第一部分大鼠放射性腦損傷模型中Cox-2mRNA及蛋白的動態(tài)變化研究目的建立大鼠放射性腦損傷模型,并探究大鼠放射性腦損傷模型中Cox-2 mRNA及蛋白的動態(tài)變化規(guī)律。方法1.健康大鼠112只,按隨機數(shù)字法分為健康對照組(只麻醉不照射,56只)和單純照射組[20Gy電子線(5MeV)單次全腦照射構(gòu)建放射性腦損傷模型,56只],于照后3h、12h、1d、3d、7d、15d、30d處死,取全腦組織。2.HE法檢測大鼠放射性腦損傷模型的病理變化。3.QRT-PCR法檢測大鼠放射性腦損傷模型中腦組織的Cox-2 mRNA的表達趨勢。4.Western-Blot法檢測大鼠放射性腦損傷模型的腦組織中Cox-2總蛋白的變化趨勢。5.免疫組織化學法檢測大鼠放射性腦損傷模型中腦內(nèi)海馬區(qū)的Cox-2蛋白表達量及位置。結(jié)果1.HE染色法示:健康對照組大鼠腦組織未見明顯異常變化。單純照射組腦組織在照后3h可見細胞水腫。第12h、1d、3d可見大量胞核固縮、胞漿空泡化,毛細血管間隙增寬,第7d可見微血栓形成,第15d至30d可見血栓機化再通及組織結(jié)構(gòu)紊亂等改變。2.QRT-PCR示:大鼠放射性腦損傷模型中Cox-2mRNA表達量在電離輻射后先逐漸增高,達到峰值后開始減少,與空白組對比,照后3h、12h、1d、3d、7d的表達量有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.Western-Blot示空白組Cox-2蛋白幾乎不表達,電離輻射后其表達量開始增多,至第3d達到峰值,隨后減少,至照后30d接近正常。4.免疫組化示照射組大鼠放射性腦損傷模型海馬區(qū)cox-2蛋白表達變化趨勢與western-blot結(jié)果相一致。結(jié)論大鼠腦組織經(jīng)大劑量電離輻射后隨著時間的變化,腦組織內(nèi)cox-2mrna及蛋白表達量的變化趨勢,與腦組織及血管損傷的變化相一致,可能與腦組織的炎癥反應(yīng)、血管損傷等事件的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。第二部分選擇性cox-2抑制劑減輕放射性腦損傷的機制研究目的探究選擇性cox-2抑制劑塞來昔布在放射性腦損傷中的保護作用及其機制。方法1.健康sd大鼠240只,采用隨機數(shù)字表法分為健康組(80只,只麻醉不照射),單純照射組[80只,20gy電子線(5mev)單次全腦照射構(gòu)建放射性腦損傷模型]和照射加藥組(80只,麻醉同時予20gy電子線(5mev)單次全腦照射,照射前一天,照射當天,照射后一天予30mg/kg塞來昔布灌胃處理)。于照后3h、12h、1d、3d、7d、15d、30d處死,取全腦組織。2.he染色法觀察并比較塞來昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型病理結(jié)構(gòu)改變。3.腦組織干濕稱重法(bwc)觀察塞來昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型含水量的變化。4.依文思藍(eb)法檢測塞來昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型血腦屏障的損傷程度。5.qrt-pcr法檢測塞來昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型中nf-κb和vegfmrna的表達變化趨勢。6.western-blot和免疫組化法檢測塞來昔布干預(yù)后大鼠放射性腦損傷模型中nf-κb和vegf總蛋白的變化趨勢。結(jié)果1.he染色結(jié)果顯示:照射加藥組和單純照射組與健康對照組相比,均可見大鼠腦組織在照后3h出現(xiàn)細胞水腫,第12h、1d、3d可見細胞水腫,胞核固縮。照后第7d有微血栓形成,照后第15d,30d可見腦組織結(jié)構(gòu)破壞,但照射加藥組損傷程度明顯減輕。2.eb法結(jié)果顯示:在單純照射組,大鼠腦組織中eb含量從電離輻射后第3h即開始升高,至照后第1d達到峰值,隨后開始減少,至照射后30d,腦組織內(nèi)eb含量接近健康對照組,與健康對照組相比,第3h,12h,1d,3d,7d,15d腦組織內(nèi)eb含量有統(tǒng)計學差異(p0.05)。在照射加藥組中,電離輻射后腦組織內(nèi)eb含量變化趨勢與單純照射組相似,但各時間點的含量均低于單純照射組,其中第3h,12h,1d測得的eb含量具有統(tǒng)計學差異(p0.05)。3.bwc法顯示:單純照射組中,大鼠腦組織含水量從照后3h開始增加,第7d、15d達到峰值,隨后略微下降,第30d仍顯著高于健康對照組,其中各觀測時間點結(jié)果均有統(tǒng)計學差異(p0.05);在照射加藥組,腦組織含水量在受照后的變化趨勢與單純照射組類似,但含水量要少于單純照射組,與健康對照組相比,第3h、12h、1d、7d、15d、30d結(jié)果有統(tǒng)計學差異(p0.05);與單純照射組相比,照射加藥組第12h、1d、3d、7d、15d結(jié)果有統(tǒng)計學差異(p0.05)。4.qrt-pcr結(jié)果示:在單純照射組中,nf-κbmrna表達量在照后3h、12h、1d略有增高,至3d達到高峰,隨后開始下降,至照后第15d、30d,接近健康對照組。各時間點表達量均有統(tǒng)計學差異(p0.05)。照射加藥組中,第3h、12h,其表達量未見增高,第1d起,其表達量開始增高,至第7d,達到高峰,隨后下降,至第30d,接近正常。其中第1d、3d、7d,照射加藥組nf-κbmrna表達量較健康對照組相比,有統(tǒng)計學差異(p0.05)。與單純照射組相比,第3h、12h、1d、3d、15d的nf-κbmrna達量有統(tǒng)計學差異(p0.05)。在單純照射組中,vegfmrna表達量在第3h,12h明顯增高,第1d略有下降,隨后再次升高,至第7d達到峰值,隨后減少,至第15d、30d稍高于健康對照組。其中各時間點表達量變化均有統(tǒng)計學差異(p0.05)。在照射加藥組中,與健康對照組相比,第3h,vegfmrna達量未見增高,第12h起開始升高,至第7d達到最高,隨后下降,至第30d,接近健康對照組,其中第12h、1d、3d、7d、15d、30d有統(tǒng)計學差異(p0.05);與單純照射組相比,照后第3h、12h、3d、7d大鼠腦組織的vegfmrna表達量要明顯減少,有統(tǒng)計學差異(p0.05)。5.免疫組化法和Western-Blot法顯示:健康對照組中NF-κB和VEGF蛋白表達量較低。在單純照射組中,NF-κB蛋白在照后第3 h增高不明顯,第12 h開始增高,第3 d,7 d達到峰值,隨后開始減少,至第15 d,30 d接近健康對照組。VEGF蛋白從照后第3 h,12 h即可見顯著增高,第1 d略有下降,隨后再次增高,至第7 d達到峰值,然后再次下降,第30 d接近健康對照組。而在照射加藥組中,NF-κB蛋白在照后第3 h,12 h表達量均接近健康對照組,第1 d其表達量開始升高,至第7 d達到高峰,隨后開始減少,第30 d接近正常,且第1 d,3 d,7 d的表達量低于單純照射組。VEGF蛋白在照后第3 h明顯高于健康對照組,第12 h,1 d略有下降,第3 d再次升高,隨后開始減少,至第15 d,30 d接近正常,且第3 h,12 h,3 d,7 d的表達量均低于單純照射組。結(jié)論選擇性Cox-2抑制劑塞來昔布可延緩和減輕電離輻射后腦組織的腦水腫和血腦屏障的破壞,并通過抑制NF-κB和VEGF基因及蛋白的表達,減輕了放射性炎癥和腦血管損傷的程度,達到保護RBI的目的。
【學位單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2016
【中圖分類】：R730.55
【文章目錄】：中文摘要
Abstract
引言
參考文獻
第一部分 大鼠放射性腦損傷模型中Cox-2 mRNA及蛋白的動態(tài)變化研究
材料和方法
結(jié)果
討論
參考文獻
第二部分 選擇性Cox-2 抑制劑減輕放射性腦損傷的機制研究
材料與方法
結(jié)果
討論
參考文獻
綜述
參考文獻
中英文縮略詞對照
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致謝
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本文編號：
2857055
