發(fā)布時(shí)間：2020-11-18 10:47

　　 深靜脈血栓形成(deep venous thrombosis,DVT)是指血液在靜脈內(nèi)發(fā)生不正常凝結(jié),完全或不完全阻塞血管,屬于靜脈回流障礙性疾病。DVT發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,涉及凝血/抗凝系統(tǒng)、靜脈內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、白細(xì)胞等多系統(tǒng)多因子的參與。近年研究認(rèn)為,氧化應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生的活性氧(Reactive oxygen species,ROS)可導(dǎo)致血管靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷甚至凋亡,進(jìn)而促進(jìn)DVT的形成。研究發(fā)現(xiàn),Nrf2/HO-1信號(hào)通路具有強(qiáng)烈的抗氧化作用,可保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞免受或減輕氧化損傷,該通路被認(rèn)為是目前抗氧化作用最強(qiáng)的通路。然而,該信號(hào)通路在DVT的形成過(guò)程中是否起作用尚未見(jiàn)報(bào)到。因此,本課題主要探討:Nrf2/HO-1信號(hào)通路在小鼠DVT形成中的作用。①下腔靜脈狹窄法構(gòu)建C57小鼠DVT模型,觀察Nrf2激動(dòng)劑和HO-1抑制劑對(duì)小鼠成栓的影響;②檢測(cè)各組C57小鼠靜脈壁組織中Nrf2及HO-1基因的mRNA表達(dá)變化。旨在為找到防治DVT形成的關(guān)鍵靶點(diǎn)提供新的理論依據(jù)。[目的]1.采用小動(dòng)物麻醉機(jī)吸入麻醉(異氟烷)以及下腔靜脈狹窄法構(gòu)建C57小鼠DVT模型;利用Nrf2的激動(dòng)劑(TBHQ)及HO-1抑制劑(SnPP)干預(yù)C57小鼠DVT模型,造模后24小時(shí)觀察各組小鼠DVT模型的死亡率、成栓率,下腔靜脈血栓長(zhǎng)度、濕重的變化差異。探究Nrf2/HO-1信號(hào)通路與DVT形成的關(guān)系。2.獲取各組C57小鼠下腔靜脈壁組織,并采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time-PCR)檢測(cè)各組C57小鼠靜脈壁組織中Nrf2和HO-1基因的mRNA表達(dá)變化,探尋Nrf2/HO-1信號(hào)通路在DVT形成中的作用。[材料與方法]第一部分:下腔靜脈狹窄法構(gòu)建C57小鼠DVT模型觀察Nrf2激動(dòng)劑和HO-1抑制劑對(duì)小鼠成栓的影響1.實(shí)驗(yàn)分組及DVT模型的構(gòu)建:C57小鼠90只,體重25-30g,雌性。按隨機(jī)分組原則分為空白對(duì)照組10只(A組,n=10),DVT模型組20只(B組,n=20),Nrf2 激動(dòng)劑(TBHQ)DVT 模型組(C 組,n=20),Nrf2 激動(dòng)劑(TBHQ)、HO-1 抑制劑(SnPP)DVT 模型組(D 組,n=20),HO-1 抑制劑(SnPP)DVT 模型組(E組,n=20)。在實(shí)驗(yàn)造模前3天,C組小鼠每8小時(shí)腹腔注射TBHQ(16.7mg/kg)Y一次,共注射3天;D組小鼠在C組小鼠給藥的基礎(chǔ)上于造模前一天給予SnPP(5mg/kg),共注射一次;E組小鼠在造模前一天給予SnPP(5mg/kg),共注射一次;B、C、D、E四組小鼠均采用異氟烷吸入麻醉配合下腔靜脈狹窄法構(gòu)建DVT模型。2.取材及檢測(cè):實(shí)驗(yàn)造模24小時(shí)后,選擇頸椎脫臼法處死實(shí)驗(yàn)小鼠,獲取C57小鼠下腔靜脈組織(從結(jié)扎部位至髂總靜脈連接處取下腔靜脈及其內(nèi)容物),然后分離其靜脈壁及其內(nèi)的血栓,測(cè)量各小鼠血栓長(zhǎng)度、濕重后分裝-80°保存?zhèn)溆谩?.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:對(duì)每組小鼠的死亡率、成栓率、血栓長(zhǎng)度和濕重情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件采用SPSS19.0,計(jì)量資料選用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x ± s);組間兩兩比較均利用單因素方差分析、用最小二乘法(LSD法),*p0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。第二部分:各組C57小鼠靜脈壁組織中Nrf2及HO-1的mRNA表達(dá)變化1.Trizol法提取每組小鼠剩余標(biāo)本下腔靜脈組織中總RNA,逆轉(zhuǎn)錄PCR法(RT-PCR法)將各組小鼠靜脈組織RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA;以GAPDH為內(nèi)參照,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)各組小鼠靜脈壁中Nrf2和HO-1的mRNA表達(dá)變化;2.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件選擇SPSS19.0。計(jì)量資料選擇均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x± s);組間兩兩比較采用單因素方差分析,LSD(最小二乘法),*p0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。[結(jié)果]實(shí)驗(yàn)一:下腔靜脈狹窄法構(gòu)建C57小鼠DVT模型觀察Nrf2激動(dòng)劑和HO-1抑制劑對(duì)小鼠成栓的影響1.麻醉效果:實(shí)驗(yàn)開(kāi)始使用4%濃度異氟烷進(jìn)行快速誘導(dǎo),術(shù)中使用1.0%濃度異氟烷維持,麻醉效果理想。術(shù)后麻醉清醒時(shí)間較快,約2min,麻醉過(guò)程中個(gè)別小鼠會(huì)出現(xiàn)呼吸抑制,在關(guān)閉麻醉并加大空氣流量后,其呼吸抑制情況得到迅速緩解。2.各組小鼠死亡情況:A、B、C組小鼠死亡率為0%,D、E組小鼠死亡率分別是10%、5%,B組與A、C組之間統(tǒng)計(jì)分析(*p0.05),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.各組小鼠成栓率:A組小鼠成栓率為0%,B、C、D、E組總成栓率分別為68.4%、55.6%、63.2%、70%,C組與B、D組之間做統(tǒng)計(jì)分析(單因素方差分析)(*p0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.各組小鼠血栓長(zhǎng)度:A組小鼠未成栓,B、C、D、E模型組血栓長(zhǎng)度分別為:5.47±0.32mm、4.13±0.27mm、5.46±0.28mm、5.42±0.31m。C組與B、D組之間做統(tǒng)計(jì)分析(單因素方差分析)(*p0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.各組小鼠血栓濕重:A組小鼠未成栓,B、C、D、E模型組血栓濕重分別為:12.6±3.1mg、8.4±3.2mg、11.5±3.5mg、12.3±3.3mg。C 組與 B、D 組之間做統(tǒng)計(jì)分析(單因素方差分析)(*p0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)二:各組C57小鼠靜脈壁組織中Nrf2及HO-1的mRNA表達(dá)變化實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)各組小鼠Nrf2、HO-1基因的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果后得出,DVT造模后24小時(shí),A、B、C各組小鼠Nrf2、HO-1基因的mRNA表達(dá)量?jī)蓛杀容^均存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(*p0.05);C模型組小鼠Nrf2及HO-1的mRNA表達(dá)均高于A、B兩組(*p0.05),B模型組小鼠Nrf2及HO-1的mRNA表達(dá)高于A組(*p0.05);D、E模型組小鼠HO-1的mRNA表達(dá)比較存在顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(*p0.05),C模型組小鼠HO-1的mRNA表達(dá)高于D組(*p0.05)。[結(jié)論]1.活化Nrf2可抑制C57小鼠下腔靜脈DVT的形成;2.活化Nrf2可能作用于HO-1進(jìn)而抑制C57小鼠下腔靜脈血栓的形成;
【學(xué)位單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R543.6
【部分圖文】：

Ｄ、Ｅ兩組血栓長(zhǎng)度與Ｂ組接近，略小于Ｂ組。Ｃ組與Ｂ、Ｄ組之間做統(tǒng)??計(jì)分析（單因素方差分析）（＊Ｐ＜〇．?０５），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。統(tǒng)計(jì)各組小鼠血??栓長(zhǎng)度變化并進(jìn)行平均值的比較，結(jié)果如表３及圖１所示。??表３小鼠血栓長(zhǎng)度（Ｘ?土Ｓ）、Ｆ值。（單位：麵）??Ｔａｂｌｅ?３?Ｌｅｎｇｔｈ?ｏｆ?ｒａｔｓ?ｔｈｒｏｍｂｕｓ?（?Ｘ?土Ｓ?）?（Ｕｎｉｔ：?ｍｍ）??ｍｉ?ｎ?ｂＥ?ｃＨ?ｄＨ?ｅＨ??￣血栓長(zhǎng)度?０?５．４７?＋?０．３２＊￣４．?１３土０．２７￣５．?４６?＋?０．２８＊￣５．?４２?＋?０．３１??Ｆ?值?１２１．３??注：＊表示與Ｃ組比較Ｐ＜０．?０５??６－，?Ｉ￣＾－＼?Ｉ—??ｌ?ｌ?ｌ?ｌ??占?ＵＩＩＩ??圖１各組小鼠血栓長(zhǎng)度（注：＊：Ｐ〈０．０５）??Ｆｉｇｕｒｅ?１?Ｔｈｅ?ｌｅｎｇｔｈ?ｏｆ?ｍｏｕｓｅ?ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ?ｉｎ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ?（Ｎｏｔｅ：?＊：?Ｐ?＜０．０５）??１８??

型組（ＤＶＴ組）的平均血栓濕重最大，Ｄ、Ｅ兩組血栓濕重與Ｂ組接近，略小于Ｂ??組。Ｃ組與Ｂ、Ｄ組之間做統(tǒng)計(jì)分析（單因素方差分析）（＊ｐ〈〇．?〇５），差異有統(tǒng)??計(jì)學(xué)意義。統(tǒng)計(jì)各組小鼠血栓濕重變化并進(jìn)行平均值的比較，結(jié)果如表４及圖２??所示。??表４小鼠鼠血栓濕重（Ｘ?土Ｓ）、Ｆ值。（單位：ｍｇ）?（＊ｐ＜０．０５）??Ｔａｂｌｅ?４?Ｗｅｔ?ｗｅｉｇｈｔ?ｏｆ?ｒａｆｓ?ｔｈｒｏｍｂｕｓ?（?Ｘ±Ｓ）?（Ｕｎｉｔ：?ｍｇ）?（＊ｐ＜０．０５）??組別?Ｈｉ?ｂＨ?ｃｍ．?ｄｍ?ｅＨ??血栓濕重?〇?１２．６?＋?３．?１＊?８．４±３．２?１１．５?＋?３．５＊?１２．３?＋?３．３￣??Ｆ?值?９．６１０??１５￣｜?Ｉ—Ｉ?ｌ－＾Ｈ??ＯｉＵ??圖２小鼠鼠各組血栓濕重（注：＊：ｐ〈０．?０５）??Ｆｉｇｕｒｅ?２?Ｗｅｔ?ｗｅｉｇｈｔ?ｏｆ?ｍｏｕｓｅｄ?ｔｈｒｏｍｂｕｓ（Ｎｏｔｅ：?＊：?Ｐ?＜０．０５）??１９??
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2888635