發(fā)布時間：2020-11-20 18:47

　　 背景: 嗜酸粒性細(xì)胞是支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制中的主要效應(yīng)細(xì)胞,與哮喘氣道炎癥、氣道重塑及氣道高反應(yīng)性有關(guān),因而清除嗜酸粒性細(xì)胞對哮喘炎癥的控制起著重要作用。研究表明肺部嗜酸粒性細(xì)胞可通過凋亡后被巨噬細(xì)胞或氣道上皮細(xì)胞吞噬而被清除,由于它們是被完整地吞噬和清除,從而防止細(xì)胞內(nèi)炎性介質(zhì)和毒性內(nèi)容物的泄漏,對哮喘炎癥的控制具有重要意義。 β_2-受體激動劑是治療支氣管哮喘的有效藥物,近年來研究表明β_2-受體激動劑除具有舒張支氣管的作用外,還有一定的抗炎作用,但具體機(jī)制不明。 已有文獻(xiàn)報道地塞米松可以上調(diào)上皮細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞的能力,并存在濃度依賴效應(yīng),而一些升高細(xì)胞內(nèi)cAMP水平的藥物也可以促進(jìn)細(xì)胞吞噬。對同為治療支氣管哮喘有效的藥物,β_2-受體激動劑是否可以對上皮細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞產(chǎn)生作用還不清楚。雖然已有文獻(xiàn)報道β_2-受體激動劑可以抑制一些炎性因子的分泌,但β_2-受體激動劑對上皮細(xì)胞吞噬凋亡的嗜酸粒性細(xì)胞的干預(yù)作用是否與抑制炎性因子的分泌相關(guān)還未見報道。研究特布他林對上皮細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞的作用及對IL-6、IL-8分泌的影響,目的是進(jìn)一步探討β_2-受體激動劑在治療支氣管哮喘中的作用機(jī)制。 目的: 1)探討特布他林對A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞的作用,并了解有無濃度和時間依賴的關(guān)系。 2)觀察A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞后釋放IL-6、IL-8的變化情況。 3)探討特布他林對脂多糖刺激的A549細(xì)胞分泌IL-6、IL-8有無抑制作用,是否存在濃度依賴關(guān)系。 方法: 用磁細(xì)胞分離柱和CD15、CD16免疫磁珠抗體分離正常人外周靜脈血中的嗜酸粒性細(xì)胞,培養(yǎng)48小時后通過形態(tài)學(xué)和AnnexinV-FITC凋亡試劑盒進(jìn)行嗜酸粒性細(xì)胞凋亡鑒定。凋亡嗜酸粒性細(xì)胞與不同時間、濃度特布他林干預(yù)的A549細(xì)胞共培養(yǎng)1小時,培養(yǎng)結(jié)束后凋亡嗜酸粒性細(xì)胞用鄰聯(lián)茴香胺進(jìn)行過氧化物酶染色,A549細(xì)胞用蘇木素加以核襯染。Olympus倒置顯微鏡及DiagnosticInstruments-Spot insight數(shù)字圖象采集攝像系統(tǒng)動態(tài)觀察吞噬現(xiàn)象,光鏡下進(jìn)行吞噬率統(tǒng)計。A549細(xì)胞分別與凋亡嗜酸粒性細(xì)胞、脂多糖、脂多糖和不同濃度特布他林共培養(yǎng),放射免疫法檢測上清液IL-6、IL-8的濃度。 結(jié)果: 1)A549細(xì)胞分別被特布他林干預(yù)1、2、3小時后,其吞噬能力隨時間延長而下降。 2)A549細(xì)胞在特布他林以10μmol/L濃度干預(yù)時吞噬能力最低,且吞噬能力隨著濃度的降低而升高,但以0.1μmol/L濃度干預(yù)時無顯著的抑制作用。 3)吞噬凋亡嗜酸粒性細(xì)胞的A549細(xì)胞與未吞噬的A549細(xì)胞比較,IL-6和IL-8的分泌沒有顯著差異,但脂多糖顯著刺激A549細(xì)胞分泌IL-6和IL-8。 4)特布他林抑制脂多糖誘導(dǎo)的A549細(xì)胞分泌IL-6、IL-8,且存在濃度依賴關(guān)系。 結(jié)論: 1)特布他林以時間、濃度依賴的方式抑制A549細(xì)胞吞噬凋亡的嗜酸粒性細(xì)胞。 2)特布他林通過抑制炎性狀態(tài)下的A549細(xì)胞分泌IL-6、IL-8發(fā)揮一定的抗炎作用,并具有濃度依賴效應(yīng)。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R562.25
【部分圖文】：

圖1A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸性粒細(xì)胞(x4OO)FiglA549eellsengulfaPoptotieeosinophils(x400)爪么每分’、‘像…誘圖2特布他林干預(yù)后的A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸性粒細(xì)胞(x400)

apoptotieeosinophils(x400)淡藍(lán)色的為A549細(xì)胞，棕褐色的為被吞噬的凋亡嗜酸性粒細(xì)胞，圖2與圖1比較，吞噬凋亡嗜酸性粒細(xì)胞的A549細(xì)胞明顯減少。

3.2特布他林以時間和濃度依賴的方式抑制A549細(xì)胞吞噬凋亡的嗜酸性粒細(xì)胞觀察A549細(xì)胞在特布他林(0.1、1、 10pmol/L)作用不同干預(yù)時間(lh、Zh、3h)后吞噬凋亡的嗜酸性粒細(xì)胞能力變化，如圖3所示，相同干預(yù)時間組內(nèi)，與對照組相比，特布他林抑制A549細(xì)胞吞噬凋亡嗜酸性粒細(xì)胞(P<O.05)，并且特布他林對A549細(xì)胞吞噬能力的干預(yù)，存在濃度依賴關(guān)系。但特布他林 (0.1pmol/L)無顯著抑制作用(P>0.05)。相同干預(yù)濃度組內(nèi)，特布他林以時間依賴的方式干預(yù)A549細(xì)胞的吞噬。opmollL 0.1pmol/L目mollL10目mol/L酬10七5︵次)2h卜預(yù)時問圖3特布他林對A549細(xì)胞吞噬嗜酸性粒細(xì)胞的作用 Fig3TheeffeetsofterbutalinetoA549eellsengulfingaPoPtotieeosinoPhils注:與對照組(0協(xié)mol/L)比較*P<0.05，**P(0.01。lh組內(nèi):特布他林 (1pmol/L)與特布他林 (10pmol/L)比較，P二0.046;Zh組內(nèi):特布他林 (1pmol/L)與特布他林(10“mol/L)比較
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本文編號：2891832