發(fā)布時(shí)間：2020-11-10 13:54

　　 第一部分脂多糖誘導(dǎo)急性肺損傷模型的建立及LRRC8A表達(dá)變化目的:通過氣道給予SD大鼠脂多糖,檢測(cè)肺組織病理,相關(guān)炎癥指標(biāo),肺部濕/干比例及肺水清除率評(píng)估肺損傷模型并觀察LRRC8A表達(dá)變化。方法:1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組方案:30只雄性SD大鼠隨機(jī)分為兩組,每組15只。每組于6h,12h及24h分別處死5只。分別為陰性對(duì)照物組,脂多糖(LPS)處理組。陰性對(duì)照組氣道注入生理鹽水1ml,LPS處理組氣道注入脂多糖(5mg/kg)。2.檢測(cè)指標(biāo)及方法:用Evans Blue法計(jì)算肺泡液體清除率,ELISA法檢測(cè)肺泡灌洗液中的炎癥因子TNF-α及IL-1β;右肺下葉行肺組織HE染色;右肺中葉用于肺部濕/干比例(Wet/Dry,W/D)的測(cè)定;右肺上葉用于通過Western Blot及RT-PCR法檢測(cè)LRRC8A表達(dá)變化。結(jié)果:對(duì)照組其肺組織未見明顯病理?yè)p傷,LPS處理組6,12,24小時(shí)均可見肺部病理?yè)p傷,損傷程度呈時(shí)間依賴性加重;LPS處理組較對(duì)照組相比,肺水清除率明顯下降(27.4±1.29%vs 17.01±0.71%,P0.01);W/D比值升高(4.85±0.09 vs 6.44±0.12,P0.05);肺泡灌洗液中,IL-1β表達(dá)水平升高(7.58±0.76 vs 31.66±2.40,P0.01),TNF-α表達(dá)水平升高(50.20±10.21 vs 760.01±20.20,P0.01);LRRC8A蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)水平均顯著減低(P0.05)。結(jié)論:1.氣管內(nèi)注入脂多糖后,可以造成肺部炎癥損傷及肺水腫形成。2.急性肺損傷時(shí),LRRC8A蛋白及mRNA表達(dá)降低,推測(cè)LRRC8A參與急性肺損傷過程。第二部分過表達(dá)LRRC8A對(duì)急性肺損傷大鼠肺水清除率的影響目的:通過鼻部注射腺病毒(Ad-sftpc-lrrc8a)在大鼠肺部過表達(dá)LRRC8A蛋白,探討LRRC8A在急性肺損傷大鼠中肺水清除中的作用。方法:1腺病毒肺組織轉(zhuǎn)染效果驗(yàn)證:18只SD大鼠分為三組,A組即含肺部特異性啟動(dòng)子對(duì)照組(Ad-sftpc-EGFP),B組即腺病毒腺病毒實(shí)驗(yàn)組(Ad-sftpc-lrrc8a-EGFP),C組即腺病毒空載體對(duì)照組(Ad-EGFP)。鼻腔內(nèi)分別注入不同組腺病毒40ul/只,病毒滴度為2E+10 PFU/ml。2周后每組各取三只取材,用激光共聚焦顯微鏡觀察報(bào)告基因GFP綠色熒光表達(dá)水平。用Western Blot法驗(yàn)證該腺病毒轉(zhuǎn)染過表達(dá)效果。2過表達(dá)LRRC8A對(duì)急性肺損傷大鼠肺水清除率的影響:腺病毒注入2周后,每組各取3只SD大鼠,按照第一部分步驟建造ALI模型,測(cè)定AFC水平變化。結(jié)果:1.腺病毒組織轉(zhuǎn)染結(jié)果驗(yàn)證:鼻腔注入空載腺病毒(Ad-EGFP)后,肺組織病理HE染色結(jié)構(gòu)正常;激光共聚焦纖維鏡觀察可見:ABC三組肺部均可見綠色熒光表達(dá),C組與A、B組相比,肝、腎、脾可見明顯綠色熒光表達(dá);肺組織LRRC8A蛋白表達(dá)結(jié)果:Western Blot結(jié)果顯示B組比C組及A組LRRC8A水平明顯升高(P0.01)。2.急性肺損傷大鼠過表達(dá)LRRC8A后,B組肺水清除率較A組明顯升高(P0.01)。結(jié)論:Sftpc啟動(dòng)子誘導(dǎo)腺病毒靶向轉(zhuǎn)染至肺組織,可造成LRRC8A在肺組織過表達(dá)。過表達(dá)LRRC8A的急性肺損傷大鼠,AFC較對(duì)照組降低,提示LRRC8A可能參與肺水清除過程,對(duì)急性肺損傷具有保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R563
【部分圖文】：

19圖 1.肺部蘇木精伊紅染色結(jié)果Fig.1 Lung histology of control group,LPS-induced groups in6h,12h,24h.(stained by HE,100×)

圖 2. 肺內(nèi)液體清除及肺泡灌洗液炎癥指標(biāo)Fig.2Alveolar fluid clearance and inflammation indicators in BALA:Detection ofAlveolar fluid clearance(AFC) in control group andLPS-induced group; B:Mesurement of Wet/Dry in control group anS-induced group;C: Comparison of IL-β level in BALF between co LPS group; D: Comparison of TNF-α level in BALF between contrLPS group.,*P＜0.05,LPS vs NS,**P＜0.05,LPS vs NS.

圖3. LRRC8A的蛋白及mRNA表達(dá)水平.3Aand B:Expression of LRRC8A protein in LPS-induced grou,12h and 24h(n=3); F:Relative LRRC8AmRNAexpressions at diffepoint(6h,12h,24h) after LPS exposure.The relative mRNAexpresre calculated by 2-△△Ct(n=3).*P＜0.05,LPS vs NS,**P＜0.05,LPS v
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本文編號(hào)：2878007