目的:探討PKCβ/p66Shc通路在氰酸鹽誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）氧化應(yīng)激損傷和功能障礙中的作用及機制。方法:培養(yǎng)HUVECs,于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài),選用CCK-8法檢測氰酸鹽對HUVECs活力的影響;DCFH-DA法檢測細(xì)胞內(nèi)ROS含量;比色法檢測NO、MDA含量和CAT、GSH-Px、SOD酶活性;IF法觀察細(xì)胞內(nèi)p-p66Shc、p-PKCβ、eNOS和ICAM-1的表達(dá);Western blot檢測細(xì)胞中p66Shc、p-p66Shc、PKCβ、p-PKCβ、ICAM-1和eNOS的蛋白水平。結(jié)果:濃度為1 mM的氰酸鹽對HUVECs活力具有明顯的抑制作用。與對照組和甘露醇組相比,氰酸鹽組細(xì)胞內(nèi)ROS含量明顯升高。氰酸鹽誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞中NO含量減少,CAT、GSH-Px、SOD酶活性降低,MDA含量增加。氰酸鹽引起內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)p66Shc、p-p66Shc、PKCβ、p-PKCβ和ICAM-1蛋白水平明顯上調(diào);而eNOS水平下調(diào)。PKCβ抑制劑LY333531預(yù)處理后,細(xì)胞中ROS含... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

氰酸鹽對HUVECs活力的影響

圖 1 氰酸鹽對 HUVECs 活力的影響Fig.1 Effects of Cyanate on HUVECs viability注：n=3，*P<0.05，**P<0.01，與對照組相比較。誘導(dǎo) HUVECs 形態(tài)的改變CK-8 結(jié)果提示，選取觀察對照組和 1 mM 氰酸鹽作用 2。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，氰酸鹽組較對照組細(xì)胞間隙增大、排列紊鑲嵌排列結(jié)構(gòu)。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文2.3 氰酸鹽誘導(dǎo) HUVECs 產(chǎn)生 ROS選用熒光探針 DCFH-DA 對細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的 ROS 進行檢測，為了排除滲透壓對細(xì)胞造成的影響，選用 1 mM 甘露醇作為陰性對照組，與氰酸鹽作用內(nèi)皮細(xì)胞相同時間（24 h）。結(jié)果顯示，在對照組和甘露醇組中由 ROS 氧化 DCFH 生成的有綠色熒光的 DCF 量少，熒光微弱，無顯著差異；氰酸鹽組的綠色熒光較對照組和甘露醇組明顯增強（P<0.05）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PKCβ/p66Shc介導(dǎo)高尿素引起的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ROS的產(chǎn)生[J]. 何菲,樊春華,郭珮,王弘凱,周宏宇,陳益,李晉芳,冉建華.  中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志. 2016(05)
[2]Antioxidants,inflammation and cardiovascular disease[J]. Harald Mangge,Kathrin Becker,Dietmar Fuchs,Johanna M Gostner.  World Journal of Cardiology. 2014(06)



本文編號：3009991