目的:研究TGF-β1/Smad3信號(hào)通路對(duì)調(diào)控小鼠成釉細(xì)胞Amelotin啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響。方法:首先利用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)分析TGF-β1和Smad3對(duì)小鼠Amelotin啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響;然后利用染色體免疫共沉淀(ChIP)方法觀察Smad3與Amelotin啟動(dòng)子特異性結(jié)合位點(diǎn)之間的相互作用;最后利用基因定點(diǎn)突變構(gòu)建Smad3結(jié)合位點(diǎn)突變型Amelotin啟動(dòng)子,并用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)分析TGF-β1和Smad3對(duì)野生型和突變型Amelotin啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響。結(jié)果:TGF-β1和Smad3作用于成釉細(xì)胞后,Amelotin啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性明顯增強(qiáng)(P<0.05);Smad3與Amelotin基因啟動(dòng)子的"AGAC"及"GTCT"序列有相互作用;將Amelotin啟動(dòng)子上Smad3結(jié)合位點(diǎn)特征性序列突變?yōu)?TGTC"和"GACA"后,TGF-β1和Smad3對(duì)突變型Amelotin基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響較野生型明顯減弱(P<0.05)。結(jié)論:TGF-β1/Smad3信號(hào)通路通過(guò)作用于Smad3結(jié)合位點(diǎn)調(diào)控成釉細(xì)胞Amelotin基因啟動(dòng)子...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1. 1 主要材料
    1. 2 細(xì)胞培養(yǎng)
    1. 3 TGF-β1、T204D、Smad3 對(duì)小鼠Amelotin啟動(dòng)子(-1463 ~ + 196) 轉(zhuǎn)錄活性影響的觀察
        1. 3. 1 實(shí)驗(yàn)分組和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        1. 3. 2 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)
    1. 4 Ssmad3 與Amelptin啟動(dòng)子特異性結(jié)合位間的相互作用觀察
    1. 5 小鼠Amelotin基因啟動(dòng)子特征性序列的定點(diǎn)突變
    1. 6 雙熒光素酶報(bào)告檢測(cè)TGF-β1 和Smad3 對(duì)野生型和突變型Amelotin基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響
    1. 7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2. 1 TGF-β1、T204D及Smad3 對(duì)小鼠Amelotin基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響
    2. 2 Smad3 與Amelotin啟動(dòng)子特異性結(jié)合位點(diǎn)之間的相互作用
    2. 3 小鼠Amelotin基因啟動(dòng)子特征性序列的定點(diǎn)突變及熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建
    2. 4 TGF-β1、Smad3 對(duì)野生型和突變型Amelotin基因啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的影響
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