發(fā)布時間：2020-11-20 19:22

　　 目的 本研究應(yīng)用被動吸煙復(fù)制大鼠肺氣腫模型,采用酶組織化學(xué)、免疫印記技術(shù)等不同的檢測方法,檢測肺氣腫大鼠全病程中的膈肌纖維類型和mTor蛋白的變化,探討肺氣腫全病程中膈肌功能異常的分子生物學(xué)機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)材料及方法 一、實(shí)驗(yàn)動物和分組 選取7周齡健康雄性Wistar大鼠120只,體重250—280g,由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供,清潔度Ⅰ級,常規(guī)飼料自由飲水,溫度22±1℃,濕度50%左右,明／暗周期為12h。隨機(jī)被分為3組,分別為對照組(C)、肺氣腫吸煙組(E)、肺氣腫戒煙組(N),分別在肺氣腫形成0天、3月、6月、12月取材,每組10只。 二、被動吸煙復(fù)制大鼠肺氣腫模型 將肺氣腫大鼠每天放入自制的煙熏艙(體積為0.25 m3),暴露于10支黃果樹牌香煙,每次被動吸煙1小時5天／周,持續(xù)75天。 三、主要實(shí)驗(yàn)方法 (一)肺組織病理：HE染色 (二)膈肌纖維檢測：采用琥珀酸脫氫酶方法,將肌纖維分為氧化型和酵解型,其中染色深的是氧化型纖維,染色淺的酵解型纖維。 (三)mTOR蛋白測定：Western Blotting 四、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料單因素方差分析進(jìn)行顯著性檢驗(yàn),若P0.05,再進(jìn)行q檢驗(yàn),比較任意兩組間的差異有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用單因素直線回歸分析,比較干預(yù)因素與測量因素有無相關(guān)性。所有分析用SPSS13.0軟件進(jìn)行。 結(jié)果 1、在肺氣腫形成0天和3個月時,E組、N組的氧化型纖維比例高于對照組(P0.05)。在肺氣腫形成6個月時,N組的氧化型纖維比例高于對照組(P0.05),E組的氧化型纖維比例與對照組比較無顯著差異(P0.05)。在肺氣腫形成12個月時,E組、N組的氧化型纖維比例低于對照組(P0.05)。 2、年齡與氧化型纖維比例的相關(guān)分析結(jié)果顯示正相關(guān)(P0.05)。 3、在肺氣腫形成0天和3個月時,E組、N組的mTOR蛋白高于對照組(P0.05)。在肺氣腫形成6個月時,N組的mTOR蛋白高于對照組(P0.05),E組的mTOR蛋白與對照組比較無顯著差異(P0.05)。在肺氣腫形成12個月時,E組、N組的mTOR低于對照組(P0.05)。 結(jié)論 1、肺氣腫大鼠膈肌氧化型纖維比例隨疾病進(jìn)展先增加后下降,說明膈肌出現(xiàn)代償和失代償過程。 2、隨著年齡的增加,膈肌氧化型纖維比例逐漸升高。 3、肺氣腫早期調(diào)節(jié)骨骼肌增生的信號蛋白mTOR蛋白表達(dá)高于對照組,肺氣腫晚期mTOR蛋白表達(dá)低于對照組。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R563.3
【部分圖文】：

光鏡下觀察，可見支氣管壁淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤，支氣管粘膜上皮纖毛倒伏、粘連或脫落，杯狀細(xì)胞明顯增多，胞體增大。肺泡擴(kuò)大融合，彈力纖維呈破壞性改變，肺泡數(shù)量減少，見圖2。肺氣腫(100x)對照組(100x)圖2，實(shí)驗(yàn)組和對照組肺臟HE染色二、各組大鼠體重變化肺氣腫形成O天，3月實(shí)驗(yàn)組和對照組體重?zé)o差異(P>0.05)，6月和12月實(shí)驗(yàn)組和對照組比較有差異(P<0.05)，見表2。表2，各組大鼠體重(g)，以x士s表示O天3月6月肺氣腫吸煙組(E)肺氣腫戒煙組伽)對照組(C)361.9士22.57395.3士38.10 403.1士23.29*368.2士24.93 412.1士25.18462.6士54.85*369.0士 12.29418.5士28.97507.5士20.9512月500.1士60.88*566.0士25.32*609.5土37.25注:*表示與對照組大鼠的體重比較，P<0.05。三、隔肌纖維類型表達(dá)(一)月兩肌纖維類型分布氧化型纖維 (1a+llb)呈深染

(一)月兩肌纖維類型分布氧化型纖維 (1a+llb)呈深染，酶顆粒多，酵解型纖維 (IIa)呈淡染色，酶顆粒少(見圖3)。在肺氣腫形成0天和3個月時，E組、N組的氧化型纖維比例高于對照組(P<0.05)。在肺氣腫形成6個月時，N組的氧化型纖維比例高于

E組的氧化型纖維比例與對照組比較無顯著差異在肺氣腫形成12個月時，E組、N組的氧化型纖維比例低于對照組分別見表3，圖4。 (P>0.05)。 (P<0.05)，對照組(400x)肺氣腫吸煙組(400x)肺氣腫戒煙組(400x)圖3，SDH染色表3，月兩肌纖維類型分布(%)，以x士S表示O天3月6月月市氣腫吸煙組(E)肺氣腫戒煙組(N)對照組(C)55.55士9.38*67.46士 6.58*61.25士 10.6655.77士5.88*62.79士12.49*73.94士12.32*47一37士 6.5453.76士10.6264.91士8.9012月59.57士7.70* 63.37士 10.07* 73.19士9.03*注:*與對照組比較，P<0.05。
【參考文獻(xiàn)】

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1 李紅梅,崔德健,佟欣,龐寶森,高亞兵,王德文;熏香煙加氣管注內(nèi)毒素和單純熏香煙法建立大鼠COPD模型[J];中國病理生理雜志;2002年07期

本文編號：2891877