發(fā)布時間：2024-12-01 22:32

　　目的構建分泌表達抗Aβ42胞內抗體的重組腺相關病毒,為進一步研究胞內抗體靶向識別、清除細胞內Aβ42以達到診斷和治療AD提供了基礎材料。 方法①根據GenBank提供的Aβ42單克隆抗體的已知序列(專利號WO2008/156621 A1),選用Aβ42單克隆抗體重、輕鏈可變區(qū)CDR1和CDR3及其重鏈的骨架結構,設計構建了細胞內抗體mAbA/B, (mAbA:VHCDR1-VLCDR3; mAbB: VHCDR3-VLCDR1)應用DNASIS計算機軟件設計引物。用非對稱互補引物／模板法,上游5’端加入保護堿基和PmaCI酶切位點,下游3’端加入終止密碼子TAG和BamHI酶切位點,通過兩次PCR獲得目的片段。用PmaCI和BamHI雙酶切,得到含有粘著末端的目的基因片斷。②將純化后的mAbA/B分別與載有NT4信號肽、TAT穿膜肽、6×His標簽肽的pSSHG/NT4-TAT-His載體用DNA連接酶相連,構建重組質粒pSSHG/NT4-TAT-His-mAbA/B。③采用磷酸鈣沉淀法三質粒共轉染293細胞,獲得重組攜帶NT4-TAT-His-mAbA/B的AAV載體,RT-PC...

【文章頁數】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
提要
中文摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 前言
    1.2 研究背景回顧
第2章 mAbA/B基因克隆及序列分析
    2.1 構建方案
    2.2 材料和方法
    2.3 結果
第3章 NT4-TAT-His-mAbA/B融合基因的構建及鑒定
    3.1 構建方案
    3.2 材料和方法
    3.3 結果
第4章 pssHG/NT4-TAT-His-mAbA/B重組腺相關病毒包裝及滴度測定
    4.1 重組腺相關病毒pssHG/NT4-TAT-His-mAbA/B的構建方案
    4.2 材料和方法
    4.3 結果
第5章 重組腺相關病毒在Hela中表達及其與Aβ₄₂細胞內結合初步探索細胞內抗體的保護作用
    5.1 材料和方法
    5.2 結果
第6章 討論
    6.1 構建細胞內抗體的意義
    6.2 pssHG/NT4-TAT-His-mAbA/B重組腺相關病毒載體構建、包裝及其意義
    6.3 本研究的意義及創(chuàng)新
    6.4 展望
第7章 結論
參考文獻
作者簡介及科研成果
致謝



本文編號：4013862