發(fā)布時間：2021-01-17 01:25

　　[研究目的]探索IgGFc區(qū)域Asn297位點糖基化異常引發(fā)免疫性睪丸炎的分子機制,以及曲細精管中白細胞產(chǎn)生過多的ROS抑制抗氧化劑,損傷精原細胞DNA和精子質(zhì)膜的機制。[研究方法]本研究收集127例免疫性睪丸炎患者的血清樣本,單分子實時（Single-molecule real-time,SMRT）環(huán)狀一致測序（Circular consensus sequencing,CCS）用于 IgG 的Fc區(qū)域Asn297位點蛋白結(jié)構(gòu)序列數(shù)據(jù)分析,求出蛋白質(zhì)片段的氨基酸出現(xiàn)頻率的香農(nóng)熵值,獲得突變位點,Sanger測序驗證Asn297基因突變位點的正確性。熒光酶標儀檢測精液ROS的含量,并結(jié)合生化檢查、組織病理和免疫組化檢查結(jié)果,綜合分析并闡述免疫性睪丸炎的發(fā)病機制。[研究結(jié)果]患者血清IgG濃度為2231.4±291.5mg/dl,高于正常范圍80～1400mg/dl,而38例對照組為386.3±182.6mg/dl�；颊哐�清50%溶血單位補體（CH50）濃度為128.32±61.51 U/ml,顯著高于正常值（23～46 U/ml）,而對照組相應濃度為31.43±8.37 U/ml�；颊�... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖－１濕轉(zhuǎn)“三明治”裝配示意圖??ＤｔＳ？°＇?？??酶＿???

檢驗顯示試驗組與對照組的平均值比較，差異有統(tǒng)計學意義（ｐ＜０．０５）。免疫組織??化學染色顯示大量的ＩｇＧ＋淋巴漿細胞浸潤在睪丸、附睪和鞘膜組織內(nèi)。典型病例的??病理組織和免疫組化染色結(jié)果如圖２所示。??Ｈ嗎?—??＇?＇４??酬二：??；；？??圖２．睪丸組織典型的病理表現(xiàn)??ａ．鞘膜組織內(nèi)免疫復合物沉積和大量淋巴漿細胞浸潤。小血管壁增厚，血管腔內(nèi)有??大量中性粒細胞。??ｂ．睪丸組織間質(zhì)內(nèi)細胞成分增多，密集的淋巴漿細胞浸潤（白箭頭示）和細紋狀纖??維化，ＨＥ染色，４００倍；??３０??

我們進行了?ＩｇＧＶＨ?Ｆｃ區(qū)域第６號外顯子（３００４５０?ｂｐ）?Ｐ?ＣＲ靶向擴增的ｃＤＮＡ??文庫，利用ＩｇＧ的Ｆｃ區(qū)域特異性引物３瑞（５ＬＣＣＣＴＣＣＴＣＴＴＴＧＴＧＣＴＳＴＣＡ－３０，??分析ＰＣＲ產(chǎn)物的Ｓａｎｇｅｒ測序（圖４）。發(fā)現(xiàn)９６例患者存在Ａｓｎ２９７位點的確切突變。??有３６例患者在Ａｓｎ２９７位點（ＣＡＣ）突變?yōu)椋ǎ粒粒茫�。第６號外顯子８９１密碼子的??突變是Ａ到Ｃ的替換，這導致了這種氨基酸從天冬酰胺轉(zhuǎn)化為其他的氨基酸。３１??例患者第６號外顯子的８９２密碼子存在病理性突變，即天冬酰胺（ＡＡＣ）轉(zhuǎn)變?yōu)榻z??氨酸（ＡＧＣ）。２９例ＩｇＧ基因插入或刪除的移碼突變。３１例沒有證據(jù)表明在Ａｓｎ２９７??基因突變，他們可能有其他位點基因突變，尚未檢出。與此相反，對３８名健康男??性的ＩｇＧ基因沒有檢測到突變。根據(jù)ＧｅｎＢａｎｋ中公開發(fā)表的結(jié)果，Ａｓｎ２９７位點的??天冬酰胺突變發(fā)生在健康人中是非常低的。??Ａ?Ｂ??Ｎ＿ａｌ?—ａｌ／＼Ａ?八―—＇／Ｖ’ａａＡ??ｃｃａｇａａＥｃａｇｔｇ?ｃ?ｃＩｇ＂＂?ｃ?ｃ＂?ｇｔｇ??８９１ａ＞〇ａＡ＾ａ＾ｍｉ?—贏Ａ?ｈ必??■?？■■■■?＿■?■■■■■??ＣＣＡＧＣｋＣＣＡＧＴＧ?Ｃ?Ｃ?ｋ?Ｇ?Ａ?Ｇ?Ｃ?Ｃ?Ａ?Ｇ?Ｔ?Ｇ??圖４．?ＩｇＧ基因序列Ａｓｎ２９７突變。（Ａ）測序結(jié)果表明，在基因第６號外顯子８９１位??密碼子Ａ突變?yōu)椋?


本文編號：2981918