發(fā)布時(shí)間：2019-07-29 12:07

【摘要】：為了評(píng)估牛支原體08M株作為牛支原體滅活疫苗候選株的可能性,攻毒組的每頭犢牛氣管注射10 mL 08M(1×109CCU/mL)新鮮菌液,對(duì)照組氣管注射10 mL 0.15 mol/L pH 7.2的PBS。在不同時(shí)間采集鼻拭子用realtime PCR進(jìn)行排菌檢測(cè),采集血清檢測(cè)感染抗體,攻毒后第28天進(jìn)行剖檢,觀察肺部病變并進(jìn)行病原分離。同時(shí),以牛支原體08M培養(yǎng)物為抗原,混合MONTANIDEISA 201 VG,分別制備抗原質(zhì)量濃度為0.46和1.48 mg/mL兩個(gè)劑量的免疫原,以每頭牛2 mL的劑量,間隔28 d頸部皮下注射犢牛2次,同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組,二免后第28天進(jìn)行攻毒試驗(yàn),方法同致病性試驗(yàn),免疫后在不同時(shí)間采集血清,檢測(cè)血清抗體。致病性試驗(yàn)結(jié)果顯示,攻毒組動(dòng)物在攻毒后第4~14天進(jìn)行間歇性排菌,第7天可以檢測(cè)到感染抗體,剖檢后觀察到攻毒組牛肺部發(fā)生明顯的病變并從肺部病變組織中分離到牛支原體。免疫原性試驗(yàn)結(jié)果顯示,2種質(zhì)量濃度的免疫原免疫動(dòng)物后均能產(chǎn)生較高水平的血清抗體,攻毒后所有動(dòng)物均進(jìn)行間歇性排菌,免疫組動(dòng)物血清抗體水平無明顯變化,對(duì)照組動(dòng)物一免后第14天血清抗體達(dá)到最高水平,剖檢后所有動(dòng)物肺部均有病變且都能夠分離出牛支原體。結(jié)果表明,牛支原體08M株具有較強(qiáng)的毒力和良好的免疫原性,本試驗(yàn)中用牛支原體08M株制備的滅活疫苗免疫犢牛后可以使牛體產(chǎn)生很好的免疫反應(yīng)但卻沒有保護(hù)作用。
【圖文】：

中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)第47卷ELISA效價(jià)/％ELISAtitres肺嚴(yán)重?fù)p傷，肺與胸腔粘連（見圖2A），肺出血（見圖2B），肺表面形成白色、單個(gè)分布的結(jié)節(jié)充斥著干酪樣物質(zhì)（見圖2C），癥狀符合犢牛牛支原體肺炎癥狀，對(duì)照組動(dòng)物肺部未見到病變（見圖2D）。2.1.5病原分離分別取肺部組織進(jìn)行病原分離，攻毒組的3頭牛肺組織中均能分離出牛支原體，接種于改良Thiaucourt’s固體培養(yǎng)基出現(xiàn)牛支原體典型的紐扣狀菌落（見圖3）。用牛支原體特異性PCR進(jìn)行檢測(cè)，攻毒組的3頭牛PCR檢測(cè)結(jié)果均為陽性，對(duì)照組的2頭牛均為陰性（見圖4）。2.2免疫試驗(yàn)2.2.1抗原滅活檢驗(yàn)抗原滅活前，用牛支原體特異性PCR方法可以檢測(cè)到目的片段�？乖瓬缁詈�，連續(xù)3次進(jìn)行傳代培養(yǎng)未見牛支原體生長(zhǎng)，利用牛支原體特異性PCR方法對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果為陰性（見圖5），說明抗原已被完全滅活。2.2.2攻毒試驗(yàn)攻毒后，免疫組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均未表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，排菌檢測(cè)結(jié)果顯示各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在攻毒后第4～14天進(jìn)行間歇性排菌，剖檢后各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺部均有病變，且都能夠分離出牛支原體。圖1攻毒組和對(duì)照組攻毒前后的血清抗體水平Fig.1Theserumantibodylevelsofthechallengedgroupandthecontrolgroupbeforeandafterchallenge攻毒后時(shí)間/WWeekspost－challenge圖3肺組織中分離出的牛支原體的菌落形態(tài)40×Fig.3ThecolonymorphologyofMycoplasmabovisisolatedfromlungtissue圖4牛支原體的PCR擴(kuò)增Fig.4PCRamplificationofMycoplasmabovisM：DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1～3：攻毒組的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；4、5：對(duì)照組的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；6：陽性對(duì)照M：DL10000DNAMarker；1—3：PCRproductsofthechallengegro；up4，5：PCRproductsofthecontrolgr

?ELISA效價(jià)/％ELISAtitres肺嚴(yán)重?fù)p傷，肺與胸腔粘連（見圖2A），肺出血（見圖2B），肺表面形成白色、單個(gè)分布的結(jié)節(jié)充斥著干酪樣物質(zhì)（見圖2C），癥狀符合犢牛牛支原體肺炎癥狀，對(duì)照組動(dòng)物肺部未見到病變（見圖2D）。2.1.5病原分離分別取肺部組織進(jìn)行病原分離，攻毒組的3頭牛肺組織中均能分離出牛支原體，接種于改良Thiaucourt’s固體培養(yǎng)基出現(xiàn)牛支原體典型的紐扣狀菌落（見圖3）。用牛支原體特異性PCR進(jìn)行檢測(cè)，攻毒組的3頭牛PCR檢測(cè)結(jié)果均為陽性，對(duì)照組的2頭牛均為陰性（見圖4）。2.2免疫試驗(yàn)2.2.1抗原滅活檢驗(yàn)抗原滅活前，用牛支原體特異性PCR方法可以檢測(cè)到目的片段。抗原滅活后，連續(xù)3次進(jìn)行傳代培養(yǎng)未見牛支原體生長(zhǎng)，利用牛支原體特異性PCR方法對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果為陰性（見圖5），說明抗原已被完全滅活。2.2.2攻毒試驗(yàn)攻毒后，免疫組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均未表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，排菌檢測(cè)結(jié)果顯示各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在攻毒后第4～14天進(jìn)行間歇性排菌，剖檢后各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺部均有病變，且都能夠分離出牛支原體。圖1攻毒組和對(duì)照組攻毒前后的血清抗體水平Fig.1Theserumantibodylevelsofthechallengedgroupandthecontrolgroupbeforeandafterchallenge攻毒后時(shí)間/WWeekspost－challenge圖3肺組織中分離出的牛支原體的菌落形態(tài)40×Fig.3ThecolonymorphologyofMycoplasmabovisisolatedfromlungtissue圖4牛支原體的PCR擴(kuò)增Fig.4PCRamplificationofMycoplasmabovisM：DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1～3：攻毒組的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；4、5：對(duì)照組的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；6：陽性對(duì)照M：DL10000DNAMarker；1—3：PCRproductsofthechallengegro；up4，5：PCRproductsofthecontrolgro；u6p：Positivec
【作者單位】： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2015BAD12B02) 國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31402223,31602088) 國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2016YFD0500907) 甘肅省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(1204NKCA071) 蘭州市城關(guān)區(qū)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012-2-1) 國(guó)家肉牛牦牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(CARS-38)
【分類號(hào)】：S852.62

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1 劉R，

本文編號(hào)：2520495