變化情況、血清ALT、AST水平,肝臟組織IL-18、IL-1β、HMGB含量及α7n ACh R表達(dá)水平。(2)30只雄性C57BL/6小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為模型組(n=15)、干預(yù)組(n=15),適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,模型組采用LPS 30mg/kg腹腔注射造模,干預(yù)組于造模前(LPS 30mg/kg)30min腹腔注射GTS-213mg/kg。觀察48h內(nèi)各組小鼠的癥狀和生存情況,清點(diǎn)各時(shí)點(diǎn)小鼠的存活數(shù),繪制生存曲線,進(jìn)行生存分析。結(jié)果實(shí)驗(yàn)一α7n ACh R在LPS誘導(dǎo)的膿毒癥急性肝損傷的發(fā)病機(jī)制研究(1)與正常對(duì)照組比較,光鏡下模型組各亞組小鼠肝組織均有不同程度病變,其中模型組6h病變最顯著,正常對(duì)照組肝臟病理指數(shù)為0,模型組6h為0.57,與其他亞組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)與正常對(duì)照組比較,模型組中各亞組小鼠血清AST、ALT水平均增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中模型組6小時(shí)AST(378.37±59.27 vs 170.00±55.88 P=0.011),ALT(132.58±45.53 vs 56.93±10.92 P=0.002)升高最顯著,相比于模型組其他亞組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)與正常對(duì)照組比較,模型組中各亞組肝組織IL-18、HMGB1、IL-1β水平均增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中IL-18(393.83±60.18 vs 86.87±10.12)、IL-1β(3988.92±253.25 vs 1148.15±66.00)在造模后6h升高最顯著,與其他模型組亞組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而HMGB1(21.30±2.11 vs 4.99±1.07)則在造模后12h升高最顯著,相較于模型組其他亞組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)與正常對(duì)照組比較,隨著造模時(shí)間的增加,模型組各亞組小鼠肝組織α7n ACh R表達(dá)呈逐漸降低趨勢(shì),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)驗(yàn)二GTS-21靶向干預(yù)對(duì)LPS誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥急性肝損傷的保護(hù)作用(1)與正常對(duì)照組比較,光鏡下模型組肝組織可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及細(xì)胞壞死,病理改變顯著;與模型組比較,干預(yù)組肝組織病理變化明顯改善,正常對(duì)照組肝臟病理指數(shù)為0,干預(yù)組較模型組為(0.21±0.16 vs 0.57±0.00),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)與正常對(duì)照組比較,模型組AST(378.37±59.27 vs 170.00±55.88P=0.011),ALT(132.58±45.53 vs 56.93±10.92 P=0.002)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組相比,干預(yù)組小鼠血清AST(222.51±72.17 VS 378.37±59.27 P=0.011)、ALT(61.12±19.25 VS 132.58±45.53 P=0.011)明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)與正常對(duì)照組比較,模型組肝組織IL-18、HMGB1、IL-1β水平均升高,IL-18(393.83±60.18 vs 86.87±10.12)、HMGB1(13.22±1.88 vs 4.99±1.07)、IL-1β(3988.92±253.25 vs 1148.15±66.00),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與模型組相比,干預(yù)組肝組織IL-18(132.05±22.23 VS 393.83±60.18 P=0.02)、IL-1β(1625.08±120.38 VS 3988.92±253.25 P=0.011)、HMGB1(7.73±1.75 VS 21.30±2.11 P=0.022)水平明顯下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)與正常對(duì)照組比較,模型組小鼠肝組織α7n ACh R表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而干預(yù)組肝組織α7n ACh R表達(dá)較模型組明顯升高(2.11±0.26 VS 1.11±0.11),差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。(5)模型組小鼠生存率為53.3%,干預(yù)組為93.3%,干預(yù)后小鼠生存率明顯改善,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.01)。結(jié)論(1)α7n ACh R在小鼠膿毒癥急性肝損傷模型發(fā)病機(jī)制中起重要作用,主要與調(diào)節(jié)下游炎癥因子產(chǎn)生有關(guān)。(2)GTS-21對(duì)小鼠膿毒癥急性肝損傷模型具有保護(hù)作用,主要與調(diào)節(jié)α7n ACh R表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類(lèi)】：R459.7;R575
【文章目錄】：
主要英文縮略詞索引
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀
    1.2 研究?jī)?nèi)容及意義
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    實(shí)驗(yàn)一
    實(shí)驗(yàn)二
第4章 討論
    4.1 膿毒癥急性肝損傷實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?br>    4.2 炎癥反應(yīng)在膿毒癥急性肝損傷的動(dòng)態(tài)變化及影響
    4.3 α7nAChR在膿毒癥肝損傷的動(dòng)態(tài)表達(dá)及機(jī)制作用
    4.4 GTS-21在膿毒癥急性肝損傷的保護(hù)作用及抗炎機(jī)制
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 膽堿能抗炎通路與膿毒癥發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
碩士期間主持/參與的科研項(xiàng)目
碩士期間發(fā)表文章
學(xué)術(shù)交流
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2888416