研究背景和意義:視網(wǎng)膜血管發(fā)育初期,星形膠質(zhì)細(xì)胞為內(nèi)皮細(xì)胞搭建生長的骨架結(jié)構(gòu),供其莖細(xì)胞增殖攀附、尖端細(xì)胞良好出芽。而內(nèi)皮細(xì)胞同樣也可分泌重要因子調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞的成熟發(fā)育,這對于其結(jié)構(gòu)形成的穩(wěn)定性至關(guān)重要。這兩者之間獨(dú)特的相互影響相互制約關(guān)系,被稱為視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮-神經(jīng)膠質(zhì)單元,其穩(wěn)定發(fā)展是整個視網(wǎng)膜網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)發(fā)育的重要環(huán)節(jié)。Yes相關(guān)蛋白(YAP)作為HIPPO通路下游重要的核轉(zhuǎn)錄因子,已被證實(shí)是早期視網(wǎng)膜血管發(fā)育的重要調(diào)控因子,內(nèi)皮細(xì)胞特異性YAP缺失將造成血管發(fā)育的停滯。除此之外,本課題早期研究表明,內(nèi)皮細(xì)胞特異性YAP缺失不僅造成內(nèi)皮細(xì)胞本身發(fā)育的減緩,還影響了星形膠質(zhì)細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)的發(fā)育,導(dǎo)致星形膠質(zhì)細(xì)胞的成熟化降低等。由于白血病抑制因子及其受體(LIF-LIFR)在內(nèi)皮細(xì)胞-神經(jīng)膠質(zhì)單元中的重要作用,即內(nèi)皮細(xì)胞分泌LIF作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞的LIFR后,影響星形膠質(zhì)細(xì)胞的成熟分化過程,但其具體機(jī)制尚不清楚。所以我們認(rèn)為,YAP可能在這一過程中發(fā)揮了重要作用。本課題組希望通過觀察內(nèi)皮細(xì)胞YAP敲除后星形膠質(zhì)細(xì)胞成熟化發(fā)育受損這一現(xiàn)象,揭示YAP通過影響內(nèi)皮細(xì)胞LIF分泌調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞...

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1 視網(wǎng)膜發(fā)育各階段內(nèi)皮細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞相互伴行生長

取WildType(WT)小鼠的3天,7天,14天,21天眼球,做視網(wǎng)膜鋪片免疫熒光染色和冰凍切片免疫熒光染色,小鼠均為未進(jìn)行任何處理。血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性染料IB4與成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)記物GFAP顯示,小鼠發(fā)育早期3天、7天均有表達(dá),且血管內(nèi)皮與星形膠質(zhì)細(xì)胞共同定位于視網(wǎng)....

圖2 視網(wǎng)膜發(fā)育各階段內(nèi)皮細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞相互伴行生長

根據(jù)上面的研究發(fā)現(xiàn),星形膠質(zhì)細(xì)胞和血管伴行調(diào)節(jié)視網(wǎng)膜的發(fā)育。取E16,P0,P3,P7,P14,P21小鼠視網(wǎng)膜組織,通過Westernblot方法,檢測血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1（PECAM-1/CD31）和膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）的表達(dá),并發(fā)現(xiàn)其表達(dá)含量逐漸增加（如圖2....

圖3 內(nèi)皮細(xì)胞特異性YAP敲除鼠(Tek-Cre;YAPf/w和Tek-Cre;YAPf/f)明顯抑制早期血管和星形膠質(zhì)細(xì)胞的生長發(fā)育

由于YAP在視網(wǎng)膜血管畸形中起著重要的作用,課題同時研究了發(fā)育中內(nèi)皮細(xì)胞YAP的缺失對血管和星形細(xì)胞早期發(fā)育的影響。P3和P7的全視網(wǎng)膜免疫熒光染色顯示,相較于WT小鼠(YAPf/f)而言,YAP敲除鼠雜合(Tek-cre;YAPf/w)和YAP敲除鼠純合(Tek-cre;YAP....

圖4 內(nèi)皮細(xì)胞特異性YAP敲除鼠(Tek-Cre;YAPf/w和Tek-Cre;YAPf/f)明顯抑制中晚期血管的深層生長發(fā)育

由于血管在P7時到達(dá)視網(wǎng)膜邊緣之后,通過不斷的尖端細(xì)胞出芽,莖細(xì)胞增殖等逐漸向下延伸,我們稱之為深層血管從發(fā)育。研究通過激光共聚焦層掃功能,對發(fā)育后期小鼠血管進(jìn)行層掃,實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞YAP在血管發(fā)育中晚期也同樣扮演了重要角色。相較于WT鼠而言,內(nèi)皮細(xì)胞YAP敲除后的雜合和純合小....

本文編號：4050806