發(fā)布時間：2020-11-05 14:34

　　 目的卵巢癌在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中的發(fā)生率排在第三位,病死率位居首位,且發(fā)病率逐年上升。卵巢癌細胞活性較強,轉(zhuǎn)移速度快,缺乏特異性的癥狀和體征,早期準(zhǔn)確的分子標(biāo)志物預(yù)警較少,診斷困難。緊密連接蛋白家族claudins屬于膜蛋白家族,是構(gòu)成細胞緊密連接(tight junctions,TJs)的重要組成成分之一。claudins在多種疾病中均出現(xiàn)表達異常,且與子宮頸癌、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等婦科腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。目前研究認為claudin-6在卵巢癌病理組織中高表達,提示claudin-6可能在卵巢癌中有表達差異。通過檢測claudins的表達水平和細胞空間定位,可使其作為診斷和預(yù)測婦科惡性腫瘤預(yù)后的實用指標(biāo)。本課題擬從細胞水平探索claudin-6在卵巢癌中的表達水平,進一步揭示過表達claudin-6對卵巢癌細胞增殖、遷移、侵襲、凋亡等生物學(xué)特性的影響,從基因、蛋白水平驗證claudin對卵巢癌細胞進展轉(zhuǎn)歸的作用,為進一步探索claudin-6在卵巢癌進展中的作用和機制奠定基礎(chǔ)。方法1.熒光定量 PCR 法和 Western Blot 檢測 claudin-6 在 SKOV3、A2780 和OVCAR3卵巢癌細胞株,以及IOSE80卵巢正常上皮細胞株中的表達量:2.構(gòu)建過表達claudin-6的真核表達質(zhì)粒pEGFP-N1-CLDN6,并轉(zhuǎn)染SKOV3細胞;3.過表達claudin-6的卵巢癌SKOV3細胞的Western Blot鑒定與細胞免疫熒光鑒定;4.CCK8法和二維三維克隆形成實驗檢測claudin-6過表達對SKOV3細胞增殖能力的影響;5.細胞劃痕和Transwell實驗檢測claudin-6過表達對SKOV3細胞遷移、侵襲能力的影響;6.流式細胞儀檢測claudin-6過表達對SKOV3細胞凋亡的影響;結(jié)果1.claudin-6 在 A2780、SKOV3、OVCAR3 卵巢癌細胞株和 IOSE80 正常卵巢上皮細胞株中均有表達,在SKOV3細胞株中表達量較高。2.構(gòu)建并鑒定了表達EGFP熒光蛋白的pEGFP-N1-CLDN6質(zhì)粒,測序結(jié)果符合設(shè)計預(yù)期。3.在SKOV3細胞中轉(zhuǎn)染pEGFP-N1-CLDN6質(zhì)粒,G418篩選過表達細胞株,通過熒光顯微鏡挑取、Western blot法篩選出過表達claudin-6的SKOV3單克隆細胞株。細胞免疫熒光染色后,在細胞膜及核膜上可見claudin-6的分布。4.CCK8實驗、二維克隆形成實驗和三維克隆形成實驗顯示,過表達claudin-6的SKOV3細胞增殖速度、克隆形成能力較空載組細胞及未轉(zhuǎn)染細胞顯著增強。5.劃痕實驗及Transwell實驗結(jié)果顯示過表達claudin-6顯著增強SKOV3細胞的遷移和侵襲。6.流式細胞儀結(jié)果顯示過表達claudin-6對卵巢癌SKOV3細胞有凋亡抑制作用結(jié)論1.Claudin-6在SKOV3和OVCAR3卵巢癌細胞株中高表達,在A2780卵巢癌細胞株和IOSE80卵巢正常上皮細胞株中表達量較低;2.過表達claudin-6促進卵巢癌SKOV3細胞增殖;3.過表達claudin-6增強卵巢癌SKOV3細胞遷移和侵襲能力;4.過表達claudin-6對卵巢癌SKOV3細胞有凋亡抑制作用。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.31
【部分圖文】：

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間存在統(tǒng)計學(xué)差異（ＰＯ．ＯＯｌ），ｖｅｃｔｏｒ組與ｃｏｎｔｒｏｌ組之間無統(tǒng)訃學(xué)差異（／Ｍ）．?１２５）。??結(jié)果顯示ｃｌａｕｄｉｎ－６過表達組與ｖｅｃｔｏｒ組、ｃｏｎｔｒｏｌ組相比，ｃｌａｕｄｉｎ－６蛋白表達強??度明顯增加，如表２－２，圖２－５，圖２－６。??表２－２免疫熒光檢測ＳＫ０Ｖ３細胞外組ｃｌａｉｉｄｍ－６的灰達水?＇卜??Ｔａｂｌｅ?２－２?Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｃｌａｕｄｉｎ－６?ｉｎ?ＳＫＯＶ３?ｃｅｌｌｓ?ｏｆ??ｃｌａｕｄｉｎ－６?ｇｒｏｕｐ，?ｖｅｃｔｏｒ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ．??４９??

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【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 白晶;李愛軍;;宮頸癌干細胞的研究進展[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;2013年05期

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本文編號：2871774