發(fā)布時間：2020-11-10 17:01

　　 目的:建立SD大鼠哮喘氣道重塑模型;探討在哮喘氣道重塑模型基礎(chǔ)上,氧化應(yīng)激與氣道炎癥、氣道重塑的關(guān)系,及經(jīng)抗氧化劑茶多酚、冬蟲夏草軟膠囊(金水寶)干預(yù)后,對氧化應(yīng)激、氣道炎癥、氣道重塑的影響。為防治哮喘氣道重塑提供新的研究依據(jù)。 方法:1、利用卵蛋白(OVA)加免疫佐劑(氫氧化鋁凝膠)間隔7天致敏和隔日霧化OVA,并延長OVA激發(fā)時間的方法,建立大鼠慢性哮喘氣道重塑模型。將64只健康雌性SD大鼠按隨機數(shù)字表法分為:正常對照組、哮喘組,每組再分4周、8周、12周、16周四個時間段,每小組8只。正常對照組所有干預(yù)用生理鹽水代替。觀察指標:①肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)細胞計數(shù)與分類,②肺組織行蘇木精-伊紅(HE)染色、過碘酸雪夫(PAS)染色、Masson染色及轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-?1)的免疫組化染色。圖像分析:進行支氣管周圍炎性指數(shù)及杯狀細胞粘液指數(shù)評分,測定支氣管壁的平滑肌面積(WAm)、膠原沉積面積(Wcol),并用支氣管內(nèi)周長(Pbm)標化,測定肺組織TGF-?1的積分光密度值(IOD值)。 2、在成功建立大鼠哮喘氣道重塑模型的基礎(chǔ)上。將48只大鼠隨機分為:對照組、模型組、早期布地奈德組(早BUD組)、早期茶多酚組[早TP組,400 mg/(kg·d)]、晚期布地奈德組(晚BUD組)、晚期茶多酚組[晚TP組,400 mg/(kg·d)],每組8只。早BUD組、早TP組在造模2周前給藥,晚BUD組、晚TP組在造模5周后給藥。造模12周時觀察指標:①BALF細胞計數(shù)與分類;②采用親和素-生物素酶聯(lián)免疫吸附試驗(ABC-ELISA)測定肺組織TGF-β1含量,采用硫代巴比妥(TBA)法測定肺組織丙二醛(MDA)含量;用黃嘌呤氧化酶法測定肺組織超氧化物歧化酶(SOD)活力;③肺組織病理觀察及圖像分析:進行支氣管周圍炎性指數(shù)及粘液指數(shù)評分,測定支氣管壁的WAm/Pbm、Wcol/Pbm,測定肺組織TGF-?1的IOD值。 3、在成功建立大鼠哮喘氣道重塑模型的基礎(chǔ)上,探討中藥冬蟲夏草軟膠囊對哮喘大鼠氧化應(yīng)激、氣道炎癥、氣道重塑的影響。將40只大鼠隨機分為5組:對照組(A組)、哮喘組(B組)、布地奈德組(C組)、冬蟲夏草低劑量組[D組,310 mg/(kg·d)]、冬蟲夏草高劑量組[ E組,620 mg/(kg·d)],每組8只。藥物干預(yù)均在造模5周后進行,造模12周時觀察指標[具體同上2觀察指標]。 結(jié)果:1、大鼠在哮喘造模4周時即出現(xiàn)明顯的氣道管腔縮窄,支氣管上皮細胞脫落,支氣管粘膜增厚、皺襞增多、延長,肺泡間隔、氣道平滑肌增厚,膠原沉積增多,支氣管粘膜上皮間杯狀細胞明顯增生、粘液分泌旺盛,TGF-β1廣泛表達并增強,且隨時間推移上述改變呈增加趨勢;哮喘組BALF細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞(Eos)計數(shù)、中性粒細胞(PMN)計數(shù)、炎性指數(shù)、粘液指數(shù)明顯增多,且隨著時間推移,Eos計數(shù)呈逐漸下降趨勢,PMN計數(shù)呈逐漸升高趨勢。相關(guān)分析表明,BALF細胞總數(shù)與炎性指數(shù)呈良好的正相關(guān)性,氣道膠原沉積面積與TGF-β1的表達呈良好的正相關(guān)。說明SD大鼠哮喘氣道重塑模型建立成功。 2、在成功建立大鼠哮喘氣道重塑模型的基礎(chǔ)上,經(jīng)抗氧化劑茶多酚、中藥冬蟲夏草干預(yù)后,MDA含量明顯降低,SOD活性明顯升高,且BALF細胞總數(shù)、Eos、PMN、粘液指數(shù)、炎性指數(shù)均明顯減少,其中PMN、粘液指數(shù)減少的最明顯。且茶多酚早期干預(yù)優(yōu)于茶多酚晚期干預(yù),冬蟲夏草高劑量優(yōu)于冬蟲夏草低劑量,晚期單用布地奈德療效最差。相關(guān)分析表明,MDA含量與SOD活性呈良好的負相關(guān)性,粘液指數(shù)、PMN計數(shù)與MDA含量均呈良好的正相關(guān)性。說明氧化應(yīng)激水平越高,氣道炎癥越明顯,經(jīng)抗氧化劑茶多酚、冬蟲夏草干預(yù)后,氣道炎癥有明顯改善。 3、經(jīng)抗氧化劑茶多酚、冬蟲夏草干預(yù)后,支氣管平滑肌面積、膠原沉積面積、TGF-β1表達及含量明顯減少。且茶多酚早期干預(yù)優(yōu)于茶多酚晚期干預(yù),冬蟲夏草高劑量優(yōu)于冬蟲夏草低劑量,晚期單用布地奈德療效最差。相關(guān)分析表明,膠原沉積面積、TGF-β1表達與MDA含量呈良好的正相關(guān)性。說明氧化應(yīng)激水平越高,氣道重塑越明顯,經(jīng)抗氧化劑茶多酚、冬蟲夏草干預(yù)后,氣道重塑有改善。 結(jié)論:1、采用間隔7天致敏,延長霧化卵蛋白時間的方法,可以成功建立良好的SD大鼠哮喘氣道重塑模型。且哮喘模型早期就有氣道重塑的改變,后期BALF的PMN計數(shù)逐漸升高。 2、氧化應(yīng)激可能是哮喘氣道重塑形成的機制之一。氧化應(yīng)激水平越高,哮喘氣道重塑越明顯。茶多酚、冬蟲夏草軟膠囊可能通過控制氧化應(yīng)激水平,降低氣道炎癥(特別是PMN)、減少粘液細胞增生/分泌、抑制TGF-β1表達,而改善氣道重塑的形成,有效的緩解或者是一定程度上控制了慢性哮喘氣道重塑的發(fā)展。 3、早期予以茶多酚、布地奈德干預(yù)可以很好的控制哮喘氣道炎癥,延緩氣道重塑的形成及發(fā)展。而晚期干預(yù)茶多酚及冬蟲夏草高劑量優(yōu)于單用布地奈德療效。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R562.25
【部分圖文】：

嗜酸性粒細胞百分比、中性粒細胞百分比、上皮細胞百分比均有顯著性差異(P＜0.01)。圖1：各組大鼠肺組織HE、PAS染色情況對照組 HE染色 200× 哮喘組 HE染色 200× 早BUD組 HE染色 200× 晚BUD組 HE染色 200×對照組 PAS染色 400× 哮喘組 PAS染色 400× 早TP組 PAS染色 400× 晚TP組 PAS染色 400×由圖 1 可知：HE 染色顯示支氣管周圍炎性細胞浸潤情況：哮喘組與對照組

32圖5：各組大鼠肺組織Masson、TGF-β1染色情況對照組Masson染色200× 哮喘組Masson染色200× 晚TP組Masson染色200× 晚BUD組Masson染色200×正常組 TGF-β1染色 100× 哮喘組 TGF-β1染色 100×由圖 5 可知： Masson 染色顯示支氣管壁周圍平滑肌細胞膠原沉積情況(平滑肌細胞核呈深棕色、細胞漿呈紅色，膠原纖維呈藍色)。與對照組相比，哮喘組平滑肌增生、肥大，氣道上皮下膠原沉積明顯增多，且以膠原沉積為主；TGF-β1免疫組化染色結(jié)果顯示：哮喘組較對照組相比，TGF-β1廣泛表達，主要表達在氣道黏膜上皮層，平滑肌、炎性細胞、細胞間質(zhì)也有表達。2.1 早期干預(yù)對氣道重塑的影響表5 早期干預(yù)大鼠氣道重塑指標與氧化應(yīng)激( x ±s)組別 WAm/Pbm Wcol/Pbm TGF-β1 表達 TGF-β1含量 MDA含量（um2/um) （um2/um) （ug/ ml） （nmol/ mgprot）對照組 3.62±0.24＊ 4.11±1.68＊ 1.3±0.3＊ 48.05±9.45＊ 5.78±1.04＊哮喘組 8.52±1.62 18.06±6.53 10.4±2.9 123.78±16.21 12.69±3.26早BUD組 4.63±0.83＊ 5.01±1.00＊ 2.2±0.6＊ 56.46±9.87＊ 6.97±1.32＊早TP組 4.84±0.92＊☆ 5.07±1.03＊☆ 2.3±0.9＊☆ 58.42±10.34＊☆ 6.88±1.28＊☆與哮喘組比較：＊ P＜0.01，▲ P＜0.05

分比均減少（P<0.05），中性粒細胞百分比明顯減少（P＜0.01），嗜酸性粒細胞百分比無顯著變化（P>0.05）。說明E組降低BALF細胞總數(shù)、中性粒細胞百分比、上皮細胞百分比最明顯。D組降低中性粒細胞百分比，較C組明顯，見表1。提示冬蟲夏草軟膠囊能明顯減輕晚期哮喘大鼠氣道炎癥，特別是中性粒細胞。1.2 冬蟲夏草對炎性指數(shù)、粘液指數(shù)的影響圖 2 各組大鼠肺組織 HE、PAS 染色情況A組( HE染色) 200× B組( HE染色) 200× C組( HE染色) 200× E組( HE染色) 200×
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 胡艷;安蕓;黃鶴;郝洪軍;宿利;王月丹;劉新民;李海潮;;不同時間變應(yīng)原暴露對大鼠哮喘模型的影響[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年03期

2 曹國強;中性粒細胞與支氣管哮喘的研究進展[J];重慶醫(yī)學(xué);2003年07期

3 戚好文;哮喘氣道重建——支氣管哮喘研究中所面臨的挑戰(zhàn)[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2002年13期

4 錢皓瑜;人工冬蟲夏草治療慢性阻塞性肺疾病的觀察[J];醫(yī)藥論壇雜志;2004年11期

5 張仲儀,姜枋進;冬蟲夏草治療肺間質(zhì)病20例臨床分析[J];臨床薈萃;2000年11期

6 殷曉峰,馮玉麟,劉春濤;大鼠支氣管哮喘模型氣道重構(gòu)的研究[J];四川醫(yī)學(xué);2002年05期

7 蘇莉莉;張先欣;伊洪莉;張萌;李懷臣;;輕、中度持續(xù)性哮喘患者氣道黏膜病理變化及與嗜中性粒細胞的關(guān)系[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2007年07期

8 魏濤,魏威凜,貢曉娟,金宗濂;冬蟲夏草菌絲體鎮(zhèn)咳、祛痰及抗菌消炎作用的研究[J];食品科學(xué);2002年03期

9 容志惠,常立文,錢莉玲,李文斌;支氣管肺發(fā)育不良不同時期基質(zhì)金屬蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶特異性組織抑制物及核轉(zhuǎn)錄因子κB表達變化[J];實用兒科臨床雜志;2005年05期

10 黎經(jīng)蘭;;金水寶輔舒酮并用治療支氣管哮喘40例[J];實用中醫(yī)內(nèi)科雜志;2006年05期

本文編號：2878149