目的探索神經(jīng)限制性沉默元件(NRSE/RE-1)序列與小鼠胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化的關(guān)系。方法應(yīng)用序貫誘導(dǎo)法定向誘導(dǎo)鼠胚胎干細(xì)胞分化為神經(jīng)細(xì)胞,基因芯片篩選出的11種含NRSE/RE-1序列的神經(jīng)相關(guān)基因,實(shí)時定量PCR測定其在分化過程中的表達(dá)。結(jié)果誘導(dǎo)分化后的胚胎干細(xì)胞表達(dá)多種成熟神經(jīng)元標(biāo)志,11種含NRSE/RE-1序列基因隨誘導(dǎo)分化的進(jìn)程表達(dá)量升高。結(jié)論鼠胚胎干細(xì)胞可通過序貫誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞,NRSE/RE-1序列可能是胚胎干細(xì)胞向神經(jīng)元誘導(dǎo)分化的主要調(diào)控位點(diǎn)。

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【部分圖文】：

圖4，分化第十天細(xì)胞高倍鏡下形態(tài)

一個細(xì)長突起，類似多級神經(jīng)元(圖3)。高倍鏡下可見一些突起末端與其他細(xì)胞突起接觸，末端膨大，類似突觸樣結(jié)構(gòu);還有的細(xì)胞突起末端膨大，類似生長端樣結(jié)構(gòu)(圖4)。圖l，未分化ESCs光鏡圖左圖，生長于飼養(yǎng)層上的ESCs，呈集落樣生長，細(xì)胞排列緊密，集落邊界清楚(40x)右圖，堿性磷酸....

圖2，分化第四天細(xì)胞低倍鏡下形態(tài)

出現(xiàn)一定的形態(tài)變化，細(xì)胞呈多角形從集落向外伸展，第4天起開始出現(xiàn)明顯形態(tài)變化，部分細(xì)胞仍聚集成集落，其周圍的細(xì)胞逐漸伸出突起，向四周伸展，整個培養(yǎng)中細(xì)胞形態(tài)的改變并不同時，并不是所有的細(xì)胞形態(tài)都是一致的(圖2);隨后，分化細(xì)胞突起逐漸變長、變細(xì)，與鄰近分化細(xì)胞交織成網(wǎng)狀。中間集落....

圖3，分化第十天細(xì)胞低倍鏡下形態(tài)

細(xì)胞團(tuán)增大后隨每次換液逐漸脫落。貼壁分化細(xì)胞大多為雙極細(xì)胞，胞體圓亮，兩極各有一細(xì)長突起。也有小部分分化細(xì)胞胞體成多邊形，有多個短突起，僅有一個細(xì)長突起，類似多級神經(jīng)元(圖3)。高倍鏡下可見一些突起末端與其他細(xì)胞突起接觸，末端膨大，類似突觸樣結(jié)構(gòu);還有的細(xì)胞突起末端膨大，類似生長....

圖6，n種基因Real一tirnePCR的檢測結(jié)果

在分化第4天表達(dá)最高，隨分化過程表達(dá)量逐漸下降，到D10為D4的1/4;成熟神經(jīng)元標(biāo)志基因NSE的表達(dá)隨誘導(dǎo)分化升高，即第10天為最高;其他n種待測基因的表達(dá)水平D10與DO相比都有不同程度的增長(見圖6)。進(jìn)一步分析，通過計(jì)算D4、D10時間點(diǎn)與DO的相對增長比率(見圖7)，可....

本文編號：4041991