發(fā)布時(shí)間：2020-11-20 18:47

　　 背景: 嗜酸粒性細(xì)胞是支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制中的主要效應(yīng)細(xì)胞,與哮喘氣道炎癥、氣道重塑及氣道高反應(yīng)性有關(guān),因而清除嗜酸粒性細(xì)胞對(duì)哮喘炎癥的控制起著重要作用。研究表明肺部嗜酸粒性細(xì)胞可通過(guò)凋亡后被巨噬細(xì)胞或氣道上皮細(xì)胞吞噬而被清除,由于它們是被完整地吞噬和清除,從而防止細(xì)胞內(nèi)炎性介質(zhì)和毒性內(nèi)容物的泄漏,對(duì)哮喘炎癥的控制具有重要意義。 β_2-受體激動(dòng)劑是治療支氣管哮喘的有效藥物,近年來(lái)研究表明β_2-受體激動(dòng)劑除具有舒張支氣管的作用外,還有一定的抗炎作用,但具體機(jī)制不明。 已有文獻(xiàn)報(bào)道地塞米松可以上調(diào)上皮細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞的能力,并存在濃度依賴效應(yīng),而一些升高細(xì)胞內(nèi)cAMP水平的藥物也可以促進(jìn)細(xì)胞吞噬。對(duì)同為治療支氣管哮喘有效的藥物,β_2-受體激動(dòng)劑是否可以對(duì)上皮細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞產(chǎn)生作用還不清楚。雖然已有文獻(xiàn)報(bào)道β_2-受體激動(dòng)劑可以抑制一些炎性因子的分泌,但β_2-受體激動(dòng)劑對(duì)上皮細(xì)胞吞噬凋亡的嗜酸粒性細(xì)胞的干預(yù)作用是否與抑制炎性因子的分泌相關(guān)還未見(jiàn)報(bào)道。研究特布他林對(duì)上皮細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞的作用及對(duì)IL-6、IL-8分泌的影響,目的是進(jìn)一步探討β_2-受體激動(dòng)劑在治療支氣管哮喘中的作用機(jī)制。 目的: 1)探討特布他林對(duì)A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞的作用,并了解有無(wú)濃度和時(shí)間依賴的關(guān)系。 2)觀察A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞后釋放IL-6、IL-8的變化情況。 3)探討特布他林對(duì)脂多糖刺激的A549細(xì)胞分泌IL-6、IL-8有無(wú)抑制作用,是否存在濃度依賴關(guān)系。 方法: 用磁細(xì)胞分離柱和CD15、CD16免疫磁珠抗體分離正常人外周靜脈血中的嗜酸粒性細(xì)胞,培養(yǎng)48小時(shí)后通過(guò)形態(tài)學(xué)和AnnexinV-FITC凋亡試劑盒進(jìn)行嗜酸粒性細(xì)胞凋亡鑒定。凋亡嗜酸粒性細(xì)胞與不同時(shí)間、濃度特布他林干預(yù)的A549細(xì)胞共培養(yǎng)1小時(shí),培養(yǎng)結(jié)束后凋亡嗜酸粒性細(xì)胞用鄰聯(lián)茴香胺進(jìn)行過(guò)氧化物酶染色,A549細(xì)胞用蘇木素加以核襯染。Olympus倒置顯微鏡及DiagnosticInstruments-Spot insight數(shù)字圖象采集攝像系統(tǒng)動(dòng)態(tài)觀察吞噬現(xiàn)象,光鏡下進(jìn)行吞噬率統(tǒng)計(jì)。A549細(xì)胞分別與凋亡嗜酸粒性細(xì)胞、脂多糖、脂多糖和不同濃度特布他林共培養(yǎng),放射免疫法檢測(cè)上清液IL-6、IL-8的濃度。 結(jié)果: 1)A549細(xì)胞分別被特布他林干預(yù)1、2、3小時(shí)后,其吞噬能力隨時(shí)間延長(zhǎng)而下降。 2)A549細(xì)胞在特布他林以10μmol/L濃度干預(yù)時(shí)吞噬能力最低,且吞噬能力隨著濃度的降低而升高,但以0.1μmol/L濃度干預(yù)時(shí)無(wú)顯著的抑制作用。 3)吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞的A549細(xì)胞與未吞噬的A549細(xì)胞比較,IL-6和IL-8的分泌沒(méi)有顯著差異,但脂多糖顯著刺激A549細(xì)胞分泌IL-6和IL-8。 4)特布他林抑制脂多糖誘導(dǎo)的A549細(xì)胞分泌IL-6、IL-8,且存在濃度依賴關(guān)系。 結(jié)論: 1)特布他林以時(shí)間、濃度依賴的方式抑制A549細(xì)胞吞噬凋亡的嗜酸粒性細(xì)胞。 2)特布他林通過(guò)抑制炎性狀態(tài)下的A549細(xì)胞分泌IL-6、IL-8發(fā)揮一定的抗炎作用,并具有濃度依賴效應(yīng)。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R562.25
【部分圖文】：

圖1A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸性粒細(xì)胞(x4OO)FiglA549eellsengulfaPoptotieeosinophils(x400)爪么每分’、‘像…誘圖2特布他林干預(yù)后的A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸性粒細(xì)胞(x400)

apoptotieeosinophils(x400)淡藍(lán)色的為A549細(xì)胞，棕褐色的為被吞噬的凋亡嗜酸性粒細(xì)胞，圖2與圖1比較，吞噬凋亡嗜酸性粒細(xì)胞的A549細(xì)胞明顯減少。

3.2特布他林以時(shí)間和濃度依賴的方式抑制A549細(xì)胞吞噬凋亡的嗜酸性粒細(xì)胞觀察A549細(xì)胞在特布他林(0.1、1、 10pmol/L)作用不同干預(yù)時(shí)間(lh、Zh、3h)后吞噬凋亡的嗜酸性粒細(xì)胞能力變化，如圖3所示，相同干預(yù)時(shí)間組內(nèi)，與對(duì)照組相比，特布他林抑制A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸性粒細(xì)胞(P<O.05)，并且特布他林對(duì)A549細(xì)胞吞噬能力的干預(yù)，存在濃度依賴關(guān)系。但特布他林 (0.1pmol/L)無(wú)顯著抑制作用(P>0.05)。相同干預(yù)濃度組內(nèi)，特布他林以時(shí)間依賴的方式干預(yù)A549細(xì)胞的吞噬。opmollL 0.1pmol/L目mollL10目mol/L酬10七5︵次)2h卜預(yù)時(shí)問(wèn)圖3特布他林對(duì)A549細(xì)胞吞噬嗜酸性粒細(xì)胞的作用 Fig3TheeffeetsofterbutalinetoA549eellsengulfingaPoPtotieeosinoPhils注:與對(duì)照組(0協(xié)mol/L)比較*P<0.05，**P(0.01。lh組內(nèi):特布他林 (1pmol/L)與特布他林 (10pmol/L)比較，P二0.046;Zh組內(nèi):特布他林 (1pmol/L)與特布他林(10“mol/L)比較
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉芳;李清寶;李萌;欒力;王建波;程玉峰;;真核雙基因表達(dá)載體plRES-Rb94-E1A的構(gòu)建與鑒定[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué)(臨床決策論壇版);2011年06期

2 劉樊;周宜;;四種基源的川貝母對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的抑制作用[J];四川中醫(yī);2011年08期

3 趙連梅;孫佳瑋;顏晰;王磊;霍炳杰;劉亞賢;單保恩;;中藥升陷湯抑制肺癌A549細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移作用研究[J];中華中醫(yī)藥雜志;2011年09期

4 洪麗玲;丁樹(shù)娟;朱江波;朱玉平;張?zhí)鞂?;納米與常規(guī)二氧化鈦對(duì)A549細(xì)胞毒性及DNA損傷的比較[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué);2011年07期

5 張小潤(rùn);張程;王曉宇;張湘燕;李敏;葉賢偉;夏婧;;L-氨基酸氧化酶對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞增殖、凋亡的影響研究[J];中國(guó)藥房;2011年25期

6 谷蕾;呂喜英;;厄洛替尼聯(lián)合RNAi對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡及survivin表達(dá)的影響[J];山東醫(yī)藥;2011年28期

7 李智勇;劉增禮;吳錦昌;周俊東;申詠梅;勞勤華;;~(125)I-脫氧尿嘧啶核苷對(duì)肺癌細(xì)胞A549的殺傷作用[J];山東醫(yī)藥;2011年36期

8 王文玉;樊紅琨;趙國(guó)強(qiáng);喬鵬;王書(shū)春;伍鋼;;Beclin1基因慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年33期

9 李朋軍;沈偉哉;葉文才;張冬梅;孫艷;;點(diǎn)地梅提取物saxifragifolin B體外抗實(shí)體瘤活性研究[J];中國(guó)病理生理雜志;2011年05期

10 潘峰;田靜;張旭超;潘躍銀;;舒尼替尼對(duì)EGFR TKI抵抗的A549細(xì)胞株增殖抑制作用及機(jī)制研究[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2011年08期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉平;三甲氧基二苯乙烯及其對(duì)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的抗腫瘤作用及分子機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2010年

2 鄭嵐;雷公藤紅素誘導(dǎo)人肺腺癌A549細(xì)胞凋亡機(jī)制及與PI3K/Akt通路關(guān)系的研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2011年

3 杜劍平;人抗菌肽hBD2在肺腺癌細(xì)胞A549中的表達(dá)、純化及其抗菌活性檢測(cè)[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

4 汪誠(chéng);膜連蛋白Ⅰ參與地塞米松上調(diào)A549細(xì)胞吞噬凋亡的嗜酸性粒細(xì)胞[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

5 黃燕;低氧對(duì)人肺泡上皮細(xì)胞糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)的調(diào)節(jié)及對(duì)地塞米松抗炎效應(yīng)的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

6 宋亞麗;F10基因?qū)�A549細(xì)胞凋亡、化療敏感性及致瘤性的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

7 黃凌瑾;非小細(xì)胞肺癌血清分泌蛋白標(biāo)志物篩選研究[D];中南大學(xué);2007年

8 楊京華;小兒肺炎病證規(guī)律及肺炎合劑對(duì)RSV感染A549細(xì)胞后趨化因子影響的研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2007年

9 張銳;20（S）—原人參二醇誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞凋亡及抑制P13K/AKT信號(hào)途徑的研究[D];吉林大學(xué);2009年

10 呂俊鋒;Decorin基因靶向抑制肺癌A549細(xì)胞及增強(qiáng)鉑類藥物殺傷效率的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 高坤;特布他林對(duì)A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸性粒細(xì)胞及分泌IL-6和IL-8的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

2 王俊宏;胰島素樣生長(zhǎng)因子I對(duì)其受體在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)調(diào)節(jié)的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2003年

3 孫亞萍;和厚樸酚對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抗增殖及誘導(dǎo)凋亡的作用研究[D];浙江大學(xué);2010年

4 欒兆吉;苦參堿抑制肺腺癌A549細(xì)胞株侵襲轉(zhuǎn)移的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2010年

5 金娟;冬凌草甲素誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞凋亡及機(jī)制研究[D];南華大學(xué);2009年

6 溫雅;丹參和仙鶴草抑制A549細(xì)胞增殖及對(duì)血管生成相關(guān)基因表達(dá)的影響[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2010年

7 姜鵬;褪黑素對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

8 武娟;轉(zhuǎn)染4.1N基因?qū)Ψ伟〢549細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[D];鄭州大學(xué);2012年

9 朱建;化學(xué)小分子對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用研究[D];山東大學(xué);2012年

10 俞芳;和厚樸酚聯(lián)合低劑量奧沙利鉑誘導(dǎo)肺腺癌A549細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];浙江大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2891832