發(fā)布時間：2021-01-18 08:11

　　目的:探討過氧化物酶體增殖物活化受體γ（PPARγ）激動劑吡格列酮（PIO）對高磷誘導(dǎo)大鼠血管平滑肌細胞（VSMC）鈣化的作用及其相關(guān)機制。方法:利用10 mmol/Lβ甘油磷酸（β-GP）誘導(dǎo)大鼠VSMC鈣化,建立鈣化模型（即鈣化組）;同時以完全培養(yǎng)基培養(yǎng)大鼠VSMC為正常對照組,并分別以不同濃度（5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L、20μmol/L）PIO干預(yù),觀察培養(yǎng)12d,用茜素紅染色法檢測細胞鈣沉積并檢測細胞外基質(zhì)鈣離子濃度來觀察VSMC鈣化程度。Western Blot檢測大鼠VSMC的α平滑肌動蛋白（α-SMA）、Runx2、BMP2、Wnt/β-catenin通路相關(guān)蛋白（β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β）及核蛋白cyclin-D1的表達情況。選擇合適的PIO濃度（20μmol/L）并以PPARγ拮抗劑GW9662（20μmol/L）干預(yù),觀察以上指標的變化。結(jié)果:（1）鈣化組鈣離子濃度較正常對照組明顯增高（P<0.05）,而不同濃度PIO均可減輕VSMC細胞外基質(zhì)的鈣離子濃度（P<0.05）,同時鈣化組茜素紅染色較正常對照... 

【文章來源】：腎臟病與透析腎移植雜志. 2016,25(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

各組茜素紅染色結(jié)果

圖2各組細胞外基質(zhì)鈣鹽含量的情況(分光光度法)PIO:吡格列酮;control:空白對照組;HP:鈣化組;control+PIO:空白對照+20μmol/LPIO組;HP+PIO:鈣化+20μmol/LPIO組;HP+PIO+GW9662:鈣化+20μmol/LPIO+20μmol/LGW9662組;*與空白對照組相比，P＜0.01;＊＊與鈣化組比較，P＜0.01;#與HP+PIO組相比，P＜0.01圖3不同濃度的吡格列酮對大鼠VSMCα-SMA、BMP-2、Ｒunx2及β-catenin蛋白表達的影響(WesternBlot)PIO:吡格列酮;VSMC:血管平滑肌細胞;A:空白對照組;B:鈣化組;C:鈣化組+5μmol/LPIO;D:鈣化組+10μmol/LPIO;E:鈣化組+15μmol/LPIO;F:鈣化組+20μmol/LPIO;*:與空白對照組相比，P＜0.05;＊＊:與鈣化組比較，P＜0.01PIO對大鼠VSMC核內(nèi)蛋白cyclin-D1的影響cyclin-D1是Wnt/β-catenin通路的下游靶蛋白。β-actin是細胞骨架微絲蛋白的主要成分，主要在胞漿質(zhì)中表達，胞核也有較少表達。與空白對照組比較，鈣化組核蛋白cyclin-D1表達顯著增高;與鈣化組比較，20μmol/LPIO處理組核蛋白cyclin-D1表達降低(圖4)。腎臟病與透析腎移植雜志第25卷第4期2016年08月·343·

果計量資料數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差表示，組間差異用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01為統(tǒng)計學(xué)差異顯著。結(jié)果各組鈣化情況茜素紅染色結(jié)果顯示，空白對照組細胞基質(zhì)未著色，細胞呈褐色，可見細胞基質(zhì)鈣鹽沉積染色不明顯;鈣化組細胞外基質(zhì)呈暗紅色，可見明顯鈣化結(jié)節(jié)，細胞仍為褐色，細胞外基質(zhì)鈣鹽沉積染色陽性。與鈣化組相比，鈣化+5μmol/LPIO組及鈣化+10μmol/LPIO組細胞外基質(zhì)中有鈣鹽沉積，其程度較鈣化組輕;鈣化組+15μmol/LPIO及鈣化組+20μmol/LPIO細胞外基質(zhì)鈣鹽幾乎無沉積，未見著色(圖1)。四種不同濃度的PIO均可顯著降低大鼠VSMC細胞外基質(zhì)鈣鹽沉積染色，且DMSO對VSMC的鈣化無明顯影響。圖1各組茜素紅染色結(jié)果PIO:吡格列酮;VSMC:血管平滑肌細胞;DMSO:二甲基亞砜;A:空白對照組;B:空白對照組+25mg/mlDMSO;C:鈣化組;D:鈣化組+25mg/mlDMSO;E:鈣化組+5μmol/LPIO;F:鈣化組+10μmol/LPIO;G:鈣化組+15μmol/LPIO;H:鈣化組+20μmol/LPIO大鼠VSMC培養(yǎng)12d后，細胞外基質(zhì)鈣鹽含量鈣化組(1.751±0.036mmol/g)較空白對照組(1.321±0.196mmol/g)增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。分別以5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L和20μmol/LPIO干預(yù)12d后，細胞外基質(zhì)鈣鹽含量顯著低于鈣化組。四種不同濃度的PIO均可顯著降低大鼠VSMC外基質(zhì)鈣鹽含量(P＜0.01)(圖2A)。不同濃度PIO對α-SMA、BMP2、Ｒunx2及β-catenin蛋白表達的影響與空白對照組相比，鈣化組細胞α-SMA表達量明顯降低［(2.33±0.42)vs(0.96±0.44)，P＜0.01］。與鈣化組相比，20μmol/LPIO干預(yù)組細胞α-SMA表達量(2.34±0.62)顯著增高(P＜0.01)。鈣化組BMP2、Ｒunx2及β-catenin蛋白的相對表達量，分別為(1.12±0.01)、(1.05±0.06)和(3.31±0.82)，顯著


本文編號：2984605