目的:探討miR-373-3p表達變化對人子宮內膜癌HEC-1A細胞增殖和遷移生物學特性的影響,并對是否調控LAST2的表達做進一步研究,闡明miR-373-3p促進子宮內膜癌增殖及遷移的可能分子機制,為子宮內膜癌潛方法:構建miR-373-3p mimics和inhibitor慢病毒載體,分別感染至子宮內膜癌HEC-1A細胞中,采用實時熒光定量PCR法檢測感染后的HEC-1A細胞中miR-373-3p的表達變化,采用CCK-8法檢測miR-373-3p對細胞增殖能力的影響,采用劃痕觀察miR-373-3p對細胞間接遷移能力的影響,采用Transwell小室實驗分析miR-373-3p對細胞直接遷移能力的影響。通過進一步的生物信息學軟件預測miR-373-3p的潛在靶基因,并運用Western Blot實驗檢測上調或下調miR-373-3p的子宮內膜癌HEC-1A細胞中LAST2的表達,初步驗證miR-373-3p的作用靶點。結果:測序結果證實成功構建人miR-373-3p mimics和inhibitor慢病毒載體。miR-373-3p mimics和inhibitor分別成功上調和下調子宮內膜癌細胞株HEC-1A中miR-373-3p的表達,CCK-8結果顯示上調miR-373-3p的表達能夠明顯促進子宮內膜癌HEC-1A細胞的增殖能力,而沉默miR-373-3p的表達明顯抑制HEC-1A細胞增殖能力;劃痕和Transwell小室結果表明過表達miR-373-3p明顯促進子宮內膜癌HEC-1A細胞遷移能力,而低表達miR-373-3p則降低了HEC-1A細胞的遷移能力。根據(jù)生物信息學軟件靶基因預測提示LATS2是miR-373-3p靶基因之一,Western Blot實驗表明過表達miR-373-3p明顯抑制了子宮內膜癌HEC-1A細胞中LATS2蛋白表達,而低表達miR-373-3p明顯增高HEC-1A細胞LATS2蛋白表達。結論:miR-373-3p在子宮內膜癌HEC-1A細胞中可能發(fā)揮癌基因作用,過表達miR-373-3p能夠促進HEC-1A細胞的增殖和遷移能力,而低表達miR-373-3p則抑制HEC-1A細胞的增殖和遷移能力。miR-373-3p可能通過調控LATS2表達影響子宮內膜癌的發(fā)生發(fā)展,是一個治療子宮內膜癌的潛在靶點。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

miR-373-3p 對子宮內膜癌細胞 HEC-1A 增殖和遷移的影響 2018 屆碩士學位論文結果一．質粒的測序鑒定結果（1）重組的 GV369-pre-miRNA-373-3p mimics 質粒送 DNA 測序，測序結果見圖一，結果顯示：質粒測序結果正確，以下為部分測序結果,該序列為GV369-pre-miRNA-373-3p mimics 序列，表明 GV369-pre-miRNA-373-3mimics 慢病毒表達載體構建成功。

圖 2 GV280－ pre -miRNA-373-3p inhibitor 測序圖譜Figure 2 Sequence of GV280－ pre -miRNA -373-3p inhibitor plasmid二．慢病毒滴度的測定慢病毒三質粒系統(tǒng)共轉染 293T 細胞，轉染 48h 后在熒光顯微鏡下察 293T 細 胞 可 見 GFP 綠 色 熒 光 蛋 白 表 達 。 慢 病 GV369-pre-miRNA-373-3p mimics 的病毒滴度約為 4×108TU/ml，對應空慢病毒的病毒滴度約為 1 ×109TU/ml（圖 3）。慢病毒 GV280- pre -miRN-373-3p inhibitor 的病毒滴度約為 6×108TU/ml，對應空載慢病毒的病毒度約為 4 ×108TU/ml（圖 4）。

圖 2 GV280－ pre -miRNA-373-3p inhibitor 測序圖譜Figure 2 Sequence of GV280－ pre -miRNA -373-3p inhibitor plasmid毒滴度的測定毒三質粒系統(tǒng)共轉染 293T 細胞，轉染 48h 后在熒光顯T 細 胞 可 見 GFP 綠 色 熒 光 蛋 白 表 達 。 pre-miRNA-373-3p mimics 的病毒滴度約為 4×108TU/ml，病毒滴度約為 1 ×109TU/ml（圖 3）。慢病毒 GV280- prinhibitor 的病毒滴度約為 6×108TU/ml，對應空載慢病毒4 ×108TU/ml（圖 4）。
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本文編號：2884575