發(fā)布時(shí)間：2020-11-15 08:51

　　 目的:探討miR-373-3p表達(dá)變化對人子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞增殖和遷移生物學(xué)特性的影響,并對是否調(diào)控LAST2的表達(dá)做進(jìn)一步研究,闡明miR-373-3p促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌增殖及遷移的可能分子機(jī)制,為子宮內(nèi)膜癌潛方法:構(gòu)建miR-373-3p mimics和inhibitor慢病毒載體,分別感染至子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測感染后的HEC-1A細(xì)胞中miR-373-3p的表達(dá)變化,采用CCK-8法檢測miR-373-3p對細(xì)胞增殖能力的影響,采用劃痕觀察miR-373-3p對細(xì)胞間接遷移能力的影響,采用Transwell小室實(shí)驗(yàn)分析miR-373-3p對細(xì)胞直接遷移能力的影響。通過進(jìn)一步的生物信息學(xué)軟件預(yù)測miR-373-3p的潛在靶基因,并運(yùn)用Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測上調(diào)或下調(diào)miR-373-3p的子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中LAST2的表達(dá),初步驗(yàn)證miR-373-3p的作用靶點(diǎn)。結(jié)果:測序結(jié)果證實(shí)成功構(gòu)建人miR-373-3p mimics和inhibitor慢病毒載體。miR-373-3p mimics和inhibitor分別成功上調(diào)和下調(diào)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株HEC-1A中miR-373-3p的表達(dá),CCK-8結(jié)果顯示上調(diào)miR-373-3p的表達(dá)能夠明顯促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞的增殖能力,而沉默miR-373-3p的表達(dá)明顯抑制HEC-1A細(xì)胞增殖能力;劃痕和Transwell小室結(jié)果表明過表達(dá)miR-373-3p明顯促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞遷移能力,而低表達(dá)miR-373-3p則降低了HEC-1A細(xì)胞的遷移能力。根據(jù)生物信息學(xué)軟件靶基因預(yù)測提示LATS2是miR-373-3p靶基因之一,Western Blot實(shí)驗(yàn)表明過表達(dá)miR-373-3p明顯抑制了子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中LATS2蛋白表達(dá),而低表達(dá)miR-373-3p明顯增高HEC-1A細(xì)胞LATS2蛋白表達(dá)。結(jié)論:miR-373-3p在子宮內(nèi)膜癌HEC-1A細(xì)胞中可能發(fā)揮癌基因作用,過表達(dá)miR-373-3p能夠促進(jìn)HEC-1A細(xì)胞的增殖和遷移能力,而低表達(dá)miR-373-3p則抑制HEC-1A細(xì)胞的增殖和遷移能力。miR-373-3p可能通過調(diào)控LATS2表達(dá)影響子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展,是一個(gè)治療子宮內(nèi)膜癌的潛在靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

miR-373-3p 對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 HEC-1A 增殖和遷移的影響 2018 屆碩士學(xué)位論文結(jié)果一．質(zhì)粒的測序鑒定結(jié)果（1）重組的 GV369-pre-miRNA-373-3p mimics 質(zhì)粒送 DNA 測序，測序結(jié)果見圖一，結(jié)果顯示：質(zhì)粒測序結(jié)果正確，以下為部分測序結(jié)果,該序列為GV369-pre-miRNA-373-3p mimics 序列，表明 GV369-pre-miRNA-373-3mimics 慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建成功。

圖 2 GV280－ pre -miRNA-373-3p inhibitor 測序圖譜Figure 2 Sequence of GV280－ pre -miRNA -373-3p inhibitor plasmid二．慢病毒滴度的測定慢病毒三質(zhì)粒系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染 293T 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染 48h 后在熒光顯微鏡下察 293T 細(xì) 胞 可 見 GFP 綠 色 熒 光 蛋 白 表 達(dá) 。 慢 病 GV369-pre-miRNA-373-3p mimics 的病毒滴度約為 4×108TU/ml，對應(yīng)空慢病毒的病毒滴度約為 1 ×109TU/ml（圖 3）。慢病毒 GV280- pre -miRN-373-3p inhibitor 的病毒滴度約為 6×108TU/ml，對應(yīng)空載慢病毒的病毒度約為 4 ×108TU/ml（圖 4）。

圖 2 GV280－ pre -miRNA-373-3p inhibitor 測序圖譜Figure 2 Sequence of GV280－ pre -miRNA -373-3p inhibitor plasmid毒滴度的測定毒三質(zhì)粒系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染 293T 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染 48h 后在熒光顯T 細(xì) 胞 可 見 GFP 綠 色 熒 光 蛋 白 表 達(dá) 。 pre-miRNA-373-3p mimics 的病毒滴度約為 4×108TU/ml，病毒滴度約為 1 ×109TU/ml（圖 3）。慢病毒 GV280- prinhibitor 的病毒滴度約為 6×108TU/ml，對應(yīng)空載慢病毒4 ×108TU/ml（圖 4）。
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本文編號：2884575