發(fā)布時間：2019-07-08 19:52

【摘要】：自2015年3月份以來,山東、江蘇、安徽、河南等地區(qū)的商品肉鴨中發(fā)生了以雛鴨的生長發(fā)育緩慢,上下鴨喙萎縮,舌頭腫脹,僵硬及向外伸出彎曲綜合病癥,該病的致死率較低,發(fā)病率可達15%-45%,采食量嚴重下降,感染后期在抓捕時腿部及翅膀的骨骼容易造成骨折,給養(yǎng)殖戶造成重大的經(jīng)濟損失,該病被命名為“鴨大舌-短喙綜合征”。2015年12月,山東菏澤、肥城地區(qū)某養(yǎng)殖規(guī)模各大約為6500只鴨場鴨群中出現(xiàn)類似鴨大舌-短喙綜合征癥狀,我們對送檢病例進行了研究。本研究通過自然發(fā)病鴨的流行病學調(diào)查、臨床癥狀、病理組織學檢查、細菌培養(yǎng)、血涂片觀察、血清生化指標檢測、PCR檢測、病毒分離增殖、病毒純化、電鏡負染、透射超薄切片觀察、高通量測序和人工致病試驗等方面進行研究。通過送檢自然感染鴨的剖檢觀察肝臟邊緣有灶狀壞死,肺臟充血、腫脹鴨舌向外伸出,僵硬。血涂片觀察發(fā)現(xiàn)血液中出現(xiàn)大量異嗜性粒細胞和淋巴細胞;病理組織學觀察發(fā)現(xiàn)鴨舌、喙、肝臟以出現(xiàn)以淋巴細胞為主的炎性浸潤,肝臟、心肌及胰腺發(fā)生壞死,肺臟和腎臟出血,其他組織出現(xiàn)不同病理變化;通過PCR檢測鴨病毒性肝炎病毒、鴨坦布蘇病毒、鴨呼腸孤病毒均呈陰性,鵝細小病毒(GPV)和鴨圓環(huán)病毒(DuCV)均呈雙陽性;血清生化指標檢測分析谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、總膽紅素、直接膽紅素、總蛋白等生化指標于健康鴨比較差異顯著或差異極顯著;細菌學檢測結(jié)果為陰性;通過PCR方法對GPV和DuCV的自然感染鴨的流行調(diào)查分析,發(fā)現(xiàn)自然感染鴨中GPV和DuCV的共感染比例高達40%。通過對病料的無菌分離,取病鴨的肝、舌組織,經(jīng)尿囊腔按0.2ml接種量接種9d鴨胚后,15d收集鴨胚尿囊液。通過鴨胚胚胎的剖檢觀察到感染組鴨胚胚胎的胸肌、皮下及心臟彌漫性出血,肝臟壞死,對照組正常;病理組織學觀察發(fā)現(xiàn)感染組的心肌細胞出現(xiàn)局部性或彌漫性出血,心肌細胞輕微空泡變性,肝臟的中央靜脈周圍出現(xiàn)彌漫性嗜酸性粒細胞浸潤;正常對照組的肝臟和心臟未出現(xiàn)病變。通過PCR檢測鴨胚尿囊液GPV和DuCV均呈雙陽性。通過對鴨胚尿囊液中病毒經(jīng)蔗糖梯度超速離心,純化病毒。純化后病毒經(jīng)電鏡負染觀察到有的病毒粒子呈直徑為20-22nm或14-20.5nm,六角形、球形或二十面體,無囊膜的完整病毒粒子。將純化后病毒提取DNA,經(jīng)全基因擴增,通過高通量測序證實病毒粒子為DuCV。通過核苷酸序列分析結(jié)果表明,該GPV毒株與與中國GPV型QH15毒株的親緣關(guān)系最近,其同源性為99.8%,與其他毒株的同源性大部分在93.5%~99.8%。利用高通量測序手段獲得DuCV的全基因,并命名為SDFC12毒株(GenBank:KY328304.1),DuCV的毒株的SDFC12株與中國DU103株的親緣關(guān)系最近,其同源性為99.3%,與其他毒株的同源性在29.2%~99.3%。對感染鴨胚胚胎的肝臟透射電鏡觀察結(jié)果顯示,肝臟內(nèi)有大量的六角形或球形,直徑為14-22nm的無囊膜完整病毒粒子存在。通過人工接種回歸動物試驗,剖檢觀察感染組的鴨舌略長且彎曲,肝臟壞死,胸腺出血,脾臟、法氏囊及胸腺比對照組重量減輕,免疫器官指數(shù)明顯下降。實驗動物的病理組織學觀察及血涂片觀察與臨床自然感染鴨基本一致。實驗動物的血清生化指標檢測分析試驗組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、堿性磷酸酶、總膽紅素總蛋白等生化指標與對照組相比差異顯著或差異極顯著。通過PCR檢測實驗動物的GPV和DuCV均呈雙陽性。通過本研究結(jié)果表明,鴨大舌-短喙綜合征與GPV和DuCV共感染相關(guān),經(jīng)電鏡負染觀察到鵝細小病毒和鴨圓環(huán)病毒的病毒形態(tài)。經(jīng)病理組織學檢測、血清生化指標檢測發(fā)現(xiàn)鴨大舌-短喙綜合征引起鴨的肝臟的膽管上皮腫脹、硬化性膽管炎、肝硬化及肝壞死,引起鴨的胰腺炎。經(jīng)高通量測序,驗證鴨圓環(huán)病毒的存在,并獲得其全基因序列。通過本研究,有助于鴨大舌-短喙綜合征的致病機制研究,有助于防治鴨大舌-短喙綜合征,有助于養(yǎng)鴨行業(yè)的健康發(fā)展。
文內(nèi)圖片：
圖片說明：病鴨的剖檢病變Fig.1NecropsylesionsoftheducksA、D：病鴨的鴨舌舌頭向外伸出、僵硬、腫脹；B：肝臟邊緣有灶狀壞死；C：肺臟充血、腫脹A.D:Thetongueofthesickduckisstretchedout,stiffandswollen;B.Liveredgefocalnecrosis;C:Lungcongestion,
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：S858.32

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本文編號：2511833