發(fā)布時(shí)間：2020-12-05 20:36

　　研究目的硫酸軟骨素（chondroitin sulfate, CS）是一類硫酸化的糖胺聚糖,存在于細(xì)胞表面和哺乳動(dòng)物的細(xì)胞外基質(zhì)中,主要分布于軟骨、骨、肌腱、神經(jīng)組織和血管壁中。CS的基本結(jié)構(gòu)是由D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖以1,3糖苷鍵連接形成的二糖,二糖之間以β-1,4糖苷鍵連接而成。CS具有抗炎、免疫調(diào)節(jié)、心腦血管保護(hù)、神經(jīng)保護(hù)、抗氧化、細(xì)胞黏附調(diào)節(jié)等多種藥理生理學(xué)活性與功能,且長(zhǎng)期服用毒副作用小或無毒副作用。在歐洲、美國(guó)、東南亞、澳大利亞等國(guó)家,CS主要作為膳食補(bǔ)充劑或藥品,用于心腦血管疾病、骨關(guān)節(jié)炎等疾病的預(yù)防與治療。但是,由于其分子量大、親水基團(tuán)多、脂溶性差,體內(nèi)吸收不完全,口服生物利用度低；在CS治療心腦血管疾病的研究中,其降脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化（AS）的療效和量效關(guān)系以及其抑制斑塊性的分子機(jī)制都尚不明確。為了解決這些問題,本研究擬對(duì)CS結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾改造,采用降低分子量、增加親脂基團(tuán)、構(gòu)建兩親性納米粒子等方法來改善其口服吸收效果,然后通過整體動(dòng)物法篩選出腸道吸收效果好的CS衍生物,并采用Caco-2細(xì)胞模型對(duì)其促腸道吸收作用機(jī)制進(jìn)行探討；構(gòu)建ApoE-/-小鼠AS... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：160 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
第一章 前言
    1. 硫酸軟骨素概述
        1.1 CS在治療炎癥疾病方面的研究應(yīng)用
        1.2 CS在抗氧化方面的應(yīng)用
        1.3 CS在免疫調(diào)節(jié)方面的研究應(yīng)用
        1.4 CS在治療心腦血管疾病方面的研究應(yīng)用
    2. 硫酸軟骨素存在的問題及改進(jìn)方法
        2.1 多糖類藥物口服給藥運(yùn)載體系的構(gòu)建
        2.2 多糖類藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)改造
    3. 兩親性多糖口服給藥系統(tǒng)的研究現(xiàn)狀
    4 課題的提出和研究思路
第二章 兩親性α-亞麻酸-低分子量硫酸軟骨素的合成及性能表征
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 試劑與材料
        1.2 儀器設(shè)備
        1.3 細(xì)胞
        1.4 溶液配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 α-LNA-LMCS的制備
        2.2 α-LNA-LMCS納米膠束的制備
        2.3 紅外光譜（FT-IR）表征
1HNMR）">        2.4 核磁共振氫譜表征（¹HNMR）
        2.5 熱分析表征（TGA/DSC）
        2.6 粒徑分布和Zeta電勢(shì)測(cè)定
        2.7 α-LNA-LMCS納米膠束表面形態(tài)觀察
        2.8 臨界聚集濃度的測(cè)定
        2.9 納米膠束的Caco-2細(xì)胞及HT29細(xì)胞毒性試驗(yàn)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 CS的純化
        3.2 α-LNA-LMCS的制備
        3.3 α-LNA取代度（DS）的測(cè)定
        3.4 熱差-熱重分析（TGA/DSC）
        3.5 α-LNA-LMCS膠束的粒徑和Zeta電位
        3.6 α-LNA-LMCS膠束的形態(tài)觀察
        3.7 α-LNA-LMCS膠束的臨界膠束濃度（CMC）
        3.8 CS及其衍生物的Caco-2細(xì)胞及HT29細(xì)胞毒性試驗(yàn)
    4 討論
    5 結(jié)論
第三章 大鼠血漿中硫酸軟骨素含量測(cè)定方法的建立
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 試劑與材料
        1.2 儀器設(shè)備
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 溶液配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        2.2 DMMB法測(cè)定血漿中CS的含量
        2.3 精密度實(shí)驗(yàn)
        2.4 回收率實(shí)驗(yàn)
        2.5 提取回收率實(shí)驗(yàn)
        2.6 LMCS及α-LNA-LMCS提取回收率實(shí)驗(yàn)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        3.2 精密度
        3.3 回收率
        3.4 提取回收率
        3.5 LMCS及α-LNA-LMCS的提取回收率
    4 討論
    5 結(jié)論
第四章 α-LNA-LMCS腸道吸收效果及作用機(jī)制研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 試劑與材料
        1.2 儀器設(shè)備
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞
        1.4 溶液配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 CS及其衍生物的大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究
        2.2 CS及其衍生物在Caco-2細(xì)胞模型上的攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)及其機(jī)制探討
        2.3 CS及其衍生物對(duì)Caco-2單層細(xì)胞膜電阻的影響
        2.4 α-LNA-LMCS跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 CS及其衍生物的大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究
        3.2 CS及其衍生物的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)
        3.3 CS及其衍生物對(duì)Caco-2細(xì)胞模型跨膜電阻TEER的影響
        3.4 α-LNA-LMCS跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究
    4 討論
    5 結(jié)論
-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的實(shí)驗(yàn)研究">第五章 LNA-LMCS2抑制ApoE^-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的實(shí)驗(yàn)研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 試劑與材料
        1.2 儀器設(shè)備
        1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.4 溶液配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)、分組以及標(biāo)本的留取
        2.2 血脂水平的檢測(cè)
        2.3 ELISA法測(cè)定血漿中TNF-α、CRP、IL-6水平
        2.4 real-time PCR步驟
        2.5 主動(dòng)脈表面AS病變大體油紅O染色
        2.6 主動(dòng)脈根部AS病灶分析
-/-小鼠主動(dòng)脈ERK1/2、p-ERK1/2、t-JNK、p-JNK、NF-κB、p-NF-κB、VCAM-1、MCP-1和ICAM-1的表達(dá)">        2.7 Western blot測(cè)定ApoE^-/-小鼠主動(dòng)脈ERK1/2、p-ERK1/2、t-JNK、p-JNK、NF-κB、p-NF-κB、VCAM-1、MCP-1和ICAM-1的表達(dá)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 體重及血液生化指標(biāo)檢測(cè)
        3.3 AS病變嚴(yán)重程度分析
        3.4 熒光定量PCR技術(shù)分析各組小鼠主動(dòng)脈炎性因子mRNA的表達(dá)變化
        3.5 Western blot法分析各組小鼠主動(dòng)脈炎癥相關(guān)蛋白表達(dá)的變化
    4 討論
    5 結(jié)論
總結(jié)與展望
    1. 全文總結(jié)
    2. 創(chuàng)新點(diǎn)
    3. 論文的不足之處
    4. 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
博士期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]鯊魚硫酸軟骨素及其多硫酸化衍生物抗炎和抗腫瘤活性的研究[D]. 林洪.山東大學(xué) 2006



本文編號(hào)：2900053