發(fā)布時(shí)間：2019-07-26 08:18

【摘要】：人們已經(jīng)開(kāi)始廣泛關(guān)注鉛對(duì)腎臟的毒性作用。目前,鉛的毒性作用機(jī)理還不很清楚,驅(qū)鉛藥物的效果也不很理想。探索一種天然、低風(fēng)險(xiǎn)、殘留少,有效預(yù)防治療動(dòng)物鉛中毒的藥物,可為防治鉛中毒提供了新的思路和途徑。研究目的:本試驗(yàn)通過(guò)研究復(fù)方板藍(lán)根多糖對(duì)鉛致大鼠腎小管上皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用及對(duì)細(xì)胞凋亡線粒體通路的影響作用,探索復(fù)方板藍(lán)根多糖對(duì)鉛腎毒性的保護(hù)作用及其對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用機(jī)理。研究方法:(1)在體外培養(yǎng)的NRK細(xì)胞中,通過(guò)分別加入不同濃度的復(fù)方板藍(lán)根多糖(終濃度分別為0、0.5、1、2、5、10、20、50、100μg/m L)以及不同濃度的醋酸鉛(終濃度分別為0、0.5、1、2、5、10、20、50μmol/L)于37℃孵育24 h后,采用MTT法檢測(cè)復(fù)方板藍(lán)根多糖和醋酸鉛對(duì)細(xì)胞相對(duì)活力的影響。(2)在此基礎(chǔ)上,選用50μmol/L醋酸鉛和2、10、50μg/m L復(fù)方板藍(lán)根多糖,進(jìn)行分組試驗(yàn),通過(guò)采用WST-1法檢測(cè)超氧化物歧化酶(SOD)活性,紫外比色法檢測(cè)細(xì)胞中總谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的活性,顯色底物法檢測(cè)細(xì)胞中過(guò)氧化氫酶(CAT)的活性,以及硫代巴比妥酸(TBA)法檢測(cè)細(xì)胞中丙二醛(MDA)的含量變化;熒光探針DCFH-DA法檢測(cè)細(xì)胞中活性氧(ROS)的含量;用熒光Hoechst33258染色法、Annexin V-FITC/PI雙染法和流式細(xì)胞儀檢測(cè)復(fù)方板藍(lán)根多糖對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制作用。并用Western-Blot檢測(cè)Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2和P53蛋白的表達(dá)量變化。結(jié)果:在本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的0.1、0.2、0.5、1、5、10、20、50、100μg/m L的復(fù)方板藍(lán)根多糖中,當(dāng)多糖濃度達(dá)到50~100μg/m L時(shí),對(duì)NRK細(xì)胞的生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用;醋酸鉛可抑制NRK細(xì)胞增殖。當(dāng)其濃度大于1μmol/L時(shí),即對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生顯著的抑制作用,且具有明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系,當(dāng)濃度達(dá)到10μmol/L時(shí),可使細(xì)胞的存活率低于50%;50μg/m L多糖劑量組可明顯降低醋酸鉛對(duì)細(xì)胞的抑制作用;2、10、50μg/m L的復(fù)方板藍(lán)根多糖,均可使染鉛組細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT的活性升高,同時(shí)降低細(xì)胞內(nèi)的MDA含量。尤其是對(duì)GSH-Px和MDA的作用更加明顯;復(fù)方板藍(lán)根多糖濃度達(dá)2μg/m L以上時(shí),可顯著地減少染鉛NRK細(xì)胞內(nèi)ROS含量及凋亡率,且具有一定的劑量依賴性;復(fù)方板藍(lán)根粗多糖可通過(guò)上調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-2,下調(diào)促凋亡蛋白P53、Bax蛋白的表達(dá)量,阻止Procaspase-9和Procaspase-3的激活,從而阻斷線粒體凋亡通路的激活和細(xì)胞凋亡的發(fā)生。結(jié)論:復(fù)方板藍(lán)根多糖對(duì)NRK細(xì)胞具有一定的促生長(zhǎng)作用;同時(shí),可有效降低鉛對(duì)NRK細(xì)胞誘導(dǎo)的氧化損傷作用;其作用機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)抑凋亡蛋白Bcl-2,下調(diào)促凋亡蛋白P53、Bax蛋白的表達(dá),減少細(xì)胞的凋亡而實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S853.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 陳冬金;孫世坤;張紅云;;復(fù)方板藍(lán)根提取工藝與靛玉紅含量測(cè)定[J];福建畜牧獸醫(yī);2011年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 閆峻;板藍(lán)根和亞麻籽化學(xué)成分研究及活性評(píng)價(jià)[D];吉林大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張淑芳;復(fù)方板藍(lán)根多糖對(duì)鉛致NRK細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)理研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

，

本文編號(hào)：2519446